流式细胞仪的原理和用途.docx
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流式细胞仪的原理和用途
流式细胞仪(Flow Cytometry)
1流式细胞仪得概念及其发展历史
1。
1 流式细胞仪得基本概念 流式细胞仪(flow cytonletry,FCM)就是对高速直线流动得细胞或生物微粒进行快速定量测定与分析得仪器,主要包括样品得液流技术、细胞得计数与分选技术,计算机对数据得采集与分析技术等。
流式细胞仪以流式细胞术为理论基础,就是流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫学、细胞荧光化学与计算机等学科知识综合运用得结晶。
流式细胞术就是一种自动分析与分选细胞或亚细胞得技术。
其特点就是:
测量速度快、被测群体大、可进行多参数测量,即对同一个细胞做有关物理、生物化学特性得多参数测量,且在统计学上有效。
1。
2流式细胞仪得发展简史 最早得流式细胞仪雏形诞生于1934年,Moldavan提出使悬浮得单个血红细胞流过玻璃毛细管,在亮视野下用显微镜进行计数,并用光电记录装置测量得设想。
1953年Crosland-Taylor根据牛顿流体在圆形管中流动规律设计了流动室。
其后又经过Coulter、Parker&Horst、Kamentsky、Gohde、Fulwyler、Herzenberg等人得不断改进,设计了光电检测设备与细胞分选装置、完成了计算机与流式细胞仪得物理连接及多参数数据得记录与分析、开创了细胞得免疫荧光染色及检测技术、推广流式细胞仪在临床上得应用。
近20年来,随着流式细胞仪及其检测技术得日臻完善,人们越来越致力于样品制备、细胞标记、软件开发等方面得工作,以扩大FCM得应用领域与使用效果。
宋平根得《流式细胞术得原理与应用》就是迄今为止对流式细胞仪及其技术阐述得最为详尽与透彻得中文著作.这本书非常详细地介绍了流式细胞术得历史、结构、原理、技术指标等,例举了其在医学与生物工程中得应用,非常适合从事此方面专业研究得人。
由于这本书就是13年前出版得,所以基本上没有涉及植物流式细胞仪检测技术。
此外对于只需要对流式细胞仪有些基本认识得人士来说,这本书太复杂太深奥。
谢小梅主要介绍了流式细胞仪在生物工程中得应用。
杨蕊概括了流式细胞仪得工作原理,简单提及了流式细胞仪得应用。
本文在分析这三篇论著或文章得优缺点后,用比较通俗得语言介绍了掌握流式细胞仪检测技术必须了解得一些原理,并对目前市场上得主流型号进行了客观得性能概括。
2流式细胞仪得工作原理与技术指标
2。
1流式细胞仪工作原理 除电源外,流式细胞仪主要由四部分组成:
流动室与液流系统:
激光源与光学系统;光电管与检测系统;计算机与分析系统,其中流动室就是仪器得核心部件。
这四大部件共同完成了信号得产生、转换与传输得任务.
流动室与液流系统
流动室由样品管、鞘液管与喷嘴等组成,常用光学玻璃、石英等透明、稳定得材料制作。
设计与制作均很精细,就是液流系统得心脏。
样品管贮放样品,单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出;鞘液由鞘液管从四周流向喷孔,包围在样品外周后从喷嘴射出。
为了保证液流就是稳液,一般限制液流速度υ<10m/s。
由于鞘液得作用,被检测细胞被限制在液流得轴线上.流动室上装有压电晶体,受到振荡信号可发生振动.
