微生物实验指导简章.docx
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微生物实验指导简章
实验一显微镜构造、使用方法与细菌形态观察
一、目的要求
1.了解显微镜的构造、性能及成像原理。
2.掌握显微镜的正确使用及维护方法。
3.观察细菌3种基本形态。
二、仪器材料
1.显微镜、纱布、绸布、香柏油、二甲苯、擦镜纸
2.细菌示教标本片
三、普通光学显微镜简介
微生物的最显著的特点就是个体微小,必须借助显微镜才能观察到它们的个体形态和细胞结构。
熟悉显微镜并掌握其操作技术是研究微生物不可缺少的手段。
显微镜可分为电子显微镜和光学显微镜两大类。
光学显微镜包括:
明视野显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜、立体显微镜等。
其中明视野显微镜为最常用普通光学显微镜,其它显微镜都是在此基础上发展而来的,基本结构相同,只是在某些部分作了一些改变。
明视野显微镜简称显微镜。
(一)显微镜的构造
普通光学显微镜的构造可以分为机械和光学系统两大部分。
图1-1显微镜构造
1.目镜2.镜筒3.转换器4.物镜5.载物台6.聚光器7.虹彩光圈
8.聚光镜调节钮9.反光镜10.底座11.镜臂12.标本片移动钮
13.细调焦旋钮14.粗调焦旋钮15.电源开关16.光亮调节钮17.光源
1.机械系统:
(1)镜座Base:
在显微镜的底部,呈马蹄形、长方形、三角形等。
(2)镜臂Arm:
连接镜座和镜筒之间的部分,呈圆弧形,作为移动显微镜时的握持部分。
(3)镜筒Tube:
位于镜臂上端的空心圆筒,是光线的通道。
镜筒的上端可插入接目镜,下面可与转换器相连接。
镜筒的长度一般为160mm。
显微镜分为直筒式和斜筒式;有单筒式的,也有双筒式的。
(4)旋转器Nosepiece:
位于镜筒下端,是一个可以旋转的圆盘。
有3~4个孔,用于安装不同放大倍数的接物镜。
(5)载物台Stage:
是支持被检标本的平台,呈方形或圆形。
中央有孔可透过光线,台上有用来固定标本的夹子和标本移动器。
(6)调焦旋钮:
包括粗调焦钮Coarseadjustmentknob和细调焦钮Fineadjustmentknob,是调节载物台或镜筒上下移动的装置。
2.光学系统
(1)接物镜Objectivelens,常称为镜头,简称物镜,是显微镜中最重要的部分,由许多块透镜组成。
其作用是将标本上的待检物进行放大,形成一个倒立的实像,一般显微镜有3~4和物镜,根据使用方法的差异可分为干燥系和油浸系两组。
干燥系物镜包括低倍物镜(4~10x)和高倍物镜(40~45x),使用时物镜与标本之间的介质是空气;油浸系物镜(90~100x)在使用时,物镜与标本之间加有一种折射率与玻璃折射率几乎相等的油类物质(香柏油)作为介质。
1——放大倍数
2——数值口径
3——镜筒长度要求
4——指定盖玻片厚度
(2)接目镜Eyepiecelens:
通常称为目镜,一般由2~3块透镜组成。
其作用将由物镜所形成的实像进一步放大,并形成虚像而印入眼帘。
一般显微镜的标准目镜是10x。
(3)聚光镜Condenser:
位于载物台的下方,由两个或几个透镜组成,其作用是将由光源来的光线聚成一个锥形光拄。
聚光镜可以通过位于载物台下方的聚光镜调节旋钮进行上下调节,以求得最适光度。
聚光器还俯有虹彩光圈(IrisdiapHragm),此调节锥形光拄的角度和大小,以控制进入物镜的光的量。
(4)反光镜:
反光镜是一个双面镜,一面是平面,另一面是凹面,起着把外来光线变成平行光线进入聚光镜的作用。
使用内光源的显微镜就无需反光镜。
(5)光源:
日光和灯光均可,以日光较好,其光色和光强都比较容易控制,有的显微镜采用装在底座内的内光源。
(二)显微镜的成像原理
显微镜的放大作用是由物镜和目镜共同完成的。
标本经物镜放大后,在目镜的焦平面上形成一个倒立实像,再经目镜进一步放大形成一个虚像,被人眼所观察到(图1-3)。
在油镜系中,载玻片与镜头之间多用香柏油作介质。
因香柏油的折射率(n=1.51)与玻璃的折射率(n=1.52)几乎相等,故透过载玻片的光线通过香柏油后,直接进入物镜,而不发生折射。
两组物镜光线通路的区别如图1-4所示
图1-3显微镜成像原理图1-4物镜光线通路
