动物生理学实验.docx
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动物生理学实验
实验一生理学常用器械的识别与使用
作者:
陈锐 来源:
本站 时间:
2008-3-14
实验一 动物生理学常用器械识别及使用
目的:
识别常用器械,并掌握常用器械的正确使用方法。
实验内容:
1.动物生理学实验概述
2.动物生理学实验常用仪器、设备
3.动物生理实验常用手术器械
作业:
1.手术刀的执刀方法有哪几种?
2.绘出持钳和松钳法的示意图?
第1章 动物生理学实验概述
《生理学》是一门实验性学科,《生理学》的发展和它的每一项新理论的建立都借助于大量的动物实验,并获得了大量实验的支持。
因此学习《动物生理学》必须亲自做一做实验,才能更好地理解和掌握它的基本理论。
1.1动物生理学实验课的教学内容和目的
《动物生理学》是高等农业院校动物生产类(含畜牧、水产、名特经济动物养殖)、动物医学、生物和生物技术专业本科必修的专业基础课,它将在理论上和实验技能上为后续课程的学习打下必要的基础。
为了适应现代教育、教学思想,融传授知识和能力培养为一体,《动物生理学实验》课除了讲授经典的生理学实验外,还特别注重对学生的获取知识的能力;观察、分析问题的能力;科学研究的实事求是作风、严肃认真的工作态度和团结协作精神的训练和培养。
因此《动物生理学实验》课拟使学生通过对经典生理学实验的学习,掌握《动物生理学实验》的仪器、设备的基本操作;熟悉和掌握《动物生理学实验》的基本技术;掌握观察、纪录实验结果和收集、整理、实验数据的方法。
通过多个实验项目同时观察或综合性实验,进一步强化、规范实验操作、掌握实验方法;重点培养学生分析、综合和逻辑推理的能力。
通过探索(研究)性实验设计的训练,使学生掌握实验设计的基本原理、原则;掌握撰写科学研究论文的基本方法。
1.2动物生理学实验及其方法
动物生理学实验是利用一定的仪器设备和方法,人为地控制某些因素再现动物机体的某些生命活动过程,或将一些感官难以观察到的内在的、迅速而微小变化着的生命活动展现、记录下来,便于人们观察、分析和研究。
因为《动物生理学》是研究动物机体生命活动(机能)及其规律的一门科学,因此动物生理学实验的对象一般都是机能正常的“活体”,而且这种“活体”的特征在动物机体的整体、器官、及细胞等不同水平上有不同的表现形式。
动物生理学实验的方法一般根据动物的组织器官是在整体条件下进行实验,还是将其解剖取下,置于人工环境条件下进行实验,可分为在体实验方法和离体实验方法。
1.3动物生理学实验课的要求
1.3.1 实验前
(1)仔细阅读《动物生理学实验》中的有关内容,了解本次实验的目的、要求,充分理解本次实验的原理、熟悉实验项目、操作步骤和程序,了解实验的注意事项。
(2)结合实验阅读相关理论知识,必要时还需要查阅一定的资料,做到充分理解实验原理与方法,力求提高实验课的效果。
(3)预测本次实验结果,对预测的结果尽可能地作出合理的解释。
(4)估计本次实验可能发生的问题,并思考解决问题的应急措施。
1.3.2 实验时
(1) 遵守实验室规则。
(2) 爱惜实验动物和标本,使其保持良好的兴奋性;节约药品、水、电,确保实验完成。
(3) 按程序正确操作仪器和手术器械,按实验步骤进行实验。
(4) 认真观察和纪录实验结果,并加上必要的标记、文字说明;实验过程中还要思考出现 了什么样的结果?
为什么会有这些结果?
这些结果有何意义?
若出现非预期结果,还应分析其原因,尽可能地及时解决。
(5) 实验中要有耐心,必须等前一项实验基本恢复正常后,才能进行下一项实验,注意观察实验的全过程。
1.3.3 实验后
(1)实验完成后要及时关闭仪器和设备的电源;按规定整理实验器具和实验动物。
(2)及时整理实验纪录,分析实验结果,作出实验结论。
(3)认真撰写实验报告,按时交给教师批阅。
有关实验过程的观察、实验结果的记录、处理及表示方法还可下面有关内容:
① 实验过程的观察
实验观察应注意对实验的整个过程的观察,从引进欲检验因素之前一直观察到引进欲检验因素之后产生变化的终结,或从撤消欲检验因素后直到其功能恢复到正常为止的全过程的观察。
注意实验中的变化过程及引入欲检验因素的时间、出现变化的时间和恢复到正常水平的时间进行准确的记录。
要等前一项实验结果恢复正常后再进行下一项实验。
观察要特别注意有无出现非预期结果或“反常”现象?
