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不同温度对芦丁提取效果影响
生物工程
专业实验报告
不同温度对超声波辅助提取桑叶中芦丁的影响
学生姓名:
何佳虹
学生学号:
201310902008
院(系):
生物与化学工程学院
年级专业:
2013级生物工程
指导教师:
韩洪波 讲师
学期:
2015-2016-2
二〇一六年六月
目录 II
1 文献综述 1
1.1桑叶生物学特性 1
1.1.1功能性活性成分 1
1.1.2药理功效 1
1.1.3主要用途 2
1.2芦丁的理化性质 2
1.2.1芦丁的理化性质与结构 2
1.2.2芦丁在植物中的分布与含量 3
1.2.3芦丁的提取和纯化方法 3
1.2.4芦丁开发和利用前景 4
1.3高效液相色谱 4
1.3.1高效液相相色谱法的发展简况 4
1.3.2高效液相相色谱法的原理和分类 5
1.3.3高效液相相色谱法的特点 7
1.4本课程研究的背景 7
2 材料与方法 8
2.1材料 8
2.1.1实验材料 8
2.1.2实验试剂与仪器 8
2.2方法 8
2.2.1实验步骤 8
2.2.2芦丁样品溶液的配制 8
2.2.3色谱条件的选择与优化 9
3 结果与分析 10
3.1实验结果 10
3.1.1芦丁标准品和提取的样品芦丁的对比 10
3.1.2线性关系考察 11
3.1.3实验分析 11
3.1.4精密度实验 12
3.1.5重复性实验 13
4 讨论 14
参考文献 15
附录 16
1 文献综述
1.1桑叶生物学特性
桑叶,(MulberryLeaf),学名:
FoliumMori。
中药名,是桑科植物桑的干燥叶,是蚕的日常食物,又名家桑、荆桑、桑椹树、黄桑叶等,我国南北各地广泛种植桑树,桑叶产量丰富。
蚕的主要食物。
完整叶片呈或宽卵形,长约15厘米,宽约10厘米,叶柄长约4厘米,叶片基部心脏形,顶端微尖,边缘有锯齿,叶脉密生白柔毛。
老叶较厚暗绿色。
嫩叶较薄,黄绿色。
质脆易,握之扎手。
气淡,味微苦涩。
药用一般认为霜后采者质佳。
到2014年,有人将桑叶的芽头做成了菜式,而使桑叶有了食疗的价值,因其桑叶的芽头营养价值丰富而被大众喜爱,被现代人称为桑芽菜。
又以南浔辑里村,国丝文化园的桑树芽最为出众,考虑到穿珠湾水的灌溉,其桑叶芽的微量元素比一般桑芽的要高出很多。
1.1.1功能性活性成分
在桑叶中有许多功能性活性成份如:
谷甾醇(植物类固醇0.08%,sitosterol),3%的胡萝卜素(carotene),叶绿素(chlorophylls)、异槲皮素(isoquerceitrin)、黄体色素(Lutein)、新胡萝卜素(neocarotene)和叶黄素(xanthophyll)等色素,芸香甙(rutin),槲皮素(quercetin),紫云英素(astragalin),3,7-二槲皮素葡萄糖苷(quercetin3,7-diglucoside),g-氨基酸(gammaaminobutyricacid),SOD,1-脱氧野尻霉素(deoxynojirimycin,DNJ)等[1-3]。
这些物质具有降血压,降血糖,降胆固醇,抗肿瘤,抗过敏,抗氧化,抗毛细管渗透,利尿的功能。
桑叶中的有效成份进一步被确认为还具有治疗秃头症、动脉硬化和减肥的药用效力。
1.1.2药理功效
陈福君等[4]从桑叶中提取桑叶总多糖(TPM),给四氧嘧啶致糖尿病小鼠给药,结果表明,TPM有非常显著的降糖作用;TPM还可以提高糖尿病小鼠的耐糖量,增加肝糖元而降低葡萄糖,以及提高正常大鼠血浆中胰岛素含量。
Asano等[5]已从桑叶中分离出6种DNJ与糖结合的N糖化合物并确定了其结构。
并对其降糖效果和机理做了进一步探讨。