(三)显微镜的性能
1.分辨率和数值口径
衡量显微镜性能好坏的指标主要是显微镜的分辨率,显微镜的分辨率(Resolvingpower)是指显微镜将样品上相互接近的两点清晰分辨出来的能力。
它主要取决于物镜的分辨能力,物镜的分辨力是所用光的波长和物镜数值口径的函数。
分辨率用镜头所能分辨出的两点间的最小距离表示,距离越小,分辨能力越好。
可用公式表示:
物镜的数值口径(Numbericalaperture),简写为(N.A):
表示从聚光镜发出的锥形光柱照射在观察标本上,能被物镜所聚集的量。
可用公式表示:
n——标本和物镜之间介质的折射率
θ——由光源投射到透镜上的光线和光轴之间的最大夹角
光线投射到物镜的角度越大,数值口径就越大。
如果采用一些高折射率的物质作介质,如使用油镜时采用香柏油作介质,则数值口径增大,从而提高分辩能力。
物镜镜筒上标有数值口径,低倍镜为0.25,高倍镜为0.65,油浸镜为1.25。
这些数值是在其它条件都适宜的情况下的最高值,实际使用时,往往低于所标的值。
2.放大倍数、焦距和工作距离
显微镜的放大倍数是物镜和目镜放大倍数的乘积。
放大倍数一样时,由于目镜和物镜搭配不同,其分辨率也不同。
一般来说,增加放大倍数应该是尽量用放大倍数高的物镜。
物镜的放大倍数越大,焦距越短,物镜和样品之间的距离(工作距离)便越短。
(四)显微镜的使用指南
1.观察前的准备:
显微镜的安置:
取放显微镜时应一手握住镜臂、一手托住底座,使显微镜保持直立、平稳。
置显微镜于平整的实验台上,镜座距实验台边缘3~4cm。
镜检时姿势要端正。
接通电源,根据所用物镜的放大倍数,调节光亮度调节钮、调节虹彩光圈的大小,使视野内的光线均匀、亮度适宜。
2.显微观察:
(1)接通电源,采用白炽灯为光源时,应在聚光镜下加一蓝色的滤色片,除去黄光。
一般情况下,对于初学者,进行显微观察时应遵从低倍镜到高倍镜再到油浸镜的观察程序,因为低倍镜视野较大,易发现目标及确定检查的位置。
(2)低倍镜观察,将做好的酵母标本片固定在载物台上,用标本夹夹住,移动推进器使观察对象处在物镜的正下放。
旋转旋转器,将10x物镜调至光路中央。
旋转粗调焦钮将载物台升起,从侧面注视小心调节物镜接近标本片,然后用目镜观察,慢慢降载物台,使标本在视野中初步聚焦,再使用细调节钮调节图像清晰。
通过玻片夹推进器慢慢移动玻片,认真观察标本个部位,找到合适的目的物,仔细观察并记录所观察的结果。
调焦时只应降载物台,以免一时的误操作而损坏镜头。
注意无论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察,以减少眼睛的疲劳,也便于边观察边绘图记录。
(3)高倍镜观察,在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心,轻轻转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置。
对聚光镜光圈及视野亮度进行适当调节后微调细调节钮使物像清晰,仔细观察并记录。
如果,高倍镜和低倍镜不同焦,则按照低倍镜的调焦方法从新调节焦距。
(4)油浸镜观察首先,将油镜转入光路,聚光镜上升到最高,适当扩大光圈,获得较强的光线。
其次,在标本片的待检部位滴加一滴香柏油,固定到载物台上,侧面注视,移动十字推进器,找准待检部位,调节粗调旋钮,上升载物台,镜头必须浸到油,压住油向四面扩散,有模糊的构象,再稍调微调,有压缩的迹象。
最后,眼睛对准目镜,慢慢下降载物台,调节调焦旋钮,直至视野内出现清晰物像,如果油镜离开油面仍未找到,重复操作。
仔细观察并作记录。
3.显微镜的维护:
(1)观察结束后,先降载物台,取下载玻片。
(2)用擦镜纸分别擦拭物镜和目镜。
(3)用擦镜纸拭去镜头上的油,然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留
的油迹,最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。
(4)清洁显微镜的金属部件。
(5)将各部分还原,将物镜转成“八”字形,同时把聚光镜降下,以免物镜
和聚光镜发生碰撞危险。
(6)把显微镜放回原处。
四、结果记录
正确绘制细菌基本的三种形态?