在排除了错误的不合理的结果之后,应对其进行分析,进一步实验是否有新的发现和新理论的得出。
② 实验结果的记录
结果的纪录也应做到系统、客观和准确。
要重视原始记录,预先拟定好原始记录的方式和内容。
记录的方式可是文字、数字、表格、图形、照片、录像及影片等。
严禁擅自撕页或涂改,切不能用整理后的记录替代原始记录,要保持记录的原始性和真实性。
③ 实验结果的处理
实验结果必须进行整理和分析,才能从中发现问题,揭示其变化的规律性,及其影响因素。
Ⅰ原始资料的类型
实验中得到的结果数据称原始资料,分为两大类:
计量资料,计数资料。
计量资料以数值大小来表示某种变化的程度,如血压值、呼吸频率、尿量、血流量等,这类资料可从测量仪器中读出,也可通过测量所描记的曲线得到。
计数资料是清点数目所得到的结果,如动物存活或死亡的数目、有效或无效等。
Ⅱ对原始资料的分析和处理
在取得一定数量标本的原始资料后,即可进行生物统计学处理,得到可用来对实验结果某些规律性进行评价的数值。
有些数值如率、比、平均值、标准差、标准误、相关系数等,被称为统计指标。
经统计学处理的结果数据可制成一定的统计表或统计图,以便研讨所获得的各种变化规律。
其次,还可作相应的统计学显著性检验或计算某些特征参数等。
在分析和判断实验结果时,决不能有研究者的偏见,或者在计算均数或率时任意将资料取舍。
必须实事求是,不能人为地强求实验结果符合自己的假说,而应该根据实验结果去修正假说,使假说上升为理论。
④ 研究(实验)的结论
科学研究经过实验设计、实验与观察、数据处理,对实验结果进行由表及里的分析,就可做出研究总结、得出结论,并写出论文。
这个结论要回答原先建立的假说是否正确,并对实验中发现的现象用所搜集到的资料做出理论解释。
研究结论是从实验观察结果概括或归纳出来的判断。
结论内容要严谨、精炼、准确。
⑤动物生理学实验报告的撰写
实验报告是对实验的全面总结;是理论联系实际和应用知识的重要环节,是对学生撰写科学论文能力的初步培养,可为今后的科学研究打下良好的基础。
实验报告要文字简练、条理清楚、观点明确、字迹清楚,正确使用标点符号。
实验报告有一定的格式:
动物生理学实验报告应包括:
姓名 班级 日期
实验序号及实验题目
实验目的
实验原理
实验动物
实验方法和步骤
实验结果
分析与讨论
第2章 动物生理学实验常用仪器、设备
随着科学技术的发展,先进的科学仪器设备在动物生理学研究中广泛地利用,才使我们对生命活动的有了更为本质的认识。
因此学习和掌握动物生理常用仪器、设备的使用方法,对做好动物生理实验也十分重要。
进行动物生理学实验所需的仪器总体上可分为四大系统(图2-1)。
(1) 刺激系统:
是对欲研究的对象施加刺激,引起其生理功能变化(即产生兴奋)的一套仪器设备。
但生理实验中应用最多的还是电刺激,因为电刺激较容易控制、对组织没有或损伤很小、引导方便、可重复使用。
电刺激系统包括电子刺激器、刺激隔离器和各种电极。
(2) 引导、换能系统:
生理功能变化的信号只有用一定的仪器设备显示、记录下来才有研究的价值,因此需要有一定的装置能将其引导到显示、记录仪器上。
若生理信号是电信号,引导系统可能是引导电极,包括记录单细胞活动的玻璃微电极和记录一群细胞电活动的金属电极;若生理现象为其它能量形式时,如机械收缩、压力、振动、温度和某种化学成分变化等,都需要将原始生理信号转换为电的信号,加以引导,这就是各种形式的换能器。
(3) 信号调节放大系统:
有的生理信号较为微弱,尚需进行适当的放大。
信号调节系统是是一种放大器或放大器的组合,对信号基线的位置和输出信号幅度的高低(增益,信号的Y轴)进行调节。
