显微摄影技术.docx
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显微摄影技术
显微摄影技术
显微摄影是一项重要的显微技术,同再现显微镜中物体影象的各种方法比较,显微摄影是最好的方法。
它对以显微镜作为研究工具的研究人员是必备的手段,尤其在研究染色体及其分子特征时,就更加显得必要了。
现在数码相机的问世,又使显微摄影变得更为简便,且效果好。
在有关学术研究和理论探讨时,一帧好的显微照片,可以省去许多的文字描述,并且使人心悦诚服。
何况在生物学领域中,确有不少问题的研究,必须借助显微摄影。
J[1 _T_y^d-0 下面,仅以植物染色体作为拍摄材料,概述显微摄影的基本方法,数码显微摄影的操作流程和传统的显微摄影基本一样,只是省去了底片和暗房技术,由计算机完成。 _r|_^_z0 _@i_rH_>D_ 一、显微摄影对制片标本的要求]=GF}_3a$U 0H_+u_oU_ 染色体只见于有丝分裂和减数分裂的细胞核中,根尖、茎端、幼嫩花药和胚珠是镜检染色体的材料,尤以根尖和花药更为常用。 观察染色体的形态、结构和数量,常用酶解或压片法制片。 此法能保持染色体的完整,并能接近于活体状态。 一张好的显微照片,来源于完好的染色体制片标本。 适于拍照的制片标本,应具下列条件: w6__V_12jg _143_x_K\ 1、选用标准的载玻片和盖玻片 光源入射光束,经载玻片透射标本,再经盖玻片进入物镜,处于光路之中的玻璃,应是表面无伤,内无气泡;外无霉斑。 这样可以杜绝光线乱反射,防止阻光、降低亮度以及有损清晰度。 载玻片厚度不宜超出聚光镜的焦距,一般在2毫米以内,可将光源的光束集中于载玻片的标本上。 盖玻片的标准厚度为0.17毫米,若使用厚度大于工作距离的盖玻片,物镜前透镜会触及盖玻片,同时不能准焦;盖片厚,球差就大,会降低影象质量。 有效盖片厚度,包括封固剂的厚度,即树胶或尤派胶用量,因此,封固剂要调稀,少许滴加一薄层。 PEy@s"sg_= 'Q_ba'{ 2、染色体处于相宜的时期,平展逸散,完整无损 染色体的计数和组型分析,以有丝分裂的中期(或晚前期),减数分裂的终变期和粗线期为宜。 这时染色体收缩变短,呈典型状态,易识别。 通过前处理的精细加工,染色体相互逸散,互不接触,并尽可能使之平展于同一水平面上,又不失细胞的完整轮廊(图3-1)。 xSs/g_W! hG__Zf~g? 3、染色鲜明适度 染色体过染,染料堆积,使染色体模糊成一块,难以辨别细节,缺乏质感;染色体着色过浅,使影象不鲜明,辨认不清,反差不大。 染色体染色以蓝紫为佳,色彩鲜明,胶片易感受,拍摄效果好。 一般多用铁矾苏木精染色制片。 当然,醋酸洋红和孚尔根反应也可以。 细胞质染色应浅淡,以辨清细胞质的完整轮廓为准。 常用铁矾苏木精过染,再用45%醋酸软化和分色,结果染色体着色蓝黑而鲜明,细胞质浅淡而不明显,增大了色彩的对比,扩大了影象的明暗反差。 7t)__k__ k__XoNy1__ 4、清洁无尘,消除气泡 制片中的灰尘异物和气泡,有损影象的质量,防碍观察。 气泡为临时制片的常见弊病,小的气泡有碍观瞻;大的气泡连片,推挤染色体,堆积集中,损坏了好的影象。 要随时滴加所用的临时封固液,消除气泡。 @YvWL6('! EaM#,X3I! V i_Sa;^jN% 二、选用优质物镜和接目镜_A,Om_TI0< $_,1n).! 1 显微摄影是以接物镜和接目镜作为摄影镜头,其中接物镜尤为重要,物镜的分辨率就是显微镜的分辨率。 目镜与显微镜的分辨率无关,它只有把物镜已放大的影象进一步放大,既使是最好的目镜,也无法观察到未被物镜分辨的细节。 所以摄影时,物镜要严格选择,不可任意滥用。 __0_;+9I__ e&c,h<_fD 1、物镜 接物镜种类繁多,光学性能相差悬殊。 