五.思考题
1.对照实物,熟悉显微镜的构造?
2.有哪些部件可以调节视野中光的强弱?
3.有哪些方法可以提高显微镜的分辨率?
为什么在用高倍镜和油镜观察标本
之前要先用低倍镜进行观察。
实验二酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
一、目的要求
1.进一步学习并掌握光学显微镜低倍镜和高倍镜的使用方法;
2.观察并掌握酵母菌的细胞形态及其子囊、子囊孢子和假菌丝的形态;
3.学习并掌握鉴别酵母菌细胞死活的方法;
4.了解酵母菌子囊孢子的染色方法及假菌丝观察的压片培养法。
二、仪器材料
1.菌种:
酿酒酵母、热带假丝酵母、粟酒裂殖酵母
2.染色液:
0.1%美蓝染色液、孔雀绿染色液、沙黄染色液、95%乙醇等
3.其他:
显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸等
三、基本原理
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物,其大小通常比常见的细菌大几倍甚至几十倍,因此,不必染色即可用显微镜观察其形态。
大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖,有的二分裂殖;子囊菌纲中的酵母菌在一定条件下,可产生子囊孢子进行有性生殖。
酵母菌假菌丝的生成与培养基的种类、培养条件等因素有关。
美蓝是一种弱氧化剂,氧化态呈蓝色,还原态呈无色。
用美蓝对酵母细胞进行染色时,活细胞由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力,能将美蓝由篮色的氧化态转变为无色的还原态型,从而细胞呈无色;而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则由于细胞内还原力较弱而不具备这种能力,从而细胞呈蓝色,据此可对酵母菌的细胞死活进行鉴别。
四、操作步骤
1.水浸片观察:
(1)制片:
在干净的载玻片中央加一滴预先稀释至适宜浓度的酵母液体培养物,从侧面盖上一片盖玻片(先将盖玻片一边与菌液接触,然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上),应避免产生气泡,并用吸水纸吸去多余的水分(菌液不宜过多或过少,否则,在盖盖玻片时,菌液会溢出或出现气泡而影响观察;盖玻片不宜平着放下,以免产生气泡)。
(2)镜检:
将制作好的水浸片置于显微镜的载物台上,先用低倍镜,后用高倍镜进行观察,注意观察各种酵母的细胞形态和繁殖方式,并进行记录。
2.美蓝染色
(1)染色:
在干净的载玻片中央加一小滴0.1%美蓝染色液,然后再加一小滴预先稀释至适宜浓度的酿酒酵母液体培养物,混匀后从侧面盖上盖玻片,并吸去多余的水分和染色液(注意染色液和菌液不宜过多或过少,并应基本等量,而且要混匀)。
(2)镜检:
将制好的染色片置于显微镜的载物台上,放置约3min后进行镜检,先用低倍镜,后用高倍镜进行观察,根据细胞颜色区分死细胞(蓝色)和活细胞(无色),并进行记录。
(3)比较:
染色约30min后再次进行观察,注意死细胞数量是否增加。
3.子囊孢子的染色与观察
(1)活化酵母:
将酿酒酵母移种至新鲜的麦芽汁琼脂斜面上,培养24h,然后再转种2~3次
(2)生孢培养:
将经活化的菌种转移到醋酸钠培养基上,28℃培养7~10d。
(3)制片:
在洁净载玻片的中央滴一小滴蒸馏水,用接种环于无菌条件下挑取少许菌苔至水滴上,涂布均匀,自然风干后在酒精灯火焰上热固定(水和菌均不要太多,涂布时应尽量涂开,否则将造成干燥时间长;热固定温度不宜太高,以免使菌体变形)。
(4)染色:
滴加数滴孔雀绿染色液,1min后水洗;加95%乙醇脱色30s,水洗;最后用0.5%沙黄染色液复染30s,水洗,最后用吸水纸吸干。
(5)镜检:
将染色片置于显微镜的载物台上,先用低倍镜,后用高倍镜进行观察,子囊孢子呈绿色,菌体和子囊呈粉红色。
注意观察子囊孢子的数目、形状,并进行记录。
4.假菌丝的观察
压片培养法:
取新鲜的酵母菌在薄层马铃薯浸出汁琼脂培养基平板上划线接种2~3条,取无菌盖玻片盖在接种线上,于25~28℃培养4~5天后,打开皿盖,置于显微镜下直接观察划线的两侧所形成的假菌丝的形状。
五、结果记录
1.绘制各种酵母菌的细胞形态图,注明菌名与放大倍数?