佐藤修二[6]也对桑叶的甲醇提取物的降血糖作用作了深入研究。
桑叶当中含有较丰富的芦丁、槲皮素、槲皮素苷等黄酮类化合物。
这些物质可以增加离体及在蛙心的收缩力及输出量,并减少心率。
芦丁使蟾蜍下肢及兔耳血管收缩、槲皮素可扩张冠状血管,改善心肌循环。
芦丁、槲皮素具有降血压的作用。
桑叶还有抑菌、抗炎、延缓衰老作用[7]。
除此之外,桑叶中含有多种矿物质,且易吸收,对补钙、补镁、补锌、补铁均有特殊功效。
桑叶中的多种维生素十分宝贵特别是对抑制变应原效应、抑制盅栓形成、抑制体内过氧化物生成等至关重要[8]。
1.1.3主要用途
桑叶在中国民间不少地区有作为蔬菜的习惯,但用量很少,而目前日本已有多种桑叶保健食品面市。
中国桑叶资源丰富,完全可以借鉴国外的开发经验,利用桑叶开发自己的保健食品。
目前,我国食品科研工作者对桑叶在食品当中的应用进行了一系列研究工作。
李莉对利用桑叶为原料制作保健酒进行了研究。
杨晓宇对桑叶营养挂面的制作与开发进行了探索。
张苏勤[9]则进行了桑叶营养口服液进行了研制。
桑叶的药用首载于《神农本草经》,桑叶性味苦、寒,甘所以益血,寒所以凉血,甘寒相和,故下气而益阴,又能止咳,有补气之功,是中医清热解毒之药效。
主治热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤晕等症[10]。
临床应用十分广泛,常用桑叶入药,组成复方中药,疗效良好。
另外,桑叶中含有的芸香苷、槲皮素、桑叶多糖等诸多的生物活性物质为桑叶在制药工业中的应用具有更为广阔的前景[11]。
1.2芦丁的理化性质
1.2.1芦丁的理化性质与结构
芦丁也可以叫芸香甙,来源于桑叶、芸香叶、烟叶、枣、杏、橙皮、番茄、荞麦花等中。
其物理性状为浅黄色针状结晶(水),熔点176-8°C,23D+13.82°C(乙醇),[]20D-39.43°C(吡啶)。
1g溶于7ml甲醇、8000ml水、200ml沸水、23mL沸乙醇、290mL冷乙醇。
难溶于冷水,可溶于热水、甲醇、乙醇、吡啶,易溶于碱水。
芦丁经过加工,生产出曲克芦丁,可以这样理解:
曲克芦丁是一羟乙基芦丁、二羟乙基芦、三羟乙基芦丁、四羟乙基芦丁的混合物,其中,药效最强的是三羟乙基芦丁,口服含量为60%,注射用含量为80%。
芦丁属维生素类药,有降低毛细血管通透性和脆性的作用,保持及恢复毛细血管的正常弹性。
用于防治高血压脑溢血;糖尿病视网膜出血和出血性紫癜等,也用作食品抗氧剂和色素。
芦丁还是合成曲克芦丁的主要原料,曲克芦丁为心脑血管用药,能有效抑制血小板的聚集,有防止血栓形成的作用。
其结构式见图1.1。
图1.1芦丁的化学结构式
1.2.2芦丁在植物中的分布与含量
表 1.1
编号
植物种类
芦丁检出部位
拉丁文
中文名
1
Gaultheriayunnanensis.
滇白珠
根
2
Myricananacheval.
矮杨梅
叶
3
Fagopyrumesculentum.
荞麦
毛状根,果实
4
Hoveniaacerbalindl.
枳椇
叶
5
Macrosolencochinchiensis.
鞘花寄生
茎,叶
6
Euphorbiapukherrima.
一品红
茎,叶
7
Saussureainvolucrata.
新疆雪莲
花
8
CarthamustinctoriusFlowers.
红花
花
9
Taxillusnigranspanser.
毛叶寄生
叶
10
Isodonglaucocalyx.
蓝萼香茶菜
全草
11
BupleurumchinenseDC.
北柴胡
全草
12
Eucommiaulmoides.
杜仲
叶
13
Crataegusscabrifolia(Franch.)Rehd.
云南山楂
叶
14
Phyllanthusemblica.L.
