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检验本科毕业论文血液
R446.11+1单位代码:
10660
学号:
***********
成都医学院2005级医学检验系本科毕业生论文
两种凝血试剂在CA-7000上的结果分析
学生:
袁锐
******
年级:
2005级
专业:
医学检验
2010年3月20日
摘要………………………………………………3
前言………………………………………………3
材料与方法…………………………………………3
结果………………………………………………4
讨论………………………………………………5
参考文献……………………………………………6
英文摘要……………………………………………6
致谢………………………………………………6
略缩词表……………………………………………8
论文原创性声明……………………………………8
附:
综述…………………………………………8
两种凝血试剂在CA-7000上的结果分析
学生袁锐指导老师周湘红
摘要:
目的检测长岛凝血试剂的性能。
方法对长岛凝血试剂进行重复性、稳定性及与比对试剂相关性等方面的评价。
在比对试验中以德灵凝血试剂作为对比试剂,分别利用两种试剂对临床患者的血浆标本进行凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FBG)三个项目在CA-7000仪器上进行检测。
计算两种试剂所得结果的相关系数,回归方程及显著性水平。
结果长岛公司自主研发生产的PT试剂、APTT试剂及FIB试剂在重复性、稳定性方面都已经达到较高水平,但其在临床标本比对试验中与进口德灵试剂所测得结果相关性较差,具有显著性差异。
结论国产长岛凝血试剂的性能有待进一步提高。
关键词:
凝血酶原时间;活化部分凝血酶原时间;纤维蛋白原;一致性;显著性水平
凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)的测定是出凝血疾病筛查试验中最常用的检测项目,而目前临床检验室里所用试剂多为进口试剂,由于价格较高,科室成本增加。
因此,用国产试剂是否可以代替进口试剂是试验室面临的一个新课题[1]。
该试验中,用CA-7000全自动血栓与止血分析仪使用已经获得室内质控(IQC)和室间质评(EQA)合格的美国DadeBehring(简称德灵)公司生产凝血试剂与新进的上海长岛生物技术有限公司(简称长岛)自行开发生产的即用型液体PT、APTT、FIB试剂进行重复性、稳定性及相关性等方面性能的比较,通过对比德灵试剂,分析国产长岛试剂的可靠性,以便在为临床提供准确结果的前提下为科室节省开支。
1.材料与方法
1.1仪器SysmexCA-7000自动血液凝血分析仪(简称CA-7000)
1.2材料校准物、质控物均为DadeBehring公司生产。
DadeBehring试剂批号为:
PT:
54526938,APTT:
53742537,FIB:
53792631。
长岛试剂批号为:
PT:
0901053,APTT:
0904231,FIB:
0906022。
1.3标本收集贵州省人民医院住院病人标本,每天收集10份,连续收集5天,共50份标本,包括正常及异常患者,要求血量严格按照真空采血管中标注1.8ml,查无凝血,无溶血等情况[2]。
1.4样本处理以3000转/分离心20分钟,分离乏血小板血浆[3](PPT)备用。
1.5方法每天室内质控严格按照SysmexCA-7000自动血液凝血分析仪使用手册中步骤进行,在在控前提下对长岛试剂进行分析。
统计学分析计量资料用MicrosoftExcel处理,用均值,偏差,标准差,相关系数及回归方程表示。
1.5.1重复性测定用长岛试剂对同一质控物作PT、APTT及FIB三个项目的双份测定。
测定时将质控物分成10份,取两次测定结果均值并记录,分别计算结果的均值、标准差及变异系数(CV%)。
1.5.2稳定性测定分别取两种试剂各5瓶置于室温环境下,进行PT、APTT及FIB三个项目的双份测定,取均值并记录结果,连续测定5天,分别计算测定结果的均值、标准差及变异系数(CV%)。
1.5.3临床标本测定每天选取10份患者标本,每份样本用两种试剂分别作PT、APTT及FIB三个项目的双份测定记录其均值,连续5天共测定50份标本,以X表示长岛公司试剂测定结果,以Y表示DadeBehring试剂测定结果,进行一致性检验。
在德灵定标、IQC、EQA保证的前提下考察长岛的准确度。
具体方法在t检验基础上对两种试剂所测定结果拟合直线回归方程并将此直线回归方程与方程Y=X进行比较,即分别检验总体截距(Ta)与0之间的差别是否具有统计学意义,总体斜率(Tb)与1之间的差别是否具有统计学意义[4]。
2.结果
2.1重复性长岛公司PT、APTT及FIB凝血试剂检测重复性结果的生物学变异与分析质量要求[5]见表1。