2.图示美蓝染色结果,对死活酵母细胞进行美蓝染色鉴别?
六、思考题
用美蓝染色法对酵母细胞进行死活鉴别时为什么要控制染液的浓度和染色时间?
实验三霉菌的形态观察
一.目的要求
1.观察霉菌的菌丝以及菌丝体。
2.观察霉菌营养和气生菌丝体的特化形态
3.学会用水浸法观察霉菌的技术。
二.仪器材料
1.菌种:
黑根霉、总状毛霉、产黄青霉、木霉、黑曲霉、犁头霉等斜面菌种。
2.试剂与培养基:
乳酸—石炭酸液、PDA培养基
3.其他:
接种针、接种环、酒精灯、载玻片
三.原理
霉菌形态比细菌、酵母菌复杂,个体比较大,具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。
霉菌营养体的基本形态单位是菌丝,包括有隔菌丝和无隔菌丝。
营养菌丝分布在营养基质的内部,气生菌丝伸展到空气中。
营养菌丝体除基本结构以外,有的霉菌还有一些特化形态,例如假根、匍匐菌丝、吸器等。
霉菌的繁殖体不仅包括无性繁殖体,例如分生孢子头,孢子囊等,包裹其内或附着其上的有各类天性孢子;还包括有性露殖结构,例如于囊果,其内形成有性孢子。
在观察时要注意细胞的大小,菌丝构造和繁殖方式。
四.操作步骤
倒平板一接种—制片一镜检一描述绘图
1.倒平板
将PDA培养基融化后,倒10一12mL于灭菌培养皿内,凝固后使用。
2.接种与培养
将青霉、木霉、毛霉、曲霉、根霉、犁头霉接种在不同的平皿中,置于28-30℃的恒温箱中培养3—7d。
3.制水浸片
取洁净的载玻片,分别滴加l滴乳酸—石炭酸液,挑取不同菌株的一团菌丝,分别置于不同的栽玻片上(用记号笔标记菌株名称),加盖玻片。
4.观察
(1)观察青霉、木霉、毛霉、曲霉形态
选取相应标记载玻片,观察霉菌的菌丝及其分隔情况。
观察菌丝体,观察分生抱于着生情况(要求辨认分生孢子枝、顶囊、小梗及分生抱子)。
(2)观察根霉形态
选取根霉载玻片,观察假根、匍匐枝、孢子囊柄、孢子囊以及孢囊孢子。
(3)观察犁头霉形态
选取标记犁头霉的载玻片,观察梨头霉的接合抱子
五.结果记录
1.把观察到的各种霉菌绘图,并注明各部分名称。
2.列表比较根霉与毛霉,青霉与曲霉在形态结构上的异同。
六.思考题
1.为何要用乳酸—石炭酸溶液作霉菌水浸片?
2.比较霉菌菌丝与假丝酵母菌丝的区别?