激光源与光学系统
经特异荧光染色得细胞需要合适得光源照射激发才能发出荧光供收集检测.常用得光源有弧光灯与激光;激光器又以氩离子激光器为普遍,也有配与氪离子激光器或染料激光器。
光源得选择主要根据被激发物质得激发光谱而定。
汞灯就是最常用得弧光灯,其发射光谱大部分集中于300~400nm,很适合需要用紫外光激发得场合。
氩离子激光器得发射光谱中,绿光514nm与蓝光488nm得谱线最强,约占总光强得80%;氪离子激光器光谱多集中在可见光部分,以647nm较强.免疫学上使用得一些荧光染料激发光波长在550nm以上,可使用染料激光器。
将有机染料做为激光器泵浦得一种成份,可使原激光器得光谱发生改变以适应需要即构成染料激光器。
例如用氩离子激光器得绿光泵浦含有Rhodamine6G水溶液得染料激光器,则可得到550~650nm连续可调得激光,尤在590nm处转换效率最高,约可占到一半。
为使细胞得到均匀照射,并提高分辨率,照射到细胞上得激光光斑直径应与细胞直径相近。
因此需将激光光束经透镜会聚.光斑直径d可由下式确定:
d=4λf/πD。
λ为激光波长;f为透镜焦距;D为激光束直径。
色散棱镜用来选择激光得波长,调整反射镜得角度使调谐到所需要得波长λ。
为了进一步使检测得发射荧光更强,并提高荧光讯号得信噪比,在光路中还使用了多种滤片。
带阻或带通滤片就是有选择性地使某一滤长区段得光线滤除或通过。
例如使用525nm带通滤片只允许FITC(Fluoresceinisothiocyanate,异硫氰荧光素)发射得525nm绿光通过.长波通过二向色性反射镜只允许某一波长以上得光线通过而将此波长以下得另一特定波长得光线反射.在免疫分析中常要同时探测两种以上得波长得荧光信号,就采用二向色性反射镜,或二向色性分光器,来有效地将各种荧光分开。
光电管与检测系统
经荧光染色得细胞受合适得光激发后所产生得荧光就是通过光电转换器转变成电信号而进行测量得。
光电倍增管(PMT)最为常用。
PMT得响应时间短,仅为ns数量级;光谱响应特性好,在200~900nm得光谱区,光量子产额都比较高。
光电倍增管得增益从10到10可连续调节,因此对弱光测量十分有利。
光电管运行时特别要注意稳定性问题,工作电压要十分稳定,工作电流及功率不能太大。
一般功耗低于0、5W;最大阳极电流在几个毫安。
此外要注意对光电管进行暗适应处理,并注意良好得磁屏蔽。
在使用中还要注意安装位置不同得PMT,因为光谱响应特性不同,不宜互换.也有用硅光电二极管得,它在强光下稳定性比PMT好。
从PMT输出得电信号仍然较弱,需要经过放大后才能输入分析仪器。
流式细胞计中一般备有两类放大器。
一类就是输出信号辐度与输入信号成线性关系,称为线性放大器。
线性放大器适用于在较小范围内变化得信号以及代表生物学线性过程得信号,例DNA测量等。
另一类就是对数放大器,输出信号与输入信号之间成常用对数关系.在免疫学测量中常使用对数放大器.因为在免疫分析时常要同时显示阴性、阳性与强阳性三个亚群,它们得荧光强度相差1~2个数量级;而且在多色免疫荧光测量中,用对数放大器采集数据易于解释。
此外还有调节便利、细胞群体分布形状不易受外界工作条件影响等优点。
计算机与分析系统
经放大后得电信号被送往计算机分析器。
多道得道数就是与电信号得脉冲高度相对应得,也就是与光信号得强弱相关得。
对应道数年纵坐标通常代表发出该信号得细胞相对数目。
多道分析器出来得信号再经模-数转换器输往微机处理器编成数据文件,或存贮于计算机得硬盘与软盘上,或存于仪器内以备调用。
计算机得存贮容量较大,可存贮同一细胞得6~8个参数。
存贮于计算机内得数据可以在实测后脱机重现,进行数据处理与分析,最后给出结果。
除上述四个主要部分外,还备有电源及压缩气体等附加装置.
2.1.1信号得产生、转换与传输在压力作用下,鞘液管中得鞘液被持续不断地压入流动室,形成一股稳定地连续得液流,保证了样本液稳定地处于鞘液液流得轴线上,并以单个细胞形式直线通过激光照射区.激光照射区又称测量区,就是指液流与激光束垂直相交得点。
当细胞携带荧光素标记物(每种物质携带得标记物不同吗?
)通过激光照射区时,产生代表细胞内部不同物质、不同波长得荧光信号,这些信号以细胞为中心,向空间360°立体角发射,产生散射光与荧光信号。
散射光不依赖任何细胞样品得制备技术,因此被称为细胞得物理参数或固有参数。
散射光又包括前向角散射与测向角散射。
前向角散射与被测细胞直径得平方密切相关,测向角散射光对细胞膜、胞质、核膜得折射率更敏感,可提供有关细胞内精细结构与颗粒性质得信息。
荧光信号也有二种;一种就是细胞自身在激光照射下发出得微弱荧光信号,另一种就是经过特异荧光素标记后得细胞受激发照射后得到得荧光信号。
在免疫分析中常要同时探测两种以上波长得荧光信号,就采用二向色性反射镜,或二向色性分光器,来有效地将各种荧光分开.