最原始的经典仪器是各式各样的杠杆、玛利式气鼓、各种检压计等。
现代仪器设备包括示波器、记录仪中的放大器部分和专用的前置放大器、微电极放大器等。
(4) 显示与记录系统:
有用纸带记录、显示屏记录或显示信号的仪器。
通过调节相关的旋钮调节走纸速度或扫描速度(信号的X轴)将信号扩展开来。
记纹鼓是一种较为原始的经典记录仪。
由于计算机技术的发展,计算机生物信号采集处理系统已在生理学实验中广泛应用,有替代刺激器、放大器、示波器和记录仪的趋势。
2.1刺激系统
2.1.1 电子刺激器
电子刺激器是能产生一定波形的电脉冲仪(器)。
2.1.1.1 刺激器方式:
单刺激:
可为默认选择(计算机)或为手控刺激,即按1次手动开关,就输出一次刺激脉冲。
双刺激、连续刺激:
当选择双刺激或连续刺激时,刺激器会按照实验者设定的刺激参数连续输出刺激脉冲,何时开始,何时终止可以人工控制。
串刺激:
在每一个刺激周期内包含2个或2个以上的一串刺激脉冲。
2.1.1.2 刺激器参数:
刺激强度:
以矩形方波的波幅(方波的高度)表示。
可用电压或电流强度表示,电流强度一般从几μA~几十mA,电压可在200V以内。
实验过程中,过强或过弱的刺激都 应避免,因为过弱的刺激不能引起组织功能变化;过强的刺激可引起组织内电解和热效应而损伤和破坏组织。
在双刺激中,两个刺激脉冲的强度可以相等,也可以不等。
刺激(持续)时间:
以矩形方波的波宽表示。
一般刺激持续时间从几十μs~数s,并采用正负双向刺激方波。
刺激频率:
相对于连续刺激而言,表示单位时间内所含主周期的个数,单位为Hz,如5Hz、20Hz,也可用主周期的时间来表示,如0.2s,0.05s等。
在使用连续刺激时,刺激频率一般少于1000次/s。
一般组织器官的功能实验的刺激频率在60~100次/s为宜。
串长:
表示以重复的频率不断地输出数个(一连串)刺激脉冲的(持续)时间。
在串长内可调节刺激脉冲的个数和间隔(波间隔t)。
同步输出:
有时为了保证实验的精确性,要求整个实验系统保持同步工作,如要求在刺激器发出刺激脉冲稍前时间内,能发出一个尖脉冲(同步脉冲)去触发示波器或其它仪器使它们能同步工作。
延迟:
表示从同步脉冲到刺激脉冲出现的时间差(T1)。
调节延迟,可使刺激脉冲或由刺激脉冲引起的生理反应能在荧光屏上的适当位置展现,以便观察和记录。
串间隔:
在连续的串刺激中,一串刺激脉冲连续出现时的时间间隔(T2)。
它可以等于延迟(T1),也可以不等。
在计算机生物信号采集处理系统中,上述参数可出现在
(1)模式,包括正电压刺激、负电压刺激、正电流刺激及负电流刺激;
(2)方式;(3)延时;(4)波宽;(5)波间隔;(6)频 率;(7)强度1及强度2(对双刺激时);(8)主周期;(9)程控增量,表示程控刺激参数的增量或减量。
2.1.2 电极
电极依其使用目的不同,可分为普通电极、保护电极、乏极化电极、微电极等多种。
(1)普通电极 通常是在一绝缘管的前端安装二根电阻很小的金属丝(常用银丝或不锈钢丝、钨丝),其露出绝缘管部分的长度仅5mm左右,金属丝各连有一条导线,可与刺激器的输出端(作刺激电极用时)或放大器的输入端(作引导、记录电极用时)相接。
使用此种电极时,应注意电极不要碰到周围的组织(图2.1-3)。
(2)保护电极 其结构与普通电极相似,特点是前端的银丝嵌在电木保护套中,使用此种电极刺激在体神经干时,可保护周围组织不受刺激(图2.1-3)。
(3)锌铜弓(叉) 锌铜弓实际是一个带有简单锌铜电化学电池的双极刺激电极,常用来检查坐骨神经腓肠肌标本的机能状况。