实验四细菌的简单染色和革兰氏染色
一、目的要求
1.掌握染色的原理和操作过程
2.掌握简单染色和革兰氏染色法
3.熟练显微镜的使用技术
二、原理
由于菌体极小,折光率低,在显微镜下不容易看清,如将其染色,使菌体和背景之间反差增大,折光率增强,就容易看清,简单染色法只用一种染料着色。
革兰氏染色法是细菌染色中一种重要的鉴别染色法。
通过此法染色,可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌和阴性菌两大类。
其过程是:
草酸铵结晶紫初染→路哥氏碘液媒染→95%乙醇脱色→蕃红复染。
若细胞能保持结晶紫与碘所形成的复合物而不被乙醇脱色,则细菌呈紫色,称革兰氏阳性菌,若被乙醇脱色而被蕃红复染成红色,则称革兰氏阴性菌,
三、仪器材料
1.菌种:
金黄色葡萄球菌、炭疽杆菌、大肠杆菌。
2.染色液:
草酸铵结晶紫液、路哥氏碘液、95%乙醇、蕃红。
3.其他:
载玻片、盖玻片、酒精灯、火柴、试管架、废液缸、洗瓶、吸水纸、接种环、显微镜、镊子、蒸馏水、二甲苯、香柏油等。
四、操作步骤
(一)简单染色法涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检
1.涂片取洁净载玻片,在中央滴一滴生理盐水(或无菌水),用接种环以无菌操作挑取欲观察菌体,和水充分混匀,涂成极薄的菌膜。
2.干燥室温自然干燥或略微加热干燥。
3.固定涂面朝上,快速通过火焰2—3次(勿使涂片烫手)。
4.染色放平染料,用自来水冲洗,直到涂片上流下的水无色为止。
5.干燥自然干燥或吸水纸吸干,或用电吹风吹干。
(二)革兰氏染色法
涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫初染→水洗→碘液媒染→95%酒精脱色20~30秒→水洗→蕃红花红液复染→水洗干燥→镜检
1.涂片:
先滴一小滴蒸馏水于载玻片中央,然后用接种环取少量菌体轻轻混入水中,涂成一薄层并使细胞均匀分散。
2.干燥:
在空气中令其自然干燥或在酒精灯火焰上端高处微微加温但勿靠近火焰。
3.固定:
把涂有细菌的面朝上,在酒精灯火焰上通过三次,目的是杀死菌体细胞以及改变对染色剂通透性,使涂片的菌体紧贴载玻片而不易被水冲洗脱落。
4.初染:
用草酸铵结晶紫液初染1min,水洗、吸干。
5.媒染:
加一滴路哥尔氏碘液媒染1min、水洗。
(此时结晶紫与碘液成复合物)
6.脱色:
斜置载玻片,用95%酒精冲洗约20~30s,立即水洗,吸干。
7.复染:
用蕃红花红液复染1~2min,水洗晾干或用吸水纸吸干。
8.镜检:
在显微镜油浸镜下检查革兰氏阳性菌和阴性菌染色的差异,并观察菌体形态。
(三)革兰氏染色成败的控制点
1.涂片厚度:
涂片过厚,细胞重叠,无法较好地观察单个细菌细胞形态,涂片过薄,细胞数量少,不利于观察;
2.染色时间。
染色时间过长,结晶紫与细胞结合,脱色不易,染色不够,结晶紫尚未与细胞结合。
染色控制不好,易引起误判;
3.乙醇脱色的程度。
如脱色过度,则阳性菌被误染为阴性菌;若脱色不够,则阴性菌被误染为阳性菌。
五、结果记录
说明3株细菌的染色观察结果(形态、颜色革兰氏染色结果)?
六.思考题
1.你认为制备细菌染色标本时,应注意哪些环节?
2.哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?
其中最关键的环节是什么?
实验五培养基的制备与灭菌
一、目的要求
1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2.掌握培养基的配置方法。
3.掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、基本原理
正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。
由于微生物种类及代谢类型的多样性.因而用于培养微生物的培养基的种类也很多,它们的配方及配制方法虽各有差异。
但一般培养基的配制程序却大致相同.例如器皿的准备,培养基的配制与分装,棉塞的制作,培养基的灭菌,斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。
三、仪器材料
1.仪器:
天平、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱。
2.试剂:
牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/LNaOH、1mol/LHCl。
3.玻璃器皿:
移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
4.其他:
药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤
1.称量根据用量按比例依次称取成分,牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯,蛋白胨易吸湿,称量时要迅速。
2.溶解在烧杯中加入少于所需要的水量,加热,加入各成分,使其溶解,琼脂在溶液煮沸后加入,融化过程需不断搅拌。
加热时应注意火力,勿使培养基烧焦或溢出。
溶好后,补足所需水分。
3.调PH用1mol/LNaOH或1mol/LHCl把PH调至所需范围。
4.过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利于某些实验结果的观察,如无特殊要求时可省去此步骤。
5.分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内,分装装置如实验图8所示;分装时注意,勿使培养基沾染在容器口上,以免沾染棉塞引起污染。
(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜,分装三角瓶的量则根据需要而定,一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。
(2)固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,斜面长度不超过管长的1/2。
分装三解瓶,以不超过容积的1/2为宜。
(3)半固体分装装置以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
6.加棉塞分装完毕后,在试管口或三解瓶口塞上棉塞(或泡沫塑料塞及试管帽等,以阻止外界微生物进入培养基而造成污染,并保证有良好的通气性能。
7.包扎棉塞头上包一层牛皮纸,扎紧,即可进行灭菌。
8.保存灭菌后的培养基放入37℃养箱中培养24小时,以检验灭菌的效果,无污染方可使用。
五、结果记录
说明你配制培养基过程中的情况?