摄影时必须选用得当,绝非任一物镜皆可产生最佳影象。 8J_j0M___ _tllI_('q 物镜由透镜组成。 单片透镜具有多种象差,一个完善的物镜,是由一组复杂的透镜组成。 按象差矫正程度,物镜可分消色差物镜,复消色差物镜,萤石物镜和平象物镜等类别。 U_gBaL_44J 0S^bpyq*- 消色差物镜,因制造容易,是最常见的物镜。 金属外壳上不刻代表(图3-4左)。 该物镜将光谱中红光和蓝光聚焦于一点,黄绿光则聚焦于另一点。 其最佳清晰范围是在510μm(毫微米)绿光区至630μm橙光区间(图3-2Ach红)。 消色差物镜性能较差,不适于显微摄影。 因未经矫正的蓝光对感光胶片的乳剂膜非常敏感,全色胶片对未经矫正的红光也能感应。 如果必须使用时,加用黄绿色滤色片,也可获得清晰的影象。 /d1K! #*_7 )m[d.^__5 复消色差物镜的性能很高,能将可见光谱中的红、蓝和黄光聚焦于一点,改正了红、蓝色光的球差和其他象差。 最佳清晰范围从波长400nm至720nm(图3-2Apo线),容纳了全部可见光谱。 适于任何色光下或加用各色滤色镜摄影,更适于彩色摄影。 但是,复消色差物镜残留有象场弯曲,使平面物体形成类似球形弯曲的影象。 结果使视野中心和边缘的影象不能同时准焦,给摄影带来不便。 拍出的底片中心清晰边缘模糊或相反。 象场弯曲可以通过选用特殊的目镜加以克服矫正。 复消色差物镜的金属外壳,刻有“Apo”字样,供作识别(图3-3)。 a@___O*Gq P[&_77T_ 萤石物镜,色差校正介于消色差物镜与复消色差物镜之间,故又可称半复消色差物镜。 最佳清晰范围在波长430nm至680nm(图3-2l线),包括了绝大部分可见光谱。 适于黑白和彩色摄影,可加用各色滤色镜,物镜外壳刻有“F1”字样(图3-4右)。 _+VUV#_e 7wuJLL. 鉴于倍数愈高物镜的象场弯曲愈显著,歪曲影象,降低摄影质量,难以获得完美的底片。 现今,已研制出清除象场弯曲的一系列平象物镜。 平象物镜,校正了象正场弯曲,不存在视野中心与边缘不同时准焦的现象。 由于将影象展平,在同样倍数下,有效影象要比一般物镜的影象稍大。 为当今理想的摄影物镜,应积极选用。 平象物镜有多种类别,外壳上刻有不同的字样,以资识别。 如“Plan”(平象),“Pl”(广视野平象)、“NPl”(正常视野平象),“Planachromate”(平象消色差)、“PlApo”(平象昨消色差)等(图3-5)。 _O_*xvd4oA i/LF_u@h2A 物镜在使用时,按其前透镜与标本间介质的不同,分为干燥系和浸没系物镜。 浸没系物镜外壳前端,常刻一黑环,以便识别。 油浸物镜外壳刻有“Oel”、“Oil”、“Hl”字样;水浸系物镜刻有“W”、“Water”;甘油浸没系物镜刻有“Glyc”、“Glyz”,通常油浸物镜只有90×和100×(图3-6)高倍物镜。 个别显微镜配有63×或40×的中倍油浸物镜,其中尤以63×的油浸物镜,质量最佳,非常适于显微摄影。 在焦距和数值孔径相同时,浸没物镜的象差校正比干燥物镜完善,成象质量好。 由于浸没液折射率大于空气的折射率,从而提高了物镜的分辨率。 同时,这层介质可使入射物镜的光线提高,提高视野亮度。 采用浸没物镜,可消除物镜前端透镜表面的杂乱反射光,减少有害的反射光量,使物体影象反差增加。 <@__ZY=__' 3pjR_Mc@3 2、目镜 目镜亦参与造象,把物镜映来的影象进一步扩大,并校正物镜余下的象差和色差。 目镜作为投影器,把放大的影象投射在暗箱的焦平面上。 目镜种类多,光学性能差异较大,一定类型的物镜必须选用一定类型的目镜相互组合。 绝非只要有好的物镜,随便一种目镜都可用来摄影。 _Ui*S2uq%g Q\__q`j'y 附有摄影装置的显微镜,备有摄影目镜,专用摄影,不宜作为观察用。 这种目镜能较好的校正象场弯曲,提高成象质量。 摄影目镜上刻有“Photo”、“FK”等字样。 u_VT_u9 平象目镜也是一种适于摄影的目镜。 有专用摄影目镜,选用平象目镜配合平象物镜一起使用,可以获得很好的摄影效果。 目镜刻有“Plan”、“Periplan”、“GF”、“GW”和“Kpl”等字样。 _B__}/_.v &fl_PR/_2 3、物镜与目镜组合 为提高影象质量,消除象差和色差,在选配物镜和目镜组合时,从类别上进行选择,如用平象复消色差物镜和摄影目镜或平象目镜组合使用。 此外,物镜的数值孔径和放大倍数,以及目镜的放大倍数,更要考虑这涉及有效放大率、分辨率、焦点深度和视野宽度等几个与摄影质量相关的问题。 所以,选用物镜和目镜时,要考虑下述几个问题: Gm>d0fByL| ^+w_D__ (1)有效放大率: 显微镜辨别微小物体和细节的能力,取决于分辨率,不在于放大倍数。 分辨率决定于物镜,而与目镜无关。 显微镜的有效放大率,为所用物镜数值孔径的500-1,000倍。 数值孔径常简写为N.A.,其数值刻在物镜上。 例如,使用数值孔径为0.65的40×物镜,其有效的放大倍数为325-650倍。 为达此倍数,要选用8-16倍的目镜。 高于16×目镜所得放大倍数叫做“空的放大”,对影象细节的分辨,没有丝毫提高。 目镜倍数太低,总放大倍数太小,物镜分辨率不能充分发挥,本来可以辨认的细节,由于总倍数太小,挤在一起难以分辨。 Q_? ^[_Mf_' $LZhkPVo`_ (2)分辨率: 显微镜的分辨力决定于物镜数值孔径,孔径愈大,分辨率愈高。 数值孔径与物镜倍数有关,请看下列数字: _iw+D`_"_P 物镜倍数 4× 10× 20× 40× 100×_Ak=#5_5\_ 数值孔径 0.1 0.25 0.40 0.65 1.25GQ|_4<;}pG 上列数字表明,随着放大倍数的加大,数值孔径相应提高,分辨力随之增大,欲提高对物象细节的分辨能力和清晰度,必须使用高数值孔径的物镜。 例如,拍摄染色体减数分裂前期Ⅰ的几个影象,非用高分辨率的油镜不可,摄影目镜应视物象的大小和视野宽度,选用低倍的目镜为宜。 在这里要考虑物镜的数值孔径,不是总放大率,单纯考虑放大倍数,不顾及分辨率,就会出现摄影质量相差悬殊的结果。 例如,用100/1.25物镜与4×目镜组合,总放大倍数为400倍,分辨距离为0.27微米;使用40/0.65的物镜与10×目镜组合,总放大倍数也是400倍,分辨距离下降到0.5微米。 尽管总放大倍数相同,物象微细结构的分辨力几乎相差一倍。 JI`QmI~PwJ (3)焦点深度和视野宽度: 焦点深度是指物象的某一点被准焦时,其清晰部分的上下距离(厚度)。 焦深大,清晰的深度大,焦深小,清晰的深度小。 染色体数目较多的植物,例如八倍体小黑麦2n=56,制片时难以把所有染色体平展一薄层,56条染色体纵横交错,散在不同的水平层次上。 因此,若缺少足够的焦点深度,难把众多的染色体清晰地反映在同一张底片上。 焦点深度与物镜的数值孔径和总放大倍数成反比。 数值孔径小,放大倍数低的物镜和目镜,焦深长,只有选用数值孔径小和放大倍数低的物镜和目镜,加长焦点深度,才能把处于不同水平层次的染色体,清晰地摄入同一张底片内。 @]R 视野宽度与显微镜的总放大率成反比,使用高倍物镜和目镜,视野缩小,难在同一视野内容纳一个细胞的全部染色体。 改用低倍的物镜或目镜,降低总放大率,放大视野,以至能包括一个细胞的所有染色体止。 H>m5+A: A 综上所述,物镜数值孔径大,分辨率高,物象清晰,焦点深度和视野宽度降低,选用物镜和目镜主要着眼于提高物体影象的分辨率和清晰度,即选高数值孔径的平象复消色差中、高倍油浸物镜,兼顾焦点深度和视野宽度,并选用相宜的低倍摄影目镜或平象目镜。 