余干子
叶
15
Hedyotischrysotricha
黄毛耳草
全草
1.2.3芦丁的提取和纯化方法
由于传统的提取工艺如热水提取法、热醇提取法、冷碱水浸提法等,多存在提取效率低、成本高、工艺流程长、提取芦丁的纯度差、炽灼残渣偏高等缺点。
我国科研工作者,应用现代科学原理与技术,对其提取工艺进行了改进。
1.1 冷碱渗漉法 采用冷碱渗漉提取-酸沉淀法从槐米中提取芦丁,其收率比冷碱分次提取-酸沉淀法提高了5%。
1.2 连续萃取法 将槐米用碳酸氢钠溶液和烷基酚环氧乙烷加成物处理后,再上笼蒸熟,然后用含有一定量硼砂的石灰水连续萃取,结果提取率提高到22%,芦丁含量为98%,炽灼残渣比传统工艺降低了77.2%。
1.3 大孔吸附树脂法 用大孔吸附树脂法成功地从荞麦中分离出芦丁,并对工艺条件进行了筛选,以大孔树脂D11或D16为吸附剂,以一定浓度的溶剂A洗脱,上柱液温度为30~40℃,pH为3~4,提取率达85%,纯度达95%以上。
1.4 超声提取法 由于具有所需设备简单、操作方便、提取时间短、提取率高、无需加热等优点,超声技术近年来已逐渐应用于中药有效成分的提取中。
王昌利等从槐米中提取芦丁,超声提取40min,其提取率为22.53%,是目前生产力的1.7~2.0倍。
经对比试验可知,节约药材30%~40%,具有较高的经济效益。
林翠英等。
根据超声波有使悬浮于气体或液体中的微粒聚集成较大颗粒而沉淀的作用,使芦丁提取更完全。
1.5 针对传统工艺再提取过程中具有的产品易氧化劣变、有机溶剂残留等弊端,将槐米经预处理后,采用超临界CO2作为溶剂,萃取槐米中的芦丁,对传统工艺进行了改善。
1.2.4芦丁开发和利用前景
近年来对芦丁的研究不论在新资源的发现,提取工艺的改进,药理研究的深度、广度,以及化学研究及应用方面都取得了显著成绩,但芦丁金属络合物的研究不够深入。
国内外的研究表明,许多有机分子配体与金属络合形成络合物后,其药效明显增强。
药物在体内的代谢属于酶系统的催化反应,故药物的活性与酶密切相关,而生物体内大多数酶的活性中心多是一种被配合的金属离子,因而似乎络合物作为药物的活性就是这种外源性配合物与酶这种内源性配合物之间相互作用并达到配位平衡的体现。
从络合物角度来讲,有机分子是金属离子的载体,金属离子又是有机分子的导向,金属元素有其特殊的生物学性质,并很大程度上取决于其所处的分子环境,因而进行药物研究时一定要考虑金属离子的作用。
因此,加强芦丁金属络合物的研究,通过化学研究准确地确定芦丁金属络合物的分子结构与空间构型,有针对性地筛选金属元素,并与药理学研究等有机结合起来,可作为芦丁药物研究的方向,并有望开发出中药一类新药。
1.3高效液相色谱
1.3.1高效液相相色谱法的发展简况
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中做相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
1960年代,由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性,为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质,气相色谱的理论和方法被重新引入经典液相色谱。
1960年代末科克兰(Kirkland)、哈伯、荷瓦斯(Horvath)、莆黑斯、里普斯克等人开发了世界上第一台高效液相色谱仪,开启了高效液相色谱的时代。
高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱,提高色谱柱的塔板数,以高压驱动流动相,使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时甚至几十分钟内完成。
1971年科克兰等人出版了《液相色谱的现代实践》一书,标志着高效液相色谱法(HPLC)正式建立。
在此后的时间里,高效液相色谱成为最为常用的分离和检测手段,在有机化学、生物化学、医学、药物开发与检测、化工、食品科学、环境监测、商检和法检等方面都有广泛的应用。
高效液相色谱同时还极大的刺激了固定相材料、检测技术、数据处理技术以及色谱理论的发展。
1960年代前,使用的填充粒大于100μm,提高柱效面临着困境,后来的研究人员便采用微粒固定相来突破着一瓶颈。
科克兰、荷瓦斯制备成功薄壳型固定相,这种在固定相在玻璃微球表面具有多孔薄壳,实现了高速传质,为高效液相色谱技术的发展奠定了稳固的基础。
随着填料粒径的降低,更高的柱效也得以实现。
1960年代研制出气动放大泵、注射泵及低流量往复式柱塞泵,但后者的脉冲信号很大,难以满足高效液相色谱的要求。
1970年代,往复式双柱塞恒流泵,解决了这一问题。
1970年代后科克兰制备出全多孔球形硅胶,平均粒径只有7μm,具有极好的柱效,并逐渐取代了无定形微粒硅胶。
之后又制造出的键合固定相使柱的稳定性大为提高,多次使用成为可能。
1970年后,适合分离生物大分子的填料又成为研究的热点。
1980年后,改善分离的选择性成为色谱工作者的主要问题,人们越来越认识到改变流动相的组成是提高选择性的关键。
1.3.2高效液相相色谱法的原理和分类
色谱法的分离原理是:
溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationaryphase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。
1.液固色谱法使用固体吸附剂,被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。
