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生物制品总复习整理
一、《生物制品学》有关的概念
1、什么是生物制品(biologicalproducts)
指以微生物、植物、动物体作为起始材料,采用现代生物技术或手段人为地创造条件,生产某些初级代谢产物或次级代谢产物,制成用以诊断、治疗或预防疾病或达到某种特殊医学目的的医药用品,通称生物制品.
2、什么是外毒素?
什么是类毒素?
外毒素:
一些细菌在培养过程中产生的毒性物质。
类毒素:
外毒素经化学法处理后,失去毒力作用,而保留抗原性,这种类似毒
素而无毒力作用的物质称为类毒素。
制剂的特点:
吸收慢,刺激时间长,抗体滴度高,免疫效果好。
3、高免疫血清
指由特定抗原免疫动物(如,马),分离血浆或血清,精制而成的生物制品。
4、等电点沉淀法(Isoelectricpointprecipitation)
是利用蛋白质在等电点时溶解度最低,而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离的方法。
5、质量管理(quality management,QM)
确定质量方针、目标和职责并在质量管理体系中通过诸如质量策划、质量控制、质量保证和质量改进使其实施的全部管理职能的所有活动。
6、质量控制(quality control,QC)
为达到质量要求所采取的作业技术或活动。
7、什么是血液制品(bloodproducts)?
指由健康人的血浆或特异免疫人血浆,经分离、提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分,以及血液有形成分统称为血液制品。
用于治疗或被动免疫预防。
8、什么是冷沉淀(cryoprecipitate)?
又称冷沉淀抗血友病因子。
将约200ml新鲜冷冻血浆在1~6摄氏度复融后留下冰渣状不溶性成分,迅速高速离心,移去上层血浆,剩下的白色沉淀物即为“冷沉淀”。
用于治疗甲型血友病、血管性血友病、先天性或获得性纤维蛋白原缺乏症及因子XⅢ缺乏症病人。
9、什么是疫苗?
疫苗是针对疾病的病原微生物或其蛋白质(多肽、肽)、多糖或核酸,以单体或通过载体经预防接种进入人体后,能诱导产生特异性体液免疫和细胞免疫,从而使机体获得预防该疾病的免疫力。
10、什么是基因工程疫苗(engineeringvaccine)?
指通过基因工程方法或分子克隆技术,分离出病原的保护性抗原基因,将其转入原核或真核表达系统,使其表达出该病原的保护性抗原,制成疫苗;或者将病原的毒力相关基因删除掉,使成为不带毒力相关基因的基因缺失苗。
●基因工程疫苗类型
基因工程亚单位疫苗
基因工程载体疫苗
蛋白质工程疫苗
基因缺失疫苗
基因疫苗
基因重配疫苗
11、什么是多价疫苗(polyvalentvaccine)?
利用同一种微生物(菌)毒株的多个血清型(菌)毒株的增殖培养物制备的疫苗。
能使接种者获得完全的保护。
12、什么是联合疫苗(mixedvaccine)?
由不同种病原体的增殖培养物,按免疫学原理和方法组合而成的疫苗。
12、微胶囊疫苗 (microencapsulatedvaccine)
也称可控缓释疫苗,是指使用微胶囊技术将特定抗原包裹后制成的疫苗,是一种使用现代材料和工艺技术改进现有疫苗的剂型,简化免疫程序提高免疫效果的新型疫苗。
13、什么是佐剂?
是与抗原一起注射或预先注入机体后,能够增强机体对抗原的特异性免疫应答或改变机体免疫应答类型的物质。
它应该无毒、安全,并且稳定。
种类:
●生物性:
如卡介苗
●无机化合物性:
如氢氧化铝
●人工合成类:
如胞苷酸,脂质体
●免疫刺激复合物
●CpG等是新型的佐剂
弗氏佐剂(Freundadjnvant)是常用的佐剂
--不完全弗氏佐剂
●油剂(石蜡油或植物油)
●乳化剂(羊毛脂或吐温80)
--完全弗氏佐剂(CFA)
●不完全弗氏佐剂(IFA)+死卡介苗
14、什么是冷链?
