测序实验室操作手册.docx
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测序实验室操作手册.docx
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测序实验室操作手册
测序实验室操作手册
测序实验室操作手册
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A0
第一次发行
2014-03-22
测序实验室标准操作手册
一、健康中心实验室介绍..............................................................................................………...........2
二、实验室管理...............................................................................................................................2
2.1实验室行为管理.................................................................................................................3
2.2实验室出入管理.................................................................................................................4
2.3实验室清洁卫生管理.........................................................................................................6
2.4仪器试剂使用管理...........................................................................................................10
2.5实验室安全管理...............................................................................................................11
2.6实验室紧急事故处理.......................................................................................................14
2.7实验室物料管理...............................................................................................................15三、实验室保密制度管理.............................................................................................................17四、测序实验室仪器操作规程.....................................................................................................17超净台操作规程.....................................................................................................................18微量台式离心机使用规程.....................................................................................................20移液枪使用维护规程.............................................................................................................21冰箱使用维护规程.................................................................................................................26
PCR仪使用规程....................................................................................................................29
五、高通量测序标准操作规程.....................................................................................................32
5.1模板制备标准操作规程...................................................................................................32
5.2上机测序标准操作规程...................................................................................................41六、测序人员考核标准.................................................................................................................47七、实验室管理考核标准.............................................................................................................48八、测序实验室工作时间表.........................................................................................................50九、附录.........................................................................................................................................50
一、健康中心实验室介绍
健康中心实验室主要分为6个部分:
血浆分离室、核酸提取室、文库构建室、测序室、QC检测区、仓库。
1.样品处理室:
用于血液样品的接收和分离,内部配备台式冷冻离心机、台式微量离心机、超净工作台、防护设施等。
2.核酸提取室:
用于样品中核酸的提取和纯化,内部配备
、超净工作台、垂直混匀仪等。
3.文库构建室:
用于测序文库的制备与纯化,内部配备台式微量离心机、超净工作台、台式小离心机、冰箱等。
4.测序室:
用于高通量测序过程中样品的制备,芯片的处理以及上机操作等,内部配备台式微量离心机、超净工作台、高通量测序仪、涡旋混匀仪、冰箱等
5.QC检测区:
用于核酸样品、文库样品的浓度及质量检测,配备了PCR仪、台式小离心机、Qubit荧光计、2100生物分析仪。
6.仓库:
用于所有物料及耗材的存储。
二、实验室管理
1.按要求做好防护工作,进不同实验室穿不同的实验服,戴好胸卡。
2.各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等不可混用。
3.严格按技术员等级使用相应仪器。
4.实验室出现任何意外状况,见者都需上报。
5.非本实验室工作人员,未经许可不得入内;外来人员如参观、维修人员要通过经理同意并在专人陪同下完成。
6.做好实验的各项清洁整理工作。
2.1实验室行为管理
2.1.1严格遵守实验室的上下班作息表:
8:
30上班,17:
30下班,11:
40-12:
40
午休时间。
上下班按规定打卡。
2.1.2早上8:
40之前做好实验室的清洁杀菌工作,9:
10之前一定要进入实验室工作。
2.1.3上班时间要坚守岗位,尽职尽责,不准擅离职守,外出办私事。
2.1.4不戴操作过的手套做其它与实验无关的事如挠痒、开门把手等可能污染手套的动作;
2.1.5最后一个离开实验室要自觉检查实验的水、电、空调、仪器是否按要求关闭。
2.1.6实验室严禁行为:
A.在实验室内工作时,动作要轻,严格执行操作规程;
B.严禁在实验室跑跳、串岗、闲聊、嬉笑打闹;
C.在实验室内不做不必要的动作,不做易发尘和大幅度的动作;
D.严禁在实验室内吸烟、饮食和进行非生产性活动;
E.严禁上班时间玩电脑,不得打游戏,浏览与工作无关的网站;
F.严禁将各种个人物品如手表、手机、化妆品、手纸、钱包、钥匙等带入实验室;
G.严禁在实验室内座椅或实验桌上睡觉;H.严禁实验操作时无精打采、哈气连天;I.严禁在实验室内披头散发;
J.不得穿前露脚趾、后露脚跟的鞋子;
2.1.7实验室良好行为:
A.头发一律盘起或包入防护帽中,不得有头发裸露在外;
B.勤清洗实验服,保持实验服整洁,不在实验服上乱涂乱写;
C.勤修剪指甲,不留长指甲,不涂指甲油;
D.工作期间坐姿要端正,双腿交叠时腿要保持平稳;
E.站姿要挺直,不可无精打采;
F.实验操作期间尽量不正对着实验样本交流,除了工作上必须的交流,尽量少说话;
2.2实验室出入管理
2.2.1进出实验室的防护顺序白色实验服更衣区:
A.实验人员进入健康实验室,首先在白色实验服更衣区,换上白色实验服,戴一次性口罩、一次性帽子、穿上鞋套;
B.要将所有的头发包入帽子中,禁止脸部周围有碎发露出帽子;
C.佩戴实验室胸牌;
D.按七步洗手法洗手并擦干或吹干,然后进行实验操作;
E.操作完毕,脱下手套、帽子、口罩和实验服,实验服整齐叠好放到对应的实验柜中;
F.在普通清洁区按七步洗手法洗手,擦干或吹干;
G.离开实验室,关上实验门。
蓝色实验服更衣区
A.进入岗位实验室(如DNA提取室、测序室),需要换上蓝色防护服,先脱下白色实验服,将实验服整齐叠好放入更衣柜,再换上蓝色防护服。
B.蓝色防护服的穿衣顺序为:
鞋套→(裤子)→衣服→口罩→帽子;
C.按七步洗手法洗手并擦干或吹干;
D.处理血液样本时要进行特殊防护,如戴双层口罩和防护目眼镜;