六.思考题
1.培养基配制时应注意什么问题?
为什么?
2.分装培养基时为什么要使用弹簧夹?
3.培养基配好后,为什么要立即灭菌?
附录
一、玻璃器皿的洗涤和包装
1.玻璃器皿的洗涤
玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中.用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡,再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2.灭菌前玻璃器皿的包装
(1)培养皿的包扎:
培养皿由一盖一底组成一套,可用报纸将几套培养皿包
成一包,或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
(2)
移液管的包扎:
在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉),它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内,并防止菌液等吸入口中。
塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右,棉花自身长度约1~1.5cm。
塞棉花时.可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。
棉花要塞得松紧适宜,吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。
先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条,然后将已塞好棉花的移液管尖端
放在长条报纸的一端,约成45℃角,折叠纸条包住尖端,用左手握住移液管身,有手将移液管压紧.在桌面上向前搓转,以螺旋式包扎起来。
上端剩余纸条,折叠打结,准备灭菌。
二、液体及固体培养基的配制过程
1.液体培养基配制
1)称量:
一般可用0.01g天平称量配制培养基所需的各种药品,先按培养基配方计算出各成分的用量.然后进行准确称量。
2)溶解:
将称好的药品置于一烧杯中,先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水),用玻璃棒搅动,加热溶解。
3)定容:
待全部药品溶解后,倒入一量筒中,加水至所需体积。
如某种药品用量太少时,可预先配成较浓溶液,然后按比例吸取一定体积溶液,加入至培养基中。
4)调pH:
一般用pH试纸测定培养基的pH。
用剪刀剪出一小段pH试纸,然后用镊子夹取此段pH试纸,在培养基中蘸一下,观看其pH范围,如培养基偏酸或偏碱时,可用1mol/LNaoH或1mol/LHCl溶液进行调节。
调节pH时,应逐滴加入NaOH或HCI溶液,防止局部过酸或过碱,破坏培养基中成分。
边加边搅拌,并不时用pH试纸测试,直至达到所需pH为止。
5)过滤:
用滤纸或多层纱布过滤培养基。
一般无特殊要求时,此步可省去。
2.固体培养基的配制
配制固体培养基时,应将已配好的液体培养基加热煮沸,再将称好的琼脂(1.5~2%)加入,并用玻棒不断搅拌,以免糊底烧焦。
继续加热至琼脂全部融化,最后补足因蒸发而失去水分。
三、培养基的分装
根据不同需要,可将已配好培养基分装入试管或三角瓶内,分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口,造成污染。
如操作不小心,培养基沾污管口或瓶口时,可用镊子夹一小块脱脂棉,擦去管口或瓶口的培养基,并将脱脂棉弃去。
1.试管的分装
图8-2培养基的分装
取一个玻璃漏斗,装在铁架上,漏斗下连一根橡皮管,橡皮管下端再与另一玻璃管相接,橡皮管的中部加一弹簧夹。
分装时,用左手拿住空试管中部,并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内,以右手拇指及食指开放弹簧夹,中指及无名指夹佐玻璃管嘴,使培养基直接流入试管内。
装入试管培养基的量视试管大小及需要而定,若所用试管大小为15×150mm时,液体培养基可分装至试管高度1/4左有为宜;如分装固体或半固体培养基时,在琼脂完
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