冷链是指为保证疫苗从生产企业到基层接种单位运转过程中的质量而装备的多环节链式储存、运输冷藏设施、设备。
冷链系统:
则是在冷链设备的基础上加入管理因素,即人员、管理措施和保障的工作体系。
是确保生物制品质量和效力的重要手段。
15、什么是细胞因子(cytokine,CK)?
指由免疫细胞和某些非免疫细胞经剌激而合成、分泌的一类具有调节细胞生理功能、参与免疫应答和介导炎症反应等多种生物学效应的小分子或中等分子量的可溶性多肽或糖蛋白;是不同于免疫球蛋白和补体的又一类免疫分子。
16、白细胞介素(interleukin,IL)
由单核-巨噬细胞、T淋巴细胞所分泌的某些非特异性发挥免疫调节和在炎症反应中起作用的因子称为白细胞介素。
17、干扰素(interferon,IFN)
指抵抗病毒的感染,干扰病毒复制的一类细胞因子。
18、什么是血液代用品(BloodSubstitute)
指具有携O2功能、维持血液渗透压和酸碱平
衡及扩充血容量的人工制剂。
二、重大事件
●18世纪,E.Jenner的牛痘苗问世;
●20世纪,A.Fleming,H.Florey,EB.Chain的青霉素问世;
●1919年,成立第一家生物制品研究机构中央防疫处,后来发展演变为北京生
物制品研究所;
●1972年,Berg创立了DNA体外重组技术;它标志着基因工程技术开始和具
有划时代意义和战略价值的现代生物技术形成。
●1975年,G.Kohler和C.Milstein单克隆抗体技术诞生;
●1982年,FDA批准第一个基因工程产品人胰岛素上市
●1987年,FDA批准重组乙肝疫苗用于预防乙型肝炎。
●1993年,我国第一个独创的一类新药重组人干扰素α-1b,批准生产;
三、基础知识
1、我国生物制品最高学术咨询组织是:
生物制品标准化委员会
负责制定和审查《中国生物制品规程》
2、2005年版《中华人民共和国药典》将《生物制品规程》并入药典,设为药
典三部
3、现代生物技术的核心技术
基因工程技术
4、生物制品学的理论基础和技术基础
理论基础:
微生物学、免疫学、生物化学、分子生物学;
技术基础:
现代生物技术
5、生物制品行业的特点:
投资大
回报高
风险大
周期长
低污染
6、生物制品的种类
有初级代谢产物(蛋白质、有机酸、酶制剂、多糖)
次级代谢产物(抗生素等)
生物转化产品(甾体化合物等的转化物)
酶反应物(如6-氨基青霉烷酸的酰化反应)
7、简述一般生物制品制备的基本过程。
①原料的选择和预处理
②组织及细胞的破碎
③提取
④分离纯化
⑤干燥与保存
⑥制剂
8、制备生物制品的原材料来源于:
天然的生物材料
工程菌或细胞
9、原料的保存方法
●冷冻法:
该方法适用于所有生物原料。
常用-40℃速冻。
●有机溶剂脱水法:
常用的有机溶剂是丙酮。
该法适用于原料少而价值高、有机溶剂对活性物质没有破坏作用的原料,如脑垂体等。
●防腐剂保鲜法:
该法适用于液体原料,如发酵液、提取液等。
10、破碎细胞常用的方法:
(1)机械法
研磨法
组织捣碎器法
匀浆器法
(2)物理学法
反复冻融法
冷热交替法
超声波破碎法
压榨法
(3)化学方法
自溶法
溶胀法
酶解法
有机溶剂处理法
11、提取生物制品过程中可采取的保护措施包括:
①采用缓冲系统
②添加保护剂
③抑制水解酶的作用
12、膜过滤技术
有微滤、超滤和反渗透等;
微滤:
用于分离细胞、细胞碎片、包含体和蛋白质沉淀物等固体颗粒;
超滤:
用于浓缩蛋白质、多糖和核酸等大分子物质;
反渗透:
用于脱去抗生素、氨基酸等小分子中的水分。
13、盐析的原理
①盐离子与蛋白质分子争夺水分子,降低了用于溶解蛋白质的有效水量,减弱了蛋白质的水合程度,破坏了蛋白表面的水化膜,导致蛋白质溶解度下降;
②盐离子电荷的中和作用,使蛋白质溶解度下降;
③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水分子的极化,使水活度降低。
14、生物制品分离纯化常用的方法
离心法、沉淀法、过滤法、电泳法、色谱法。
15、沉淀蛋白质的方法
盐析法、有机溶剂沉淀法、等点电沉淀法、靶物质结合沉淀法。
16、按分子大小不同分离纯化蛋白质的方法
主要包括:
超滤法、透析法、凝胶过滤法、超离心法。
其中,凝胶过滤可用于样品的分级分离和脱盐。
17、按分子所带电荷不同分离纯化蛋白质的方法
主要包括:
离子交换法、电泳法、等电聚焦法。
18、生物制品的冷冻保存
为避免生物制品的生物活性物质遭受破坏需加入一类物质,这类物质被称作保护剂。
19、制备生物制品菌毒株、细胞采用的系统
●原始种子(细胞)批(库)
●主种子(细胞)批(库)
●工作种子(细胞)批(库)
20、GMP
●GMP的内容
①人员;
②硬件:
即药品生产企业的厂房设施、设备、原材料等;
③软件:
组织、制度、工艺、操作、卫生标准、记录、教育等管理规定。
●GMP的基本点
保证生产药品符合法定质量标准,保证药品质量的均一性;防止生产中药品的混批、混杂、污染和交叉污染。
21、生物制品必须具备两个重要的条件
安全有效
22、生物制品的检定一般分为
●理化检定
●安全性检定
●效力检定
23、生物制品生物活性(效价)测定
●体内生物活性测定
●体外生物活性测定
标准品采用国际或国家标准品,或经国家鉴定机构认可的参考品,表明活性单位。
是保证生物制品的有效性的重要手段
24、基因工程产品的质量控制主要包括?
●产品的鉴定
●纯度
●活性
●安全性
●稳定性
●一致性
25、生物制品的保存
液态保存
低温下保存
液态蛋白质样品在-10~-20℃以下冰冻保存比较理想。
超低温保存
高浓度保存
在稳定pH条件下保存
在保护剂下保存
真空保存
26、人源性生物制品的特点
●效价高、疗效可靠
●安全性较好、不易产生副反应
●稳定性好
●资源有限,研究意义重大
27、血液制品的作用
血液制品是一种特殊的药品,具有不可替代性与不可比拟性。
来源特殊:
人源制品,以健康人血或血浆作为原料;
效果特殊:
补充血液中的缺失成分,效果切实可靠;
安全性好:
极少甚至没有毒副反应,家庭用药;
性状稳定:
液体状态的血清白蛋白可以室温保存,冷藏保存的有效期可达5年以上;
28、临床常用的红细胞制剂
浓缩红细胞
洗涤红细胞
冰冻红细胞
添加液红细胞
29、全血(wholeblood)
由使用不同抗凝剂采集人体内血液到采血袋内,并保存于2~8℃制得。
30、洗涤红细胞的特点:
是全血经离心去除血浆和白膜层,再用无菌生理盐水反复洗涤三遍以上制备而成的红细胞。
仅含<1%的血浆蛋白和<20%的白细胞。
31、白细胞制剂的制备技术:
单采粒细胞技术。
32、血浆制品
新鲜冰冻血浆(FFP)
普通冰冻血浆(FP)
新鲜液体血浆(FLP)
冷沉淀(Cryoprecipitata)
33、新鲜冰冻血浆(FFP)
制备过程中自采血到血浆冰冻的时间不超过6或8小时。
能有效保存血浆中各种生物活性成分的功能,含有全部凝血因子。
34、新鲜液体血浆(FLP)
含有血浆中各种生物活性成分,含有全部凝血因子。