E.操作完毕,脱下手套,按从上到下的顺序脱下实验服;
F.在普通清洁区按七步洗手法洗手并擦干或吹干;
G.离开实验室,关上实验门。
正确的洗手方法:
用流动的水冲洗手部,使手掌、手背、手指、指缝和
手腕部充分浸泡,打上洗手液等,在手掌、手背、手指、指缝和手腕部皮肤处反复揉搓30秒钟,用流水冲洗干净。
2.2.2进出实验室的注意事项:
A.穿衣时,不要使衣服触及地板、桌子、椅子等物品,不要沾污袖子和裤腿下
摆,姿势要保持直立,按从下至上顺序穿衣。
B.口罩应完全遮盖鼻子及口,上缘不能低于鼻孔,下缘不能高于口唇。
C.为了防止再次进入和往返作业对实验室造成交叉污染,人员在作业中途和作业完毕均应按规定的顺序退出实验室。
D.先在实验室脱下手套,进入更衣室后先关门,然后按先上后下的顺序脱下一次性帽子、口罩、防护服放入指定盛具内,再换鞋后离开。
E.最后离开实验室人员应仔细检查每间房所有该关的电器是否已关闭,并在进入实验室的门边《安全登记表》进行登记。
2.2.3严格控制进入实验室人员:
禁止外来人员随意进入实验室,因工作需要需进入实验室的维护、检测
人员和其他人员,如参观者等必须严格按以下步骤执行:
A.经过实验室管理人员同意;
B.必须严格按要求着装进入;
C.进入应由专人陪同并按要求登记《实验室来访人员进出情况登记表》;D.维修人员的工具、仪器等需经消毒处理后才能进入实验室。
下列人员不准进入实验室:
A.皮肤有晒焦、剥离、外伤和炎症、瘙痒症者。
B.鼻子排出物过多者。
C.冻伤、湿疹等疾病患者。
D.过多掉头皮、头发者,长指甲者,有搓皮肤、挖鼻孔、搔头等不良习惯者。
E.没有按规定洗去化妆品、指甲油和未穿洁净工作服者;没有及时刮须、剪指甲者。
2.2.4物品进出的管理
A.大的物件搬进岗位实验室时,先在公共实验室内用实验室真空吸尘器或自来水将灰尘擦净,然后用中性消毒剂对物件内外表面按要求进行消毒处理,再用纯水将消毒剂清洗干净;
B.测序室内净化系统运行期间,不许搬进大的物件;
C.小物件在进岗位实验室前,应先在公共实验室内擦拭清洁消毒,通过传递窗紫外消毒再带进去;
2.3实验室清洁卫生管理
2.3.1整理
A.将实验区内不需要的物品整理好:
可以回收利用的(如枪头盒):
暂存实验台下面的空柜子中,柜子做好标记并通知相关人员;或直接扔到垃圾房中。
不可回收利用的:
废弃物可直接倒掉。
B.废液缸的垃圾达到废液缸的一半就要清理掉,冰盒用完后敞开盖子,整齐的摆放在冰盒晾晒区。
C.工作时要保持台面有序不乱;任何物品使用完毕后立即按要求放回原位;记录单等文件填写完毕,要按要求放回原处或上交存档。
D.实验台面、实验架和柜子里的物品按物品标记要求分类放置。
E.移液器使用后按要求放置:
调回最大量程;清洁移液器表面;放回规定枪架位置。
F.枪头盒:
实验人员离开实验桌或长时间不使用(10分钟以上)时枪头盒要盖好,放置在规定区域。
2.3.2及时补充抽屉内的防护用品如口罩、手套、鞋套等。
A.所有的仪器设备放在相应的黄色警示区内,仪器底部边缘不得超出警示区,禁止随意搬动仪器,如意外情况需搬动仪器一定要经过相应实验区负责人的同意,用完后要及时归还,仪器归还后实验区负责人要检查仪器是否使用正常。
B.各实验区的实验物品都要做好各实验区相应的标记,公用的物品只需标记部
门名称;通用物品也要做好标记如铝饭盒,按用途分类做好标记。
C.实验物品的放置与标签对应。
D.实验试剂开启后要在瓶身和盖子上标注开启日期,新配置的试剂要标注试剂名称、配制人、配制时间,试剂的放置要安全、整齐、便于拿取。
E.根据实验服的编号将实验服整齐的放到相应标记柜子中,禁止将实验服放到实验桌上或凳子上,实验鞋也放到标记好的柜子中摆放整齐。
F.实验室的通道要畅通无阻,特别是蓝色实验服通道不仅要畅通无阻,还禁止随意走动,只有换上干净的鞋套才可进入。
G.实验室的自来水水龙头已做好标记,按标记要求使用。
1)普通清洁区:
Ø洗手专用:
可用来穿白色实验服或便服时洗手专用水龙头,为了不引起污染,戴操作手套时尽量不使用该水龙头;
Ø清洁专用:
可用打扫卫生时,或清洁废液缸专用,尽量戴手套使用该水龙头
2)蓝色实验服清洁区:
Ø洗手专用:
穿蓝色实验服时洗手专用水龙头,为了不引起污染,戴操作手套时尽量不使用该水龙头;
Ø清洁专用:
穿蓝色实验服清洁,或清洁废液缸专用,尽量戴手套使用该水龙头
H.凳子(椅子)的摆放要求:
无人使用时,凳子(椅子)推入桌下,椅背摆正;做完实验后也应该立即回位。
I.工作中所用到的相关文件、记录等应分类摆放整齐、填写清楚无误。
纸质记录单等要远离水源,必须避免受到污染和损坏。
2.3.3实验前清洁整理工作:
A.将窗台上的灰尘用干布擦净;
B.实验台用75%酒精擦拭干净;
C.超净台台面用75%酒精由内向外擦拭干净,开紫外照射30min,再吹风10min;D.实验需要的耗材(如双面板)按要求先75%酒精擦拭,再紫外照射30min;E.移液枪用先75%酒精擦拭,再紫外照射30min;
F.仪器外表面用75%酒精擦拭,屏幕可以触屏的仪器屏幕用洁净的干布擦拭;
G.废液缸用75%酒精擦拭外表面,再紫外照射30min
H.注:
没有超净台的实验区,也按以上步骤清洁,但不需紫外照射30min。
超净台开紫外和吹风期间,人尽量不要留在实验室,实验室门关闭并在门上挂上紫外消毒牌,消毒完毕要及时取下消毒牌。
2.3.4实验工作结束后的清洁整理工作:
A.实验台用75%酒精擦拭干净。
B.超净台台面用75%酒精由内向外擦拭干净。
C.实验用过的耗材(如双面板)按要求用75%酒精擦拭干净。