焦深和视野不足时,适当调换物镜,降低数值孔径或放大倍数。 #OL__Y: ^_Q 三、光路合轴和光阑调整ODo__.#yB 显微摄影采用中心亮视野透射照明法,照明光束中轴与显微镜的光轴在一直线上。 光路系统始于光源,经视野光阑、孔径光阑、聚光镜、透明制片标本、物镜和目镜,将物体影象投射在暗箱的焦平面上。 _I__2Fm%u` 摄影前,光路要合轴调整,光束与显微镜的光轴,位于同一轴线上。 光路系统中的目镜、物镜和孔径光阑,于固定位置,勿需调整,仅聚光器可变。 因此,光路的合轴,实为聚光器的调中。 _Y___hu@\I 摄影要求视野亮度非常均匀,调整光源灯位置,使之照明于视野中央。 h___: 当前,摄影和观察普遍采用科勒(Koehler)照明法,这是一种最佳的中心亮视野照明。 1、聚光器和光源灯的调中 摄影前,要把聚光器和光源灯调中,使聚光器中心与视野光阑的中心处于同一光轴上。 光源灯的灯丝,照明于视野中心。 jay_F}C_8_ 聚光器的调中步骤: n_4e_$\T6 (1)转动聚光器升降旋钮,把聚光器升至最高位置;$N#___^Dh$ (2)接通光源灯的电源开关;n7$rn=_^o+ (3)将被摄的制片标本,放在载物台上,用4×或6.3×低倍物镜聚焦在样品上;_4Kl=7_E#( (4)缩小镜座上的视野光阑,在视野中可见边缘模糊的视野光阑图象(3-7); m_F-yj_J. (5)微降聚光器,至视野光阑的图象清晰聚焦止(图3-8);t@_@Ell@=n (6)用聚光器两个调中螺杆推动聚光器,使缩小的视野光阑图象,调至视野中心(图3-9);_%=r_G_zP (7)开放视野光阑,使多角形周边与视野边缘相接(图9-11);14O}y0oU< (8)反复缩放视野光阑数次,确认光阑中心和边缘与视野完全重合;E_3Q4aQ' (9)使聚光器回复顶点位置。 SJx__5Kux- __kd`W7_ 要通过视野光阑,保证视野的照明强度和均一,必须进行灯丝的调中,使投射的光束和光轴合一,其调整方法如下: B_v? 83^vv` 光源灯泡拧紧在灯座上,固紧于灯室或镜座中,转动灯座或灯室上的垂直、水平调节螺丝,使灯丝调中,位于视野中心(图3-11)。 灯丝的图象,可于两处观察: 一是在视野光阑上面的滤色镜座上,放一毛玻璃或乳白滤色镜,用以观察灯丝象的位置,至调中止;二是在物镜的后焦面上,聚焦后,从镜筒中取下目镜,在物镜的后焦面上,可见到灯丝的清晰图象。 两法当中,前法可取,简便易行。 .m%JE_m_ -)__E~_ 3 灯丝的调中,可结合科勒照明法一并进行。 _E? -t3]_m2 2、科勒照明法 科勒照明法是当今显微摄影的最佳照明法,视野照光均匀,被摄物体不受热,影象清晰。 新近的显微镜,照明系统已按科勒法设计装置,使用时稍加调整即达到最佳照明状态。 _*ui4_4h__ 科勒照明法是光源的灯丝在聚光器的孔径光阑上成象。 因此,也就在物镜后焦面上成象。 这样视野内照光均匀,不会烤焦被摄材料,极为有效的控制被照明的视场及其照明孔径。 G_*w54$f\y 视野的照明强度,用升降电压调节。 7RPrra_U! y 3、正确的使用光阑 显微镜有两种可变光阑,孔径光阑和视野光阑。 正确的调整和使用光阑是保证摄影质量的重要环节。 uv$}IBa%G (1)孔径光阑的调节使用: 孔径光阑与聚光镜是构成聚光器的两个重要部分。 显微镜的性能主要决定于物镜的性能,而物镜的性能又决定于数值孔径。 物镜的数值孔径与聚光镜的数值孔径相关,两者孔径相等时,物镜分辨力最高。 聚光镜的数值孔径受孔径光阑控制,用孔径光阑的开放与收缩,调节聚光镜数值孔径的大小。 显微摄影不同于一般摄影,其最大的区别是影象反差小,焦深浅。 