保存温度4±2℃,24小时内输注。
35、冷沉淀的主要有效成分
有效成分主要是凝血因子Ⅷ和纤维蛋白原,其它成分还有纤维粘连蛋白和XIII因子
36、血浆蛋白制品的原料
血浆。
由单采血浆站采集供应
37、制备血浆蛋白常用的方法
低温乙醇法、
Nitschmann-Kistler法、
全层析法、
低温乙醇+层析法法。
38、免疫球蛋白类制品
常用的种类:
肌肉注射免疫球蛋白制剂
静脉注射免疫球蛋白制剂(IVIG)
特异性免疫球蛋白制剂
IVIG的质量控制主要包括IgG的完整性、抗补体活性(ACA)、多聚体含量、杂蛋白含量、抗体效价、病毒安全性等方面。
39、目前,国际上人血免疫球蛋白制品的主导产品是:
静脉注射免疫球蛋白制剂
40、凝血因子Ⅷ制剂的临床应用:
主要用于治疗甲型血友病
41、血液制品病毒的灭活/除去的方法:
①巴氏消毒法
②有机溶剂结合表面活性剂(S/D)
③β-丙内酯/UV法
④低pH法
⑤干热法
⑥美蓝/荧光照射法
⑦膜过滤法
⑧层析法
⑨纳米膜过滤法
42、动物源性生物制品的特点
●生理活性强,疗效确实
●原料来源丰富;
●制品种类多;
●要重视安全性。
43、动物源性生物制品的种类
①动物源性酶类生物制品的种类有:
消炎酶类、抗肿瘤酶类、促消化酶类、解毒酶类、溶栓酶类
②明胶是胶原的水解产物,是一种无脂肪的高蛋白,且不含胆固醇;是一种天然营养型的食品增稠剂;还是一种强有力的保护胶体;
③消炎酶类有:
溶菌酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶等;
溶栓酶类有:
纤溶酶、尿激酶、凝血酶;
消化酶类有:
胃蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、胰酶。
44、几种重要动物源性生物制品的来源
①胰蛋白酶来源于牛、羊或猪胰腺;
②胰胸腺肽是从冷冻的小牛(或猪、羊)胸腺中提取的一种肽类制品;
③胆红素是从猪等动物胆汁中提取出的色素;
④肝素是从猪、羊、牛等动物的肠粘膜或肝、肺中提取的一种粘多糖的硫酸酯;
⑤胰酶是从猪、羊或牛胰脏中提取的多种酶的混合物。
⑥胰岛素:
人工化学合成
从猪和牛胰脏中提取
基因工程技术生产
⑦血红素来源于动物红细胞,可用作补铁剂;
优点:
血红素铁能直接被肠粘膜上皮细胞吸收,
吸收率高;
无明显的金属异味和消化道副作用
其它用途:
①是天然着色剂
②是人工牛黄的重要原料
45、疫苗的基本成分
基本成分:
抗原、佐剂、防腐剂、稳定剂和缓冲液
抗原:
是疫苗最主要的成分,决定疫苗的免疫性能。
构成疫苗的抗原必须具备以下三个基本特性:
①异物性:
即是机体以外的物质,进入机体后能够有效激发机体的免疫反应。
②一定的理化特性:
包括分子量、化学结构
③特异性:
进入机体后诱导相应的体液或细胞免疫。
46、疫苗的基本特性:
①免疫原性②安全性
③稳定性④广泛应用性
47、疫苗的安全性:
疫苗本身的安全和接种的安全。
48、病毒疫苗的制备方法有:
①动物培养疫苗②鸡胚培养疫苗
③细胞培养疫苗④基因工程疫苗
49、目前使用的病毒性疫苗的种类:
①减毒活疫苗
②灭活疫苗
③化学亚单位疫苗
④基因工程亚单位疫苗
50、目前使用的菌苗的种类:
①减毒活疫苗
②灭活疫苗
③类毒素制剂
④多糖疫苗
51、乙肝疫苗的类型:
①基因工程乙肝疫苗:
将编码乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的基因在哺乳动物细胞或酵母菌中高效表达制得疫苗。