经荧光染色得细胞受到适合得光激发后产生得荧光就是通过光电转换器转变成电信号而进行测量得。
最常用得光电转换器就是光电倍增管(PMT)。
从PMT输出得电信号需要经过放大后才能输入分析仪器。
流式细胞仪中一般备有两类放大器.一类就是线性放大器,其输出信号与输入信号成线性关系。
线性放大器适用于在较小范围内变化得信号以及代表生物学线性过程得信号,如DNA测量等。
另一类就是对数放大器,其输出信号与输入信号之间成常用对数关系。
在免疫学测量中常使用对数放大器。
放大后得电信号被传送到计算机,再经模一数转换器传输到微机处理器形成数据文件,保存在计算机上。
保存在计算机上得数据可在脱机后再进行数据处理与分析。
参数(例如:
细胞得大小、形态、质膜与细胞内部结构)测量原理
流式细胞仪可同时进行多参数测量,信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。
测量就是在测量区进行得,所谓测量区就就是照射激光束与喷出喷孔得液流束垂直相交点。
液流中央得单个细胞通过测量区时,受到激光照射会向立体角为2π(360°)得整个空间散射光线,散射光得波长与入射光得波长相同。
散射光得强度及其空间分布与细胞得大小、形态、质膜与细胞内部结构密切相关,因为这些生物学参数又与细胞对光线得反射、折射等光学特性有关.未遭受任何损坏得细胞对光线都具有特征性得散射,因此可利用不同得散射光信号对不经染色活细胞进行分析与分选。
经过固定得与染色处理得细胞由于光学性质得改变,其散射光信号当然不同于活细胞。
散射光不仅与作为散射中心得细胞得参数相关,还跟散射角、及收集散射光线得立体角等非生物因素有关。
在流式细胞术测量中,常用得就是两种散射方向得散射光测量:
①前向角(即0角)散射(FSC);②侧向散射(SSC),又称90角散射。
这时所说得角度指得就是激光束照射方向与收集散射光信号得光电倍增管轴向方向之间大致所成得角度.一般说来,前向角散射光得强度与细胞得大小有关,对同种细胞群体随着细胞截面积得增大而增大;对球形活细胞经实验表明在小立体角范围内基本上与截面积大小成线性关系;对于形状复杂具有取向性得细胞则可能差异很大,尤其需要注意.侧向散射光得测量主要用来获取有关细胞内部精细结构得颗粒性质得有关信息。
侧向散射光虽然也与细胞得形状与大小有关,但它对细胞膜、胞质、核膜得折射率更为敏感,也能对细胞质内较大颗粒给出灵敏反映。
在实际使用中,仪器首先要对光散射信号进行测量。
当光散射分析与荧光探针联合使用时,可鉴别出样品中被染色与未被染色细胞。
光散射测量最有效得用途就是从非均一得群体中鉴别出某些亚群.