是平行排列的一根粗锌丝(片)和一根粗铜丝(片),二者的顶端焊接在一起,固定于电木管内,当锌铜弓与湿润的活体组织接触时,由于Zn较Cu活泼,易失去电子形成正极。
使细胞膜超极化;Cu得电子成为负极,使细胞膜去极化而兴奋。
电流按Zn→活体组织→Cu的方向流动。
注意:
用锌铜弓检查活体标本时,组织表面必需湿润(图2.1-3)。
(4)神经一肌肉标本盒
结构:
在进行蟾蜍坐骨神经干动作电位、兴奋不应期、以及传导速度的测定实验中,为了保持神经干的良好机能状态。
必需使用神经标本盒(图2.1-4)。
标本盒通常用有机玻璃制成,盒内有两根导轨,导轨上有5~7个装有银丝电极的有机玻璃滑块,电极滑块可以在导轨上随意移动,用以调节电极间的距离。
每个电极滑块通过导线与标本盒侧壁的一个接线柱相联,其中一对作刺激电极,l~2对作记录电极,记录电极与刺激电极间的电极接地。
有的标本盒盒盖上装有小尺,用以测量电极间的距离。
有的实验室设计的标本盒中还可安装肌肉标本,并把张力换能器装在标本盒内,可同时记录肌肉动作电位和肌肉收缩曲线,使用十分方便。
使用及注意事项
①滑块电极的银丝必需保持清洁,如有污垢可用浸有任氏液的棉球轻轻擦拭,仍不能清除时,可用细砂纸轻轻擦净。
②移动滑块电极时动作要轻,以免将电极与接线柱间的导线弄断。
③实验时标本应经常保持湿润,标本安好后应将上盖盖好。
标本两端的扎线要悬空。
(6)微电极 有金属微电极和玻璃微电极。
①金属微电极:
常用银丝、白金丝、不锈钢、碳化钨丝在酸性溶液中电解腐蚀而成,尖端以外部分用漆或玻璃绝缘。
有双极或单极引导电极,多用于细胞外记录和皮层诱发电位等。
②玻璃微电极:
有单、双、多管,用硬质的毛细玻璃管拉制而成。
用于细胞内记录时,其尖端需小于0.5μm;用于细胞外记录时,其尖端可为1~5μm。
微电极内常充灌3mol/LKCl溶液,从电极的粗端插入银-氯化银电极丝.
2.2引导、换能系统
2.2.1机械引导(传动)装置
(1) 肌动描记杠杆、肌动器
肌动描记杠杆是用记纹鼓记录肌肉收缩活动最常用的传动装置。
通过改变杠杆动力臂和阻力臂的比例,即可调节描记曲线的大小(图2.2-1)。
肌动器是固定并刺激蛙类神经肌肉标本的装置(图2.2-1),有平板式和槽式。
(2) 描记气鼓(玛利气鼓)是随气体压力变化而起伏运动的传动装置(图2.2-2)。
通常用来描记呼吸运动及器官容积的变化。
它是一个带有中空侧管的金属圆皿,其上覆盖一层薄橡胶膜,在膜中央粘上一描笔支架。
当侧管中的气体压力改变时,可使像胶膜起落,从而带动膜上的描笔描记出相应曲线。
(3) 检压计 是检测压力变化的装置,为一“U”形玻璃管,内装水银或水(图2.2-3)。
在检压计“U”形管一端的液面上加上装有描笔的浮标,当另一端所连接的液体系统内的压力发生改变时,浮标随水银柱升降而上下移动,即可在记纹鼓上描记出相应曲线。
水检压计所用的“U”形管一般内径较粗,且内盛有颜色水,一般用于测量低压变化,如静脉压或胸内负压。
2.2.2换能器
换能器也叫传感器,是一种能将一种能量形式转变为另一种形式的器件装置。
生理学实验常用的换能器是将一些非电信号(如机械、光、温度、化学等的变化)转变为电信号,然后输入不同的仪器进行测量、显示、记录,以便对其所代表的生理变化作深入的分析。
换能器的种类很多,这里仅介绍几种。
2.2.2.1张力(机械一电)换能器
(1) 原理及结构:
张力换能器是利用某些导体或半导体材料在外力作用下发生变形时,其电阻会发生改变的“应变效应”原理,将这些材料做成薄的应变片,配对(R1R3及R2R4)分别贴于金属弹性悬梁臂的两侧,两组应变片中间联一可调电位器R5,并与一5V直流电源相接,构成惠斯登桥式电路(图2.2-4)。