表1长岛PT、APTT及FIB凝血试剂重复性检测结果
项目
长岛CV(%)
CV分析质量要求(%)
PT
0.4
2.0
APTT
1.4
1.4
FIB
1.1
5.4
2.2稳定性长岛、德灵凝血试剂PT、APTT及FIB凝血试剂稳定性检测结果见表2。
表2长岛公司PT、APTT及FIB凝血试剂稳定性检测结果
项目
长岛CV(%)
德灵CV(%)
CV分析质量要求(%)
PT
6.92
5.13
2.0
APTT
11.78
18.38
1.4
FIB
4.43
7.15
5.4
2.3一致性长岛公司PT、APTT及FIB凝血试剂检测所测得结果与德灵公司PT、APTT及FIB凝血试剂检测所测得结果一致性较差,三项所测得结果的回归方程分别是PT:
Y=0.7996X+2.0647,r2=0.9247;APTT:
Y=0.5469X+9.7828,r2=0.6946;FIB:
Y=0.7195X+0.7377,r2=0.7468,t检验结果见表3。
表3两种凝血试剂测得结果一致性分析
项目
PT
APTT
FIB
P
Ta
4.2266
4.7705
4.6364
<0.05
Tb
6.0881
8.6635
3.5880
<0.05
2.4在上述实验期间,用德灵的校准品校准,质控品做IQC在控,参加我省和卫生部EQA合格。
3.讨论
PT是检查外源凝血途径诸因子及相关抑制物的重要筛选试验,FIB是肝脏合成的一种血浆球蛋白,是体内重要的凝血因子,其主要生理功能是作为凝血因子Ⅰ参与体内凝血过程;在PT测定前的标本准备过程中,要求在室温下离心力不小于1500g至少离心15分钟[6]。
APTT是检测内源性凝血途径诸因子的缺陷和相关抑制物的筛选试验,也是当前用于凝血因子,肝素抗凝治疗以及狼疮抗凝血物检测的主要手段,因此为临床诊治提供可靠的依据尤显重要。
WHO于1981年提出PT标准化报告方式为INR,INR=(PTR)ISI其中ISI为国际敏感度指数,PTR为PT测定值(s)与PT标准对照值(s)的比值。
经上述公式换算成INR值后,能克服试剂之间敏感度差异的影响,使INR值报告方式具有可比性和可信度。
PT、APTT、FIB检测为临床诊治提供可靠的依据非常重要,为了探讨国产长岛试剂是否可以代替进口德灵试剂在CA-7000上使用。
我们从精密度(重复性实验),试剂稳定性及准确度三方面以德灵试剂为参考对长岛试剂进行评价。
在精密度评价试验中重复性最有意义[7],依照CLSI颁布的EP5-A2文件《定量测量方法的精密度性能评价—批准指南第二版》试验方案的基础上进行简化[8],据表1得长岛试剂重复性符合分析质量要求。
若实验结果PT用INR来表示,则长岛PT凝血试剂的重复性更鲜明的表现出来,其INR所得变异系数结果为0。
在稳定性方面,表2示长岛稳定性也较好,在开瓶后置于室温下可达到与进口试剂相同的水平,其中长岛FIB试剂在室温条件下5天内依然有效,显示出了即用型液体试剂的优越性。
在准确度方面,长岛在与德灵的临床标本比对试验中,据表3准确度的一致性检查反映的相关系数,最好的是PT,也只能达到0.9616。
经统计学处理,说明两种试剂所得结果的一致性较差(P<0.05),具有显著性差异的统计学意义。
经过上述实验,在同一时间、同一质量要求、同一样本、同一试验设备等条件一致下,以德灵为参考,长岛公司自主研发的即用型PT、APTT及FIB液体试剂在精密度及稳定性方面虽已达到国际水平,但在准确度上,在同一质量要求的前提下与德灵测试结果仍有显著性差异。
这是否是因为长岛需要的检测系统与德灵现有检测系统不同,或者由于其它因素差异如ISI换算不同,还需要进一步证实。
据此,本文认为,在德灵参考下,长岛要应用于CA-7000,需进一步提高和改进。
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人民卫生出版社,2008,46-48.
[5]杨有业,等.临床检验方法学评价[M],北京:
人民卫生出版社,2008,58-66.
[6]NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards.Collection,transport,andprocessingofbloodspecimensfortestingplasma-basedcoagulationassays;ApprovedGuideline-FourthEdition.NCCLSdocumentH21-A4.NCCLS,940WestValleyRoad,Suite1400,Wayne,Pennsylvania190878-1898USA,2003.
[7]杨有业,等.临床检验方法学评价[M],北京:
人民卫生出版社,2008,98-99.
[8]杨有业,等.临床检验方法学评价[M],北京:
人民卫生出版社,2008,110-116.