这两点可随孔径光阑缩小而提高。 孔径光阑小于物镜的数值孔径时,物象的分辨力和亮度降低,但影象反差和焦点深度提高,便影象更加清晰。 所以,在不过多地降低分辨力的前提下,把孔径光阑调到所用物镜数值孔径的60-70%大小是比较合适的。 例如,物镜的数值孔径为1.0,孔径光阑的数值调到0.6-0.7,所以,显微摄影时,缩小孔径光阑,尽管丧失少许的分辨力,却提高了影象反差、焦点深度和影象的清晰度。 '_yo*ZG"UF 孔径光阑的调节方法: 当聚光器标有孔径的数字时,对准所需的值即妥,如果不具孔径光阑数值,在显微镜向标本聚焦后,从镜筒中取下目镜,在物镜的后透镜中可见孔径光阑影象。 光阑缩小时,仅一见一亮点,逐渐开大光阑,亮孔扩大,直至需要的程度。 当光阑缩小,视野亮度降低时,可适当提高电压增加照明强度。 _`_]QtZyM (2)视野光阑的调节: 视野光阑位于镜座之中,用以控制照明光束的直径,缩小视野光阑,光束直径小于孔径光阑,视野亮度不足,影象不清晰;视野光阑开大,光束直径超出孔径光阑,因光线过多,造成光线的乱反射,影响影象的清晰度。 视野光阑的适宜大小,以光阑的边缘外切孔径或孔径光阑内接视野光阑为度(图3-13)。 r"+K5E;M qd_85w_Oj 总之,孔径光阑的调节,取决于所用物镜数值孔径。 当两者相等,分辨力最高;孔径光阑小于物镜的数值孔径,影象反差和焦点深度增大。 视野光阑随孔径光阑而变,总是外切孔径光阑。 更换物镜,数值孔径改变,孔径光阑重新调整,视野光阑亦随之改变。 6}_p_y_nFV 四、选用适宜的感光胶片_b! \>}t/_ 感光胶片类别多,性能相差甚大,不是每种胶片都适于显微摄影。 了解胶片的各种性能试拍后择优选用。 一经选定,不要轻易改换,以保持拍摄质量的稳定。 胶片的性能是胶片中直接决定和影拍摄质量的因素,如感色性,感光度和反差系数等,要从这些质量因素中选用适宜的胶片。 TM1wZ: K 1、感色性 是指胶片对不同色光的敏感程度,这是胶片最主要的性能。 根据感色性,可把黑白胶片分为色盲片、分色片和全色片等不同的片种。 _$3`_qAB_M 色盲片: 乳剂中除卤化银外未加入化学增感剂,只能感受可见光谱中的蓝紫两色,对其他各种色光不感受。 感色范围为330nm-480nm的波长区(图3-14)。 为一种低速感光片,银粒细,反差大,解象力高。 适于黑白、蓝紫等色光影象的显微摄影,不能用以拍摄红、绿和黄等色的影象。 胶片对这些色光不感受,在照片上呈黑灰一片,不能分辨。 所以,用醋酸洋红和孚尔根反应的染色体标本,不能使用色盲片摄影,铁矾苏木精制片的标本可以使用色盲片。 2pzD_G_DF @_y"f*_g 分色片: 感光乳剂中加入了黄绿增感色素,除感受蓝紫色外,对黄绿二色也能感受,对红橙色光仍不能感受,感受范围为波长300μm-600μm区段(图3-15乙),除红橙色标本外,可广泛用于显微摄影,是一理想的显微摄影胶片,它不仅反差强,颗料细,并能记录出较多的亮度等级和较宽的感受范围。 用醋酸洋红染色和孚尔根反应的标本,仍不能使用分色片拍摄。 _ =_h/ 全色片: 乳剂中添加了公演增感色素,对可见光谱的各波段色光能全部感受,故称全色片,感色范围为330-700μm(图3-15丙),共中对绿色光感应稍弱。 胶片的银粒粗、感光速度快、反差小、黑白等级多。 这些特点,会使显微摄影本来影象反差就小,黑白对比不鲜明的缺点更加突出。 照片中的染色体不黑,背景不白,呈灰暗状态,使用感光底低(ASA50以下)的全色胶片,可获良好的效果。 pUC__E_G&3 2、感光度 指胶片对光线作用的敏感程度,即感光速度。 显微摄影对胶片的感光速度没有特写的要求,选用胶片时,考虑的不是速度本身,而是与感光速度相关的质量因素,凡属感光度高的胶片,乳剂的银粒粗、反差小、灰雾大、保存性差;感光速度低的胶片、银粒细、反差大、灰雾小,保存性好。 