当外力(肌肉收缩)作用于悬梁臂的游离端并使其发生轻度弯曲时,则一组应变片的受拉变长,电阻增加;另一组受压缩短,电阻减小。
由于电桥臂电阻值的改变,使电桥失去了平衡产生电位差,即有微弱的电流输出。
将此电流输入示波器、记录仪或计算机生物信号采集处理系统经放大,就能驱动描笔绘出张力变化(肌肉收缩)的全过程。
机械一电换能器的灵敏度和量程决定于应变元件的厚度,悬梁臂越薄越灵敏,但量程的范围也越小。
因此,这种换能器的规格应根据所作实验来决定,蛙腓肠肌实验的量程应在100g以上,肠平滑肌实验应在25g,小动物心肌乳头肌实验应在1g以下。
(2) 使用方法:
根据测量方向,将换能器固定在合适的支架上,既要保证受力方向和力敏感悬梁(弹簧片)的平面垂直,又要保证换能器的受力方向正确。
换能器初次与记录仪(或生物信号采集处理系统)配合使用时,需要定标。
将换能器水平固定在合适的支架上。
换能器和主机接通电源,预热10min,按等重量(满量程的1/5)加砝码到满量程,此时在记录仪上得到相应的等距离的标定线(注意在正式标定前,先用满量程砝碼预压两次。
换能器的辅助调零电位器在传感器外壳边面沉孔中)。
(3)使用注意事项;
①正式记录前,换能器应预热10~30min,以确保精度。
②换能器调零时,不得用力太大。
③实验时不能用猛力牵拉或用力扳弄换能器的悬梁臂,以免损坏换能器。
测力时过负荷量不得超过满量的20%。
④防止生理盐水等溶液渗入换能器。
2.2.2.2压力换能器
(1) 原理和结构:
压力换能器是将各种压力变化(如动、静脉血压,心室内压等)转换为电信号。
然后将这些电信号输入前级放大器或示波器,原理同前,电信号输出的大小与外加压力大小成线性关系。
压力换能器的结构如图2.2-5,头端是一个半球形的结构,内充抗凝剂稀释液,其内面后部为薄片状的应变元件,组成桥式电路。
其前端有两个侧管,一个用于排出里面的气体,另一个与血管套管相连。
(2) 使用及注意事项:
① 注意换能器的工作电压与供电电压是否一致和压力测量范围。
对超出检测,范围的待测压力不能进行测量。
② 进行液体耦合压力测量时,先将换能器透明球盖内充满用生理盐水稀释的抗凝剂稀释液,注意将透明球盖及测压导管内的气泡排净,以免引起压力波变形失真。
注液时应首先检查导管是否通畅,避免阻塞形成死腔,引起高压而损坏换能器。
③压力换能器在使用时应固定在支架上,尽可能保证液压导管的开口处与换能器的感压面在同一水平面上,或有一个固定的距离,不得随意改变其位置,以免引起静水柱误差。
④将换能器与主机连接好,启动并预热15~30min,将系统调到零位即可进行测量。
换能器结构中有调零电位器,可以单独调节零点位置。
也可与记录仪或计算机配合调整。
测量中如需要进行零位校准,可采用两个医用三通阀分别接于换能器两个接嘴上,其中一个用来沟通大气压即可。
⑤为了使测量结果准确,使用前需要标定。
⑥严禁用注射器从侧管向闭合测压管道内推注液体;避免碰撞,要轻拿轻放,以免断丝;用后洗净并放在干燥无菌、无毒、无腐蚀的容器内保存。
2.3 信号调节放大系统-生物电放大器
从生物体各器官引导出的生物电信号特性差异很大,一般在几十μV~几十mV,且记录环境中常常掺杂有同级或更大量级的干扰信号,要得到满意的结果必须借助生物电放大器从中提取微弱的的生物信号,再输入示波器或记录仪才能显示、记录,因此常用的生物电放大器必须是①差分式平衡放大,有较高的抗市电干扰能力,信号/噪声比值大;②最大放大倍数不小于1000倍;③频率响应从0~100Hz;④低噪声,整机噪音不大于15μV。