ComparisionoftwokindsofthrombinreagentsonCA-70000
RuiYuan,DepartmentOfMedicalLaboratoryScience,GuiYangMedicalUniversity;.XianghongZhou,DepartmentOfMedicalLaboratoryScience,People’sHospitalOfGuiZhouProvence.Postcode:
550002
[ABSTRACT]:
ObjectiveToevaluatewhetherthethrombinreagentmadebychangdaocanbeasubstituteoftheimportedones.MethodsToevaluatetherepeatability,thestabilityandtherelativityofthereagentsofChangDaowiththecomparisiononesfollowingSOPofthetestsandguidesofthereagents.UsingtheDadeBehringthrombinreagentsasthecomparisionreagentsinthistest,todeterminatetheprothrombmtime(PT),theactivatedpartialthrombopladtintime(APTT)andthefibrmogen(FIB)oftheplasmaofthepatientsonautomatedcoagulationanalyzer-7000.Thecoefficientcorrelation,regressionequationandsignificancelevelwerecalculatedaccordingtotheresultsobtainedfromthesetwokindsofthrombrinreagents.ResultsThethrombinreagentsdevelopedbychangdaocompanyhavethesamerepeatabilityandstabilitywiththeimportedthrombinreagentsofDadeBehring,buttheconsistencyofchangdaoreagentswasnotasgoodasexpectedwithDadeBehring's,thesetwokindsofreagentshaveadistinctdifferenceofsignificant.ConclusionThesedatasuggestthatchangdaothrombinreagentscannotbeasubstituteofDadeBehringthrombinreagentsfordeterminationofPT,APTTandFIBonCA-7000.
[KEYWORDS]:
Prothrombmtime;Activatedpartialthrombopladtintime;Fibrmogen;Consistency;significancelevel
致谢:
感谢在座的各位评委老师
再此感谢我的指导老师周湘红老师
感谢在我完成论文期间给过我帮助的所有老师
略缩词表:
PT
Prothrombmtime
凝血酶原时间
APTT
Activatedpartialthrombopladtintime
活化部分凝血活酶时间
FIB
Fibrmogen
纤维蛋白原
论文原创性声明:
本人郑重声明:
此处所提交的论文《两种凝血试剂在CA-7000上的结果分析》,是本人在导师指导下在贵州省人民医院实习期间进行研究工作所取得的成果。
据本人所知,论文中除已注明部分外不包含他人已发表或撰写过的研究成果。
对本文的研究工作做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式注明。
本声明的法律结果将完全由本人承担。
作者签字
2010年3月20日
附:
综述
国产凝血试剂性能
作者袁锐
前言
凝血三项APTTPTFIB检测是诊断血栓与止血相关疾病中最有价值的筛检项目,可反映内源凝血途径,外源凝血途径及共同途径凝血因子缺陷,以作为手术科室,妇产科,血液科必检项目之一。
全自动血栓与止血分析仪结果准确、可靠、重复性好,可适用于成批样本或单个样,目前发达国家应用较为普遍,近年国内发展也较为迅速[1]。
但在凝血项目的检验中,除标本的采集、运送的时间、处理是否规范影响检验结果的准确性和可靠性外,凝血试剂对实验的敏感性也直接影响检验结果的准确性和可靠性,选用灵敏度高,稳定性好,价格合理的试剂是临床实验室首要解决的实际问题[2]。
但由于进口配套试剂价格昂贵,所以我们致力于研究国产凝血试剂的性能,进一步提高国产血凝类试剂的质量水平,提供更准确的诊断结果,与国际临床检测标准接轨。
现状
血凝试验是通过手工或血凝仪将两种溶液(血浆和试剂)混合并记录凝血时间的过程。
干粉试剂(通常为冻干品)必须按厂家要求添加定量复溶液(厂家提供)或高纯水(用户自备),使其“复溶”,即恢复到冻干前的溶液状态。
复溶过程存在一定风险:
①取液器不准,使有效成分的浓度与冻干前不同,从而导致凝血时间延长(浓度降低)或缩短(浓度提高);②复溶液或高纯水被污染导致酸碱度发生变化或微生物生长,抑制或破坏有效成分,使凝血时间延长;③不同冻干品复溶时间不同,有的一分钟即可完成,有的则需要数十分钟才能完全复溶。
