植物赤霉素GA说明书1.docx
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植物赤霉素GA说明书1.docx
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植物赤霉素GA说明书1
植物赤霉素(GA)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的:
本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其
它相关样本中赤霉素(GA)含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物赤霉素(GA)水平。
用纯化的植物赤霉素(GA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入植物赤霉素(GA),再与HRP标记的赤霉素(GA)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的赤霉素(GA)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物赤霉素(GA)浓度。
试剂盒组成:
试剂盒组成
48孔配置
96孔配置
保存
说明书
1份
1份
封板膜
2片(48)
2片(96)
密封袋
1个
1个
酶标包被板
1×48
1×96
2-8℃保存
标准品:
135pmol/L
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8℃保存
标准品稀释液
1.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2-8℃保存
酶标试剂
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
样品稀释液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂A液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂B液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
终止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
浓缩洗涤液
(20ml×20倍)×1瓶
(20ml×30倍)×1瓶
2-8℃保存
标本要求:
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:
1.标准品的稀释与加样:
在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100µl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50µl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100µl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50µl弃掉,再各取50µl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各
1
取50µl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl,混匀后从第七、第八孔中分别取50µl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50µl,混匀后从第九第十孔中各取50µl弃掉。
(稀释后各孔加样量都为50µl,
浓度分别为90pmol/L,60pmol/L,30pmol/L,15pmol/L,7.5pmol/L)。
2.加样:
分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:
用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:
将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.洗涤:
小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:
每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。
7.温育:
操作同3。
8.洗涤:
操作同5。
9.显色:
每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15分钟.
10.终止:
每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:
以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项:
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。
一次加样时间最好
控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,
2
在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
(此图仅供参考)
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围:
5pmol/L-100pmol/L
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存:
;2-8℃。
2.有效期:
6个月
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PlantGibberellicAcid
FORRESEARCHUSEONLY
DrugNames
GenericName:
PlantGibberellicAcid(GA)ELISAKit.
Purpose
ThiskitallowsforthedeterminationofGAconcentrationsinPlanttissue,cellandothersamples.
Principleoftheassay
ThekitassayPlantGAlevelinthesample,usePurifiedPlantGAantibodytocoatmicrotiterplatewells,makesolid-phaseantibody,thenaddGAtowells,CombinedGAantibodywhichWithHRPlabeled,becomeantibody-antigen-enzyme-antibodycomplex,afterwashingCompletely,AddTMBsubstratesolution,TMBsubstratebecomesbluecolorAtHRPenzyme-catalyzed,reactionisterminatedbytheadditionofasulphuricacidsolutionandthecolorchangeismeasuredspectrophotometricallyatawavelengthof450nm.TheconcentrationofGAinthesamplesisthendeterminedbycomparingtheO.D.ofthesamplestothestandardcurve.
4
Materialsprovidedwiththekit
Materialsprovidedwith
48determinations
96determinations
Storage
thekit
Usermanual
1
1
Closureplate
2
2
membrane
Sealedbags
1
1
Microelisastripplate
1
1
2-8℃
Standard:
135pmol/L
0.5ml×1bottle
0.5ml×1bottle
2-8℃
Standarddiluent
1.5ml×1bottle
1.5ml×1bottle
2-8℃
HRP-Conjugatereagent
3ml×1bottle
6ml×1bottle
2-8℃
Samplediluent
3ml×1bottle
6ml×1bottle
2-8℃
ChromogenSolutionA
3ml×1bottle
6ml×1bottle
2-8℃
ChromogenSolutionB
3ml×1bottle
6ml×1bottle
2-8℃
StopSolution
3ml×1bottle
6ml×1bottle
2-8℃
washsolution
(20ml×20fold)
(20ml×30fold)
2-8℃
×1bottle
×1bottle
Specimenrequirements
1.extractassoonaspossibleafterSpecimencollection,andaccordingtotherelevantliterature,andshouldbeexperimentassoonaspossibleaftertheextraction.Ifitcan’t,specimencanbekeptin-20℃topreserve,Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.
2.Can’tdetectthesamplewhichcontainNaN3,becauseNaN3inhibitsHRPactive.
Assayprocedure
1.DiluteandaddsampletoStandard:
set10StandardwellsontheELISAplatescoated,addStandard100µltothefirstandthesecondwell,thenaddStandarddilution50µltothefirstandthesecondwell,mix;takeout100µlformthefirstandthesecondwellthenaddittothethirdandtheforthwellseparately.thenaddStandarddilution50µltothethirdandtheforthwell,mix;thentakeout50µlfromthethirdandtheforthwelldiscard,add50µltothefifthandthesixthwell,thenaddStandarddilution50µltothefifthandthesixthwell,mix;takeout50µlfromthefifthandthesixthwellandaddtotheseventhandtheeighthwell,thenaddStandarddilution50µltotheseventhandtheeighthwell,mix;takeout50µlfromtheseventhandtheeighthwellandaddtotheninthandthetenthwell,addStandarddilution50µltotheninthand
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