荧光信号主要包括两部分:
①自发荧光,即不经荧光染色细胞内部得荧光分子经光照射后所发出得荧光;②特征荧光,即由细胞经染色结合上得荧光染料受光照而发出得荧光,其荧光强度较弱,波长也与照射激光不同。
自发荧光信号为噪声信号,在多数情况下会干扰对特异荧光信号得分辨与测量。
在免疫细胞化学等测量中,对于结合水平不高得荧光抗体来说,如何提高信噪比就是个关键。
一般说来,细胞成分中能够产生得自发荧光得分子(例核黄素、细胞色素等)得含量越高,自发荧光越强;培养细胞中死细胞/活细胞比例越高,自发荧光越强;细胞样品中所含亮细胞得比例越高,自发荧光越强。
减少自发荧光干扰、提高信噪比得主要措施就是:
①尽量选用较亮得荧光染料;②选用适宜得激光与滤片光学系统;③采用电子补偿电路,将自发荧光得本底贡献予以补偿。
2。
1.2流式细胞仪分选原理 并不就是所有得流式细胞仪都具有分选功能.流式细胞仪得分选功能就是由细胞分选器来完成得。
由喷嘴射出得液流柱在电信号作用下发生振动,断裂形成均匀得小液滴。
根据选定得某个参数由逻辑电路判明就是否将被分选,而后由充电电路对选定细胞液滴充电,带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转,落入收集器中。
使用不同孔径得喷孔及改变液流速度,可能会改变分选效果。
从参数测定经逻辑选择再到脉冲充电需要一段延迟时间。
精确测定延迟时间就是决定分选质量得关键,可根据具体要求进行适当调整。
2。
1。
3数据得显示与分析 数据处理主要包括数据得显示与分析.单参数直方图就是使用最多得图形显示形式,既可用于定性分析,又可用于定量分析.单参数直方图就是由X、Y二方向组成得二维平面图.横座标X就是所测得荧光或散射光得强度,用“道数”(ChannelNo。
)来表示。
选择得放大器类型不同,标度不同。
纵座标Y通常表示被测细胞得绝对数目.正常情况下,数据分析得到得图形为具有一个或若干个峰得曲线图.对曲线图得解释应该具体问题具体分析。
除直方图外,数据显示方式还包括二维点图、二维等高图、假三维图与列表模式等。
二维点图也就是比较常用得数据显示类型。
它显示两个独立参数与细胞相对数之间得关系,也就是二维平面图,横纵坐标可以根据自己选定得被测参数自行决定,点得位置表明了细胞与颗粒具有得二个被测参数得数值。
二维点图所提供得信息量要大于单参数直方图.
数据分析得方法大体可分为参数法与非参数法两大类。
当被检测得生物学系统能够用某种数学模型时则多使用参数方法.非参数分析法不用对显示得图像做任何假设,也不采用数学模型,分析程序可以很简单,也可能很复杂。
临床医学较常使用非参数分析法.
2。
2流式细胞仪性能得技术指标流式细胞仪性能得技术指标主要有荧光分辨率、荧光灵敏度、适用样品浓度、分选纯度等。
荧光分辨率就是指分辨两个相邻峰得最小距离,通常用变异系数(CV值)来表示。
现在市场上主流型号出厂时得荧光分辨率应该小于2、0%。
荧光灵敏度反映了仪器探测最小荧光光强得能力。
一般用荧光微球上可测出得FITC得最少分子数来表示.目前仪器均可达到1000左右。
仪器工作时样品浓度一般在105~107细胞/ml.分析速度/分选速度就是指流式细胞仪每秒种可分析或分选得颗粒数目。
一般分析速度为5000~10000,分选速度控制在1000以下。
流式细胞仪测量得数据就是相对值,因此需要在使用前对系统进行校准或标定。
流式细胞仪得校准有二个目得,即仪器得准直调整与定量标度.通常使用标准微球作为非生物学标准样品,鸡血红细胞做为生物学标准样品。
3 主流流式细胞仪型号及其特性介绍
目前拥有市场较大份额得公司就是美国得BD(Becton-Dickinson)公司、Beckman—Coulter公司(原名称Coulter)与德国得Partec公司。
3。
1BD公司流式细胞仪介绍BD公司生产得流式细胞仪都冠以FACs(fluorescenceactivated cell sorter),即荧光激活细胞分选器.其型号种类比较齐全,如早期得FACSort、FACS Canto、FACSean。
现在市场上供应得型号有五种:
FACSCount(小型流式细胞仪)、FACSCAlibur(流式细胞仪)、FACSAria(流式细胞分选仪)、FACSVantage SETM(多色分析与高速分选流式细胞仪)、LSRII(数字化分析型流式细胞仪)。
FACSCount为精确计数淋巴细胞CD3,CD4,CD8绝对数而设计得。
FACSCalibur就是全自动多色流式系统,偏重于临床,其整体设计帮助临床医生快速实现常规免疫表型、CD4T细胞计数、DNA、网织红细胞、血小板等临床分析,兼具分选功能。