接种者中约有10%不产生应答反应;另有5%~15%接种者属低应答者,低应答者不能获得完全保护作用。
②基因工程前S重组疫苗:
利用基因重组技术,在哺乳动物细胞表达包含S抗原和前S1、前S2抗原,制备疫苗。
52、流行性乙型脑炎疫苗的类型:
①鼠脑提取的灭活疫苗
②vero细胞生产的灭活疫苗
③原代地鼠肾细胞产生的SA14-14-2减毒活疫苗
53、多价脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)的内容
Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒减毒株混合物
54、目前,WHO推荐使用的纯化狂犬病疫苗有:
①人二倍体细胞疫苗
②vero细胞疫苗
③原代地鼠肾细胞疫苗
④原代鸡胚细胞疫苗
55、目前,我国使用的狂犬病疫苗种类是:
①精制vero细胞培养疫苗
②精制原代地鼠肾细胞培养疫苗
56、麻腮风联合疫苗的内容
包括麻疹减毒株、腮腺炎减毒株、风疹减毒株。
三种病毒首先混合,然后冻干。
57、流感疫苗
抗原成分:
血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA);
注意事项:
①制备过程必须去除裂解剂;
②应用时凡对鸡蛋或疫苗中其他成分过敏者禁用;
③格林巴利综合症患者、孕妇、急性发热性疾病患者和慢性病发作期患者慎用。
58、艾滋病疫苗研制存在的问题
①病毒变异
②HIV能进入中枢神经受血脑屏障。
③HIV还可以以前病毒形式整合到宿主细胞DNA中,受整合的细胞表面却没有HIV的抗原成分。
④HIV侵入部位主要是黏膜,所以黏膜局部必须免疫。
⑤HIV病毒有胞和无胞病毒均可传播。
59、吸附百日咳疫苗、白喉和破伤风类毒素混合制剂
①百日咳疫苗原液
②精制白喉类毒素用氢氧化铝吸附制成
③破伤风类毒素
吸附无细胞百日咳疫苗、白喉和破伤风类毒素混合制剂
①无细胞百日咳疫苗原液
②精制白喉类毒素用氢氧化铝吸附制成
③破伤风类毒素
无细胞百日咳疫苗的抗原成分主要是百日咳毒素(PT)和丝状血凝素(FHA)
60、霍乱毒素B亚单位:
是霍乱类毒素的结合单位;
是疫苗研发的的候选抗原。
其中,由纯化的重组霍乱类毒素B亚单位和灭活O1群霍乱全菌体组成的疫苗(rBS/WC),可同时刺激抗菌和抗毒免疫力,产生协同保护作用,可刺激肠道局部产生分泌性IgA(SIgA)抗体。
61、霍乱CVD103-HgR减毒活疫苗是:
利用基因工程技术使霍乱弧菌缺失主要毒力基因,而保留有效抗原基因构建成高效的基因工程减毒活疫苗。
62、结核病疫苗的类型
减毒活疫苗:
卡介苗
63、流行性脑脊髓膜炎疫苗的主要类型:
荚膜多糖疫苗
目前,有A群、C群、A+C群、A+C+Y+W135群
64、伤寒亚单位疫苗的靶抗原是:
荚膜多糖(Vi多糖)
65、鼠疫亚单位疫苗的靶抗原是:
荚膜F1抗原和毒力V抗原
66、炭疽毒素(脂多糖)的组成复合多聚体。
第I因子(水肿因子,EF)
第Ⅱ因子(保护性抗原,PA)
第Ⅲ因子(致死因子,LF)
67、细胞因子的共同特性:
①细胞因子是低分子量糖蛋白,以单体,双体或三聚体存在;
②由多种细胞产生;
③以旁分泌、自分泌或内分泌发挥效应;
④通过与特异受体结合而发挥作用;
⑤其作用具有高效性、多效性、重叠性、拮抗性、协同性、网络性的特点。
68、细胞因子是由哪些细胞合成分泌的?