分离过程是一个吸附-解吸附的平衡过程。
常用的吸附剂为硅胶或氧化铝,粒度5~10μm。
适用于分离分子量200~1000的组分,大多数用于非离子型化合物,离子型化合物易产生拖尾。
常用于分离同分异构体。
2.液液色谱法使用将特定的液态物质涂于担体表面,或化学键合于担体表面而形成的固定相,分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。
分离过程是一个分配平衡过程。
涂布式固定相应具有良好的惰性;流动相必须预先用固定相饱和,以减少固定相从担体表面流失;温度的变化和不同批号流动相的区别常引起柱子的变化;另外在流动相中存在的固定相也使样品的分离和收集复杂化。
由于涂布式固定相很难避免固定液流失,现在已很少采用。
现在多采用的是化学键合固定相,如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。
液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。
正相色谱法采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相);流动相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷),常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。
常用于分离中等极性和极性较强的化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等)。
反相色谱法一般用非极性固定相(如C18、C8);流动相为水或缓冲液,常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。
适用于分离非极性和极性较弱的化合物。
RPC在现代液相色谱中应用最为广泛,据统计,它占整个HPLC应用的80%左右。
随着柱填料的快速发展,反相色谱法的应用范围逐渐扩大,现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。
为控制样品在分析过程的解离,常用缓冲液控制流动相的pH值。
但需要注意的是,C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5(2~8),太高的pH值会使硅胶溶解,太低的pH值会使键合的烷基脱落。
有报告新商品柱可在pH1.5~10范围操作。
3.离子交换色谱法固定相是离子交换树脂,常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架,在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基(称阳离子交换树脂)或季氨基(阴离子交换树脂)。
被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换,根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。
缓冲液常用作离子交换色谱的流动相。
被分离组分在离子交换柱中的保留时间除跟组分离子与树脂上的离子交换基团作用强弱有关外,它还受流动相的pH值和离子强度影响。
pH值可改变化合物的解离程度,进而影响其与固定相的作用。
流动相的盐浓度大,则离子强度高,不利于样品的解离,导致样品较快流出。
离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸。
4.离子对色谱法又称偶离子色谱法,是液液色谱法的分支。
它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后,在非极性固定相中溶解度增大,从而使其分离效果改善。
主要用于分析离子强度大的酸碱物质。
分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐,如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等。
另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对。
分析酸性物质常用四丁基季铵盐,如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。
离子对色谱法常用ODS柱(即C18),流动相为甲醇-水或乙腈-水,水中加入3~10mmol/L的离子对试剂,在一定的pH值范围内进行分离。
被测组分保时间与离子对性质、浓度、流动相组成及其pH值、离子强度有关。
5.排阻色谱法固定相是有一定孔径的多孔性填料,流动相是可以溶解样品的溶剂。
小分子量的化合物可以进入孔中,滞留时间长;大分子量的化合物不能进入孔中,直接随流动相流出。
它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。
常用于分离高分子化合物,如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。
1.3.3高效液相相色谱法的特点
高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。
气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物,它们仅占有机物总数的20%。