D.移液枪用先调到最大量程,再用75%酒精擦拭。
E.仪器外表面用75%酒精擦拭,可以触屏的仪器屏幕用洁净的干布擦拭,仪器内表面用干布擦拭异物、冷凝水等;
F.废液缸先倒掉垃圾,用75%酒精喷洒内外表面,静置10min,装有血液样本的废液缸倒掉垃圾后要用84消毒液喷洒废液缸内外,并将84消毒液没过废液缸底部,静置30min,然后先用自来水冲洗,再用纯水润洗三遍,然后放到废液缸晾晒区;
G.各实验区的垃圾清理干净,分类放到清洁房;
H.每天实验结束后,各实验区地面用清水拖一遍。
2.3.5实验室每周清洁整理:
A.每周五清洁超净台:
先将超净工作台台面上的物品取出,用1%的苯扎溴铵溶液清洁超净台的台面、内壁和外壁,再用纯水清洁一遍,超净台挡风玻璃内外侧要纯水擦拭,最后填写超净台每周清洁表。
B.实验室内部清洁:
每周五用1%的苯扎溴铵溶液擦拭实验台面、地板和门把手,再用纯水清洁一遍。
C.实验仪器清洁:
实验仪器按要求用75%酒精擦拭外表面。
D.实验室消毒:
实验室整理清洁后开实验室紫外灯或臭氧,并在消毒的实验室门口挂上消毒牌。
E.实验服的清洁:
白色实验服和蓝色实验服分开洗,每周一完成白色实验服的清洗工作,白色实验服用洗衣机清洗干净,用衣称挂起晾干;蓝色实验服每周一、周三清洗,先用洗衣机清洗干净,用灭菌锅灭菌再烘干,然后放到实验室的相应柜子中;蓝色实验鞋套每天清洗烘干。
2.3.6每月清洁整理:
A.墙壁清洁:
每个月用1%的苯扎溴铵溶液清洁实验的墙壁、天花板、灯,并用纯水清洁一遍,玻璃直接用纯水擦拭。
B.实验容器清洁:
将反复使用的容器如废液缸、双面板、试管架等用84消毒剂浸泡30分钟,先用自来水冲洗干净、再用纯水润洗两遍,晾干放到各实验室。
C.更换记录表:
更换实验室各种记录表,对于记录潦草的表格进行重新抄录,
换下来的表格分类入档。
表1清扫和灭菌方法
清洁范围/物品
具体方法
整个房间
一周1次,用臭氧处理1个半小时,
再打开通风系统2个小时
地板
每天用清水清洁一次,每周使用消毒
液擦洗一次
墙面
每月使用消毒液擦洗一次
顶棚
每月使用消毒液擦洗一次
设备、器具和杂物
水洗和擦拭后,灭菌或消毒;或直接用
消毒液擦拭
蓝色防护服
每周一、三清洗灭菌一次
白色实验服
每周一清洗一次
实验鞋套
每天清洗一次
注意事项:
A.实验室的一切清洁工作必须湿式打扫,在实验室净化系统工作状态下进行。
B.准备专用的实验室清扫材料和工具,清洁用品不得采用易掉纤维的织物,一般可用长纤维材料或聚氨酯海棉。
2.3.7实验垃圾分类放置:
普通垃圾放在黑色垃圾袋中,与血液、血浆有关的垃圾放在黄色医疗垃
圾袋中,每天处理完样品后及时将垃圾处理掉,垃圾袋扔在清洗间指定垃圾桶中。
2.3.8消毒剂的使用与配制
1)84消毒液的使用:
84消毒被血液污染的物品,稀释比例为1:
20,约2000mg/L,相当于1份84消毒液+20份清水。
实验室用法为10ml消毒液+200ml清水,作用时间为大于30min。
使用注意事项:
A.稀释后的84消毒液极易分解,使杀菌力降低,因此必须现配现用,使用时间不超过1天。
B.配制时应先加水再倒入药液。
C.84消毒液有强烈腐蚀性,因此,稀释前请尽量戴上手套。
D.在完成稀释后,不要脱下手套,若沾到皮肤上立即用清水冲洗。
E.未经配置的84消毒液在阳光下会产生毒气,因此请放置在阴凉的地方。
F.使用后的84消毒液直接倒入实验室的下水道。
2)苯扎溴铵的使用用途用法实验室墙面、地面、天花板、台面等定期消毒时,将一瓶苯扎溴铵溶液倒入淡蓝色垃圾桶内,再注入纯水至垃圾桶桶线处。
3)乙醇的使用用途用法
A.95%乙醇:
从仓库领用的乙醇即为95%乙醇,只用于酒精灯。
B.75%乙醇:
以1000:
267稀释95%乙醇即为75%乙醇,用于实验物品、实验台面的日常清洁灭菌,酒精棉的浸泡,进出超净台物品的灭菌消毒。
4)碘伏的使用用途用法:
直接使用碘伏原液擦拭物品表面,擦拭2遍,作用时间2分钟,稍干以后用
75%乙醇脱碘,用于不适合浸泡消毒的物品,例如未分离血浆的采血管等。
2.4仪器试剂使用管理
2.4.1严格遵守各种仪器的操作规程和登记制度,按仪器的使用权限使用仪器,未经过相关仪器使用培训,禁止随意使用仪器。
2.4.2实验前要先检查仪器是否损坏,接通电源后,检查是否运转正常及表面是否清洁卫生。
发现问题及时报告实验室管理人员,并找上一次使用者说明情况。
知情不报者追查当次使用者的责任。
2.4.3任何使用者必须在掌握仪器设备的性能与操作程序后方可操作,操作仪器前
要熟读仪器旁边张贴的仪器使用注意事项,确保已熟悉这些再使用,凡对使用的仪器的操作无把握者,务必请教仪器负责人或其他人员。
2.4.4仪器使用中发现异常及时上报并填写《意外事故记录单》。
2.4.5仪器使用过后按要求对仪器进行清洁、整理并按要求填写《仪器使用记录表》。
2.4.6需要过夜运行的仪器一定要做好标记。
2.4.7本实验室成员不得随便带外来人员到实验室,如室外人员需要用本实验室仪器设备和试剂,则需由实验室负责人同意,并让其做好登记。
2.4.8各种财产包括仪器、设备工具、试剂等严禁带出实验室,如有特殊需要,经实验室管理人员同意后方可带出,并负责带回。
2.4.9试剂使用过程中要熟悉试剂的保存条件,使用完毕后按要求放回原处。
2.4.10刚开封的试剂要在试剂瓶身及瓶盖上标上开封日期,配制试剂要标明试剂的浓度、名称、配制日
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