细胞因子的来源:
(1)活化的免疫细胞
(2)基质细胞类
(3)某些肿瘤细胞
69、干扰素的来源与作用
(1)I型干扰素
产生细胞:
白细胞、成纤维细胞、病毒感染细胞等;
作用:
抗病毒感染,抗肿瘤生长。
(2)Ⅱ型干扰素
产生细胞:
活化的T细胞和NK细胞;
作用:
免疫调节功能。
70、TNF的生物学活性
●杀伤肿瘤和抗肿瘤
●抗病毒
●免疫调节作用
●促进炎症反应
●致热作用
●引发恶液质
71、细胞因子的主要生物学作用
●抗感染和抗肿瘤
●免疫调节作用
●参与和调节炎症反应
●刺激造血细胞增殖分化
●促进各种细胞的生长和分化
●参与细胞凋亡
72、血液代用品的特点:
(1)无红细胞表面抗原决定簇,可排除适配血型的麻烦;
(2)无病原体污染和进一步的交叉污染;
(3)保质期长,易贮存,运输方便;
(4)原料来源广泛,不用来源稳定的供血人群,取材方便,可保障充足供应;
(5)传递氧的功能良好,可调整产品的p50值,以满足不同的临床适应症的需要。
73、目前,可用于制作血液代用品物质有:
●全氟碳化合物(PFC)
●微囊化血红蛋白
●基因重组血红蛋白
●聚乙二醇
74、疫苗效果评价包括:
●安全性评价;
●免疫学效果;
●流行病学效果评价;
评价方法一般采用严格的现场实验。
四、思考题
1、生物制品有哪些作用?
(1)生物制品在疾病预防中的作用
①疫苗的作用:
激活机体的免疫细胞,产生免疫应答。
疫苗接种是人体主动获得免疫机能的主要手段。
疫苗接种使一些感染和传染病发病率大幅度下降。
②γ-球蛋白的作用:
使人体被动获得免疫机能。
③类毒素的作用:
使接种者产生相应抗体,中和病原菌产生的毒素
④高免疫血清的作用:
使人体被动获得免疫机能(用于紧急情况)迅速起作用。
效果持续时间短。
致发生过敏性反应或血清病
(2)生物制品在疾病治疗中的作用
●特异性地治疗某种疾病
(γ-球蛋白γ-球蛋白缺乏症)
(其它血液制品相应的疾病)
●特异性抗病毒、抗肿瘤生长、抗毒血症等
(单克隆抗体肿瘤)
(特异性免疫血清相应的感染或传染病)
(治疗性疫苗肿瘤或感染及传染病)
●广谱抗病毒、抗肿瘤生长(干扰素)
●增强或激活免疫细胞功能,治疗疫免功能低下、抗感染(转移因子)
(3)生物制品在疾病诊断方面的作用
用于检测相应抗原、抗体、基因或机体免疫状态,为疾病的诊断提供依据。
3、蛋白质制品分离纯化常用的方法
(1)盐析和有机溶剂沉淀法(溶解度不同)
(2)选择性沉淀法:
包括等电点沉淀法和变性沉淀;
(3)按分子大小分离的方法:
①微滤;②超滤;③透析④超速离心;
(4)各种色谱方法:
①离子交换色谱;②凝胶过滤色谱;③亲和色谱;④疏水色谱与反相色谱;高效液相色谱
(5)电泳法:
包括平板电泳、垂直板电泳、双向电泳、双相脉冲电泳、毛细管电泳、等电聚胶点用、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
4、影响基因工程生物制品分离纯化工艺设计的主要因素?
(1)含目的产物的起始物料发酵的特点 在利用基因工程菌进行发酵生产时,其上游过程中的各种因素和工艺均对分离纯化技术有直接的影响。
这些因素包括:
① 菌种类型及其代谢特性。
包括菌种的各种生物学性质、产物和副产物种类、代谢物种类,产物类似物、毒素和能降解产物的酶;
② 原材料和培养基的来源
③ 生产工艺和条件。
包括灭菌方法和条件,生产方式(连续、批式、半连续),生产周期,生产能力、工艺控制条件、因素及方法;
④ 初始物料的物理、化学和生物学特性。
包括产物浓度、主要杂质种类和浓度、盐的种类和浓度、溶解度、PH、黏度、流体力学性质和热力学性质等。
(2)目的产物的活性、纯度和杂质
首先应该建立基因工程产物活性、纯度和可能杂质以及允许的杂质种类与最大允许含量的有效检测方法;
(3)目的产物的表达特性
分泌型表达、不溶性表达、可溶性表达、细胞周质表达;
(4)目的产物本身的分子特性、蛋白产物分子的理化参数和生物学特性;
(5)目的产物的用途和需求量。
5、制备生物制品过程中原材料选择所遵循的原则
●有效成分含量高,原料新鲜。
●来源丰富、易得、产地较近。
这关系到材料的成本、生产的后续性、组织的
新鲜度和
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