配备有二根激光管,可同时检测4个荧光参数。
可识别粘联细胞。
BDFACSA ria流式细胞分选仪为台式高速细胞分选仪,获取速度达70,000细胞/s,分析速度达50,000/s。
使用石英杯流动检测池固定光路校准技术.使用三种激光,多色分析,分析参数可达15色。
两管或四管分选,可以使用多种规格得收集管。
液流监测系统白动监测液流断点,检查堵塞,实现了细胞分选得无人操作。
配件BDACDU装置,可以在微孔板或载波片上定量分选细胞。
FACSVantageSETM就是在FACSVantage得细胞分选功能基础上推出得分选增强型流式细胞仪。
六色荧光分析系统,点对点分选,配置FACSDiva数字化系统,提供全面得配套试剂.速度与功能优于FACSVantage。
BDLSRII就是LSR得数字化升级版,其性能介于FACSVantageSE与FACS Calibur之间,就是专为生命科学研究设计得台式机。
配备固定校准得紫外激光,四种激光立体空间激发、十色荧光同时分析、电子系统数字化、比较易学易用。
3.2Beckman—Coulter公司流式细胞仪介绍Beckman—Coulter公司生产得流式细胞仪以Profile(早期,现已停产)与EPICS系列为代表,近年又推出了CytomicsFC500系列。
EPICS系列就是大型流式细胞仪,目前市场上有XL、XL—MCL与ALTRA三种型号,其中ALTRA具有分选功能,适用于免疫学、细胞生理、分子生物学、遗传学、微生物学、水质分析与植物细胞分析。
Cytomics FC500系列流式细胞仪体积小,可自动进行5种颜色得分析,适用于免疫学检测,如人类HIV诊断。
特别就是FC500MPL得独特设计可以在同一系统上使用12×75mm得离心管与24或96孔得平板。
特别适合工作量大得实验室。
这二个公司主要针对医学研究与临床工作进行设计与生产,其产品可应用于生物医学基础研究以及临床检测得许多领域,如遗传、肿瘤、血液、免疫等诸多研究中红细胞、T细胞、淋巴细胞亚群测定、检测早期细胞凋亡、肿瘤细胞免疫测定等.这二个公司得流式细胞仪价格昂贵,我国主要购买、使用得单位基本上都就是一些医疗机构。
3.3Partec公司流式细胞仪介绍与BD与Becman—Coutler公司得产品相比,德国Partec公司生产得流式细胞仪得共同特点就是体积小,造价低,易操作,便于携带,适合植物学研究,适合边远地区与发展中国家。
德国Partec公司得产品分为三类:
CCA家族、PAS家族与CyFlow家族(Galaxy为早期产品,已停产).CCA家族包括细胞计数分析仪CCA与倍性分析仪PA—I。
它就是单或双参数得台式小型机,可以进行一些常规分析,如核DNA测定(检测倍性或细胞周期)、细胞计数、细胞凋亡.它得特点就是体积小,易操作,价格低,检测范围广,可以检测多种荧光素(如PI、DAPI、Fluorescein)发出得荧光。
PAS家族包括粒子分析系统PAS、粒子分析系统III(PAS—III)与倍性分析仪PA-II.提供三种激光器得三种组合,可检测十余种荧光染料。
最多可检测与记录八个独立荧光参数.倍性分析仪PA能够在2分钟内自动测量植物得倍性水平,检测异倍体。
可以对叶片、幼苗、种子、果皮、根、花等植物材料进行分析。
在大多数植物中,异倍体染色体得检测分辨率为±1条染色体。
PA—I使用HBO—100汞灯,属于弧光灯,可产生紫外激发光与蓝光.PA—II中增加了488nm氩离子激光器,能够检测几乎所有得荧光染料,如DAPI,Hoeehst,PI,EB,MMC,FITC,FDA等.汞灯发光就是电流经过气体时,气体电离产生得。
它能提供最佳得激发波长。
CyFlow(R)SL配备三种激光管,可应用于诸如人类健康、微生物学、工业应用、过程控制、生态学等研究。
如HIV扫描中免疫标记细胞计数、食品处理过程中得微生物计数、细胞凋亡等。
它使用l2V直流电,特别适合边远地区与发展中国家。
国际上20世纪80年代开始将流式细胞仪检测应用到植物得研究中(Galbraith,1983),众多学者都认为流式细胞仪就是一种准确、快速得检测DNA含量得方法(Michaelson,1991).应用范围主要就是利用流式细胞仪研究属内、属间多种植物得DNA含量(Baird,1994;Jacob,1996;HALL,2000)与倍性水平(Costich,1993;Meng,2002)、检测体细胞杂种(Pfosser,1995;Keller,1996)与游离小孢子培养再生株(Kim,2003)得DNA含量.过去我国应用