对于占有机物总数近80%的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质,目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。
总之,高效液相色谱法是吸取了气相色谱与经典液相色谱优点,并用现代化手段加以改进,因此得到迅猛的发展。
目前高效液相色谱法已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质,例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析[12]。
1.4本课程研究的背景
桑叶为桑科植物桑的干燥叶,功效疏散风热、清肺润燥、清肝明目。
现代医学研究证明桑叶具有抑制血脂质增加和抑制动脉粥硬化形成、抗病原微生物、抗炎、利尿、降血糖等作用。
由此可见桑叶不但具有药用价值,而且还具有营养保健的功效。
芦丁具有抗炎、降血脂、降低毛细血管脆性、抗氧化作用。
所以对不同温度下桑叶中的芦丁含量进行测定具有重要的意义。
攀枝花本地对桑叶中芦丁的研究并不多,研究不同温度下桑叶中芦丁的提取对于芦丁的未来研究奠定了基础。
2 材料与方法
2.1材料
2.1.1实验材料
在老师带领下桑叶采集的是攀枝花本地桑叶,并打磨成粉状。
表2.1 实验药品
药品名称
规格
厂家
无水乙醇
AR
成都市科龙化工试剂厂
磷酸
AR
成都市科龙化工试剂厂
芦丁标准样品
AR
天津大学科威公司
2.1.2实验试剂与仪器
表2.2 仪器设备
序号
仪器名称
仪器型号
厂家
1
电子天平
FA2004
成都安亭科学仪器厂
2
高效液相色谱仪
Agilent1200型
成都上虞市上兴沙筛厂
4
超声波细胞粉碎机
JY88-Ⅱ
宁波新芝生物科技股份有限公司
5
电子分析天平
FA2104S型
上海恒平科学仪器有限公司
6
冰箱
BCD-2425型
海尔
7
容量瓶
50ml
成都市六一仪器厂
8
烧杯
50ml
成都市六一仪器厂
2.2方法
2.2.1实验步骤
将桑叶烘干,用粉碎机粉碎。
在本实验中,分别称取1g粉碎均匀的桑叶粉(精确到0.001g)于5个50ml三角瓶中,加入流动相80%乙醇20ml,超声波提取,分别在温度30℃,35℃,40℃,45℃,50℃提取20min。
得到的提取液先用离心机离心过滤,再用流动相80%乙醇将所得的滤液定容至50ml,摇匀,作为待测溶液。
接着从中取1mL定容至50mL,于高效液相色谱下进行色谱分析。
2.2.2芦丁样品溶液的配制
1、取出已粉碎的桑叶粉,注意台面清洁,
2、在分析天平上分别称量1克的粉末,贴好标签。
注意分析天平在使用之前需要校准并且需要预热30分钟。
此处使用分析天平是因为其精确度高,且因为物料是粉末状的。
3、再将称量好的粉末放在100毫升的锥形瓶中,分别加入配置好的80%的乙醇20毫升。
将酒精溶于桑叶粉末中,其目的是为了测出其间芦丁的含量。
4、用玻璃棒充分搅拌,放进超声波清洗机中20分钟,温度分别控制在,30℃35℃,40℃,45℃,50℃。
5、再放进离心机中搅拌离心,直至上清液与下层悬浮液分离开。
离心5-15分钟,3000转每小时
6、将上清液倒出,并将其定容在50毫升的容量瓶中,注意用80%酒精定容
7、将定容后的溶液用到高液相色谱分析测定。
2.2.3色谱条件的选择与优化
为保证芦丁化合物能有良好的测定效果,首先要进行流动相的优化,采用甲醇—水作为流动相时,基线不够平稳,出峰不单一,伴随很多分裂峰。
当采用甲醇—0.4%磷酸作为流动相时,基线相对平稳,但有不同程度的分裂峰和杂峰;所以进样检测不同比例的甲醇—0.4%磷酸对测定效果的影响,选择最优的作为流动相;考察的比例为甲醇:
0.4%磷酸=50:
50、55:
45、60:
40、65:
35、70:
30、75:
25、80:
20、85:
15、90:
10。
3结果与分析
3.1实验结果
表3.1实验测得不同温度下芦丁的峰面积
温度/℃
30
35
40
45
50
峰面积值
249.74
669.73
238.37
212.22
109.06
3.1.1芦丁标准品和提取的样品芦丁的对比
图3.1 芦丁的标准图谱
图3.2 芦丁的标样图谱
由标准以及标样图谱的出峰时间以及面积值说明,实验中提取的芦丁与芦丁标样是同一种物质。
表3.2芦丁标准品含量
ug/ml
9.98
19.96
39.92
79.84
159.68
吸光度值
120.32
310.82
623.53
1137.6
2324.38
图3.3 芦丁标准曲线图
3.1.2线性关系考察
准确称量桑叶干粉样品1g,置于50mL烧瓶中,以乙醇溶液作溶剂,用超声波辅助提取,设计不同目数对芦丁提取的影响,采用进行分析,提取温度为40℃;乙醇浓度为80%。
参考桑叶芦丁的标准含量再以此为标准含量。
按上述色谱条件测定峰面积积分值,以峰面积积分值为纵坐标,对标准品进样量X(μg/mL)为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程。
其线性回归方程及相关系数为:
Y=14.494x+6.4996
结果表明,芦丁含量在10.0-160.0μg/mL范围内呈良好的线性关系。
3.1.3实验分析
标准曲线得出公式y=14.494x+6.4996 R2=0.9989
通过计算可以得出芦丁含量与温度的关系:
表3.3计算出提取芦丁浓度与温度之间的关系
温度/℃
30
35
40
45
50
提取芦丁的浓度/ug/ml
16.78
45.62
16.00
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