⑤仪器本身不受静电及磁场的干扰。
2.4显示、记录系统
生理学实验中,各种生理信号都需要进行记录才能进行观察、测量和分析。
经典的记录装置是记纹鼓。
现代生理学实验中常用的记录仪器有示波器与示波照相机、生理记录仪。
2.4.1 二道生理记录仪
生理记录仪具有灵敏度高、适用范围广等优点。
配接合适的换能器或引导电极,可以记录血压、心电、脑电;心音;呼吸;胃肠平滑肌、心肌、骨骼肌收缩等多种生理活动的变化,并以曲线形式直接描记在记录纸上,供分析用。
由于生理记录仪描记系统的频率响应不十分理想,一般小于100Hz.故在记录快速变化的生物电信号(如神经干动作电位)方面还要受到限制。
目前常用的记录仪有LMS—2A或LMS—2B型二导生理记录仪,MJ—3三道生理记录仪,SJ—42多道生理记录仪等。
现以LMS—2B为例,介绍其面板控制和使用方法。
2.4.1.1LMS—2B生理二道记录仪的基本结构
仪器由记录部分、FG直流(后级)放大器、FD多功能(前级)放大器和FY-2血压(前级)放大器组成(图2.4-1,2.4-2)。
2.4.1.2 仪器的使用
(1) 仪器使用前的准备
①将电源开关、两个后级FG直流放大器的通/断开关和前级放大器FD—2、FY—2的测量开关及输出的通/断开关都置于“关”或“断”。
按下控制纸速的“停”键;将前级放大器的灵敏度均置于最低档。
②接上准备使用的换能器和输入线,将输入线短路。
③将仪器可靠地接地。
④安装记录纸,铺平压在压纸轮下。
[注意] 安装记录纸的过程中切勿碰到记录笔尖,以免影响记录性能。
(2) 仪器调试
①接通电源,指示灯亮,放下抬笔架。
选择较慢的走纸速度,
②调节描笔的位置:
插入FG放大器输入线并使输入短路。
打开FG后级放大器开关(于通),调节FG放大器的调零旋钮,使描笔居中。
按下侧面板的0.5V电压校对按键,调节FG灵敏度暗调旋钮,使笔尖偏转10mm。
FY—2血压放大器的调试(图2.4-3):
拔出FG放大器的输入线,FY—2血压放大器的输出开关置于”通”。
调节FY—2血压放大器的直流平衡暗调旋钮,并改变灵敏度,使记录笔保持居中(不要调节FG放大器的调零旋钮)。
调节压力换能器的平衡:
将FY—2血压放大器的测量开关置“通”,当压力换能器的负荷为零(压力腔与大气相通)时,调节压力换能器的平衡暗调旋钮,改变FY-2血压放大器的灵敏度,使记录笔保持居中(不要调节FG放大器的调零旋钮和FY—2血压放大器的直流平衡暗调旋钮)。
校对放大器增益:
将FY—2血压放大器灵敏度调至12kPa/cm(或1.2kPa/cm),按下12kPa校对按键(或1.2kPa),描笔应偏转1cm,否则可能是放大器的放大倍数不准或标准信号不准。
如要校准,应由专业修理人员完成。
④FD—2多功能放大器的调试
确定FD—2多功能放大器的输入线短路,输出开关置于”通”;拔出FG放大器的输入线。
调节FD—2多功能放大器的直流平衡暗调旋钮,并改变灵敏度,使记录笔保持居中(不要调节FG放大器的调零旋钮)。
调节张力换能器的平衡:
FD—2多功能放大器的测量开关置”通”,张力换能器的负荷为零,调节张力换能器的平衡暗调旋钮,改变FD—2多功能放大器的灵敏度,使记录笔保持
居中(不要调节FG放大器的调零旋钮和FD—2多功能放大器的直流平衡暗调旋钮)。
平衡后可用砝码定标。
校对放
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