1、植物赤霉素GA说明书1植物赤霉素(GA)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中赤霉素(GA)含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物赤霉素(GA)水平。用纯化的植物赤霉素(GA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物赤霉素(GA)，再与 HRP 标记的赤霉素(GA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的赤霉素(GA)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波
2、长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中植物赤霉素(GA)浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48 孔配置96 孔配置保存说明书1 份1 份封板膜2 片（48）2 片（96）密封袋1 个1 个酶标包被板1481962-8保存标准品：135pmol/L0.5ml1 瓶0.5ml1 瓶2-8保存标准品稀释液1.5ml1 瓶1.5ml1 瓶2-8保存酶标试剂3 ml1 瓶6 ml1 瓶2-8保存样品稀释液3 ml1 瓶6 ml1 瓶2-8保存显色剂 A 液3 ml1 瓶6 ml1 瓶2-8保存显色剂 B 液3 ml1 瓶6 ml1 瓶2-8保存终止液3ml1 瓶6ml1 瓶2-8保存浓缩洗涤液（2
3、0ml20 倍）1 瓶（20ml30 倍）1 瓶2-8保存标本要求：1标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融2不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤：1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品 100l，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50l，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取 100l 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50l，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50l 弃掉，再各
4、取 50l 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各1取 50l 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50l，混匀后从第七、第八孔中分别取 50l 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50l，混匀后从第九第十孔中各取 50l 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50l，浓度分别为 90pmol/L，60pmol/L，30pmol/L，15pmol/L ，7.5pmol/L）。2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品
5、稀释液 40l，然后再加待测样品 10l（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置 37温育 30 分钟。4. 配液：将 30（48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30（48T 的 20 倍）倍稀释后备用。5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。7. 温育：操作同 3。8. 洗涤：操作同 5。9. 显色：每孔先加入显色剂 A50l，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色15 分钟.10.
6、 终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。注意事项：1 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大
7、于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（n5）。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 底物请避光保存。7 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9 本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，2在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算
8、出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.95 以上。2.批内与批见应分别小于 9%和 11%检测范围：5pmol/L -100pmol/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8。2有效期：6 个月3Plant Gibberellic AcidFOR RESEARCH USE ONLYDrug NamesGeneric Name：Plant Gibberellic Acid (GA) ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of GA c
9、oncentrations in Plant tissue ,cell and other samples.Principle of the assayThe kit assay Plant GA level in the sample，use Purified Plant GA antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add GA to wells, Combined GA antibody which With HRP labeled ,become antibody - antige
10、n - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The conce
11、ntration of GA in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.4Materials provided with the kitMaterials provided with48determinations96 determinationsStoragethe kitUser manual11Closure plate22membraneSealed bags11Microelisa stripplate112-8Standard：135pmo
12、l/L0.5ml1 bottle0.5ml1 bottle2-8Standard diluent1.5ml1 bottle1.5ml1 bottle2-8HRP-Conjugate reagent3ml1 bottle6ml1 bottle2-8Sample diluent3ml1 bottle6ml1 bottle2-8Chromogen Solution A3ml1 bottle6ml1 bottle2-8Chromogen Solution B3ml1 bottle6ml1 bottle2-8Stop Solution3ml1 bottle6ml1 bottle2-8washsoluti
13、on（20ml20 fold）（20ml30 fold）2-81bottle1bottleSpecimen requirements1. extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant literature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it cant, specimen can be kept in -20 to preserve, Avoid repeated
14、freeze-thaw cycles.2. Cant detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.Assay procedure1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100l to the first and the second well, then add Standard dilution 50l to the first and
15、the second well, mix; take out 100l form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately. then add Standard dilution 50l to the third and the forth well ,mix ; then take out 50l from the third and the forth well discard, add 50l to the fifth and the sixth well ,t
16、hen add Standard dilution 50l to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50l from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50l to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50l from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50l to the ninth and5