所以,显微摄影力求使用低感光度的胶片,以便获得反差高、银粒细腻、清晰度高的摄影效果。 目前,市场供应的GB21°(ASA50)全色胶片,不是理想的显微摄影用胶片,感光度在ASA100以下适于显微摄影。 n^Ur;/lO 3、反差和反差系数 反差是指被摄物体景象中明亮部分与阴暗部分亮度差别的程度。 胶片的反差,用反差系数表示。 它是指胶片影象反差与被摄物体影象反差的比值。 即: }"i\_|4_*_ Y{8_a]di_" 若胶片上影象反差大于物体影象反差,则胶片的反差系数大于1;胶片影象反差小于物体影象反差时,胶片的反差系数小于1。 同一视野的相同影象,用不同反差系数的胶片拍摄,能拍出不同反差效果的底片。 反差系数愈大,底片的影象反差愈强,黑白对比愈分明;反差系数愈小,底片反差愈弱,色调灰暗,影象黑白对比不鲜明。 显微摄影选用高反差系数,对控制影象的质量是十分重要的。 应作为选用胶片的重要质量指标。 __QJ0g\g 除上所述,胶片的有效期限、乳剂号、胶片牌号和制造厂家,也是选用胶片时,加以考虑的因素。 _;f+g5_P]& 五、滤色镜的选用__x70+*a@ 滤色镜是显微摄影必备的光学滤光元件,利用滤色镜对色光选择吸收的原理,通过控制色光,突出或抑制影象在胶片上的感应,以期获得理想的照相底片。 N; Gn}t bQ 黑白胶片的显微摄影,是把视野中的彩色影象,以黑白两色及其不同程度的灰色中间层次,将影象录在负片上。 利用滤色镜控制照明光束的不同色光,调整影色的色调和反差,可拍出各种不同效果的底片,甚至拍出在反差和清晰度上优于原物体影象的底片。 _WZ+`1+__F _{eA_W8-$ 一束白光,色散后形成红、橙、黄、绿、青、蓝和紫七种单色光。 这段可见光谱的波长为400-700μm,为实际应用的方便,通常将该七种色光概括为红、绿和蓝三段。 白光就是由这三种色光等量混合组成。 而红、绿和蓝色光的不等量混合,会形成各种不同的色光。 e@qH`_D_4 在摄影中,通常把红色光、绿色光和蓝色光称作三原色光。 把蓝光与黄光、绿光与品红光、红光与青光称作三对互补色光,这三对互补色光分别相加皆可得到白光、黄、品红和青三色,就称为红,绿和蓝三原色的补色。 04u-SzKOk 滤色镜对各种色光有选择吸收的特性,凡与滤色镜颜色相同的色光则能透过,而与滤色镜颜色互补的色光则被吸收。 例如,绿滤色镜,在白光下把光谱中的蓝色光区段和红色光区段全部吸收,只让绿色光段的色光透过,滤色镜显示绿色。 黄滤色镜吸收蓝色光,透过红光和绿色光。 红滤色镜,把光谱中由绿到红段的光波全部吸收,只让红色的一段光透射。 蓝滤色镜吸收了由红到绿段的色光,仅让红色的一段光透射,蓝色滤色镜吸收了由红到绿段的色光,仅使蓝色光通过(图3-15)。 }__zj`kmV] 在显微镜的光路上,加用滤色镜,从白光中减去与滤色镜颜色互补的色光,使改变的色光透射物体,造成影象色调和反差的改变。 显微摄影利用滤色镜提高影象的反差和清晰度,以获得理想的底片,被摄物体反射出来的色光,如果被滤色镜透过,在黑白底片上产生相应的密度,印放出照片,这部分影调,比较明亮,假若该色光被滤色镜吸收,底片上的密度就薄,制出的照片影调就暗。 o__io7s0_[ 为提高影象反差,选用滤色镜的原则: 选用与被摄物体吸收的色光同一颜色的滤色镜,即选用被摄物体的补色滤色镜,则可达到理想的最佳影象对比。 因为视野中的物体影象的色调和反差,可被补色的滤色镜加强,而被同色的滤色镜所削弱。 举例说明如下: A|_N8_/#T 染色体用铁矾苏木精染色
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