复溶不完全会影响有效成分发挥作用,延长凝血时间;④如果冻干品附着在瓶塞上,复溶时必须把试剂瓶颠倒过来,使瓶塞上的有效成分进入溶液中,否则也会导致凝血时间延长;⑤操作不慎,如复溶时剧烈震动试剂瓶,产生大量气泡,蛋白质或酶就会在气泡表面变性,也会影响凝血时间。
所以,复溶对于血凝试剂而言应该说是一种缺点[3]。
液体试剂中的所有成分都是均一的。
通常情况下,任何局部成分都与整体成分完全一致,分装时不会使成分或浓度发生变化,所以瓶间只有装量误差,试剂有效成分的浓度完全相同。
国产长岛公司生产的即用型液体血凝试剂具有以上优点,但其性能有待进一步验证。
测定APTT可以了解内源性凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ,Ⅻ的活性,其结果也受Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ因子的影响,在肝损害时95.4%患者APTT延长,许多出血性疾病患者APTT延长,APTT也常用于应用肝素的监测,是临床上常用的检验项目[4]-[8]。
PT是反映外源性凝血系统,其原理是在待测血浆中加入过量的组织凝血活酶和Ca,使凝血酶原转变为凝血酶,后又使纤维蛋白原转变为纤维蛋白,PT试验不仅反映凝血酶原水平,也反映因子Ⅴ,Ⅲ和纤维蛋白原在血浆的水平。
PT测定影响因素很多,其中最关键的是凝血酶原试剂,由于所用凝血酶原试剂的敏感度不同,即使在相同条件下对同一标本测得的结果也不同,而我国医生常用的凝血酶原百分活动度则因为标准血浆不统一而相差更大,甚至达到难以比较的程度[4]-[7]。
因此WHO于1981年提出PT标准化报告方式为INR,INR=(PTR)ISI其中ISI为国际敏感度指数,PTR为PT测定值(s)与PT标准对照值(s)的比值。
经上述公式换算成INR值后,能克服试剂之间敏感度差异的影响,使INR值报告方式具有可比性和可信度。
理论上,ISI值越接近1.0,表明试剂越敏感。
试剂是影响比对试验的关键,也是质量保证的关键[9]。
当前在国际市场上有美国库尔特公司(ACL),德国DadeBerhing公司,美国PacificHemostasis公司,Biopool公司和法国STAGO等公司生产血凝四项试剂盒。
在国内则有四川迈克公司,西安交大开元公司,上海太阳公司,上海长岛生物技术有限公司生产销售。
而国产试剂由于质量问题市场占有率非常低。
对于定性、定量测定产品,其质量研究的通用性项目一般包括测定精密度、测定范围、分析灵敏度、分析特异性、测定准确度、与同类产品或其他方法的对比、样品保存和处理条件等。
对于定量测定产品,如国产凝血APTT、PT、FIB试剂,可以采用对国际或国家标准品的测定、加入回收试验等方法,评价该产品的测定准确度与同类产品或其他方法的对比试验在质量研究阶段进行的对比试验,所以对比试验方法的科学性、规范性是试验结果科学、可靠的基础和保证,更是该产品临床研究成功与否的重要前提。
对于精密度的测定最少应使用3个浓度的样品进行精密度的检测,并选择医学上具有决定意义的样本浓度。
为了评价全部试验步骤的精密度,应对样本预处理方法的影响进行评价,即应对每一重复试验分别进行样本的预处理。
准确度的测定在对比试验中应更加注重试验的计划性,强调对拟采用的对比试剂(对比方法)及被测样本的充分了解;强调样本分配的合理性,因为对不同组样本的对比试验结果可能得出不同的试验结论。
以定量测定产品为例,应该了解对比试剂的方法学,临床使用目的和范围,主要质量指标,如检测灵敏度、定量测定范围、测定精密度、标准品(校准品)的溯源情况、推荐的参考值(参考范围)等。
而对于被测样本,应尽可能包括在常规工作中可能遇到的各种样本,如疾病、相关疾病、溶血、脂血、黄疸等,且被测样本浓度均匀分布于测定范围内。
应充分了解被测样本患者的详细临床资料,以便对试验结果进行综合分析[10]。
有文献表明国产试剂中上海太阳公司生产的凝血试剂在准确性方面APTT试剂外,PT,FIB,TT试剂所测得结果均再可接受范围之内,和进口德灵试剂有较好的相关性[1]。
同时有文献证明在试剂稳定性方面,由于进口试剂包装较大,复溶后稳定时间只有24H,不宜长期存放,易造成浪费,国产试剂价格低廉,市场上大小包装均有,使用较方便国产试剂至少具有与进口试剂一样的稳定性[11]-[16]。
但是总结所查阅文献,大部分都是针对一种试剂如PT或APTT等,对其进行某一方面如准确性,稳定性的评价,却没有对一个公司所生产的凝血四项试剂进行全面的测试评价。
为进一步全面了解国产长岛凝血试剂在临床检测APTT、PT、FIB的效果,选用该试剂与DADEBEHRING凝血试剂在同一条件下进行比较。
前景
探讨国产凝血试剂在全自动凝血仪上应用的可行性,统一行业标准和国家标准,使血凝检测总体水平不断提高。
由于国产凝血试剂具有价格低廉、使用方便的优势,所以只要在质量保证的前提下,可显著地降低医院的成本与病人的费用,可在临床中推广应用。
参考文献:
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[16]黄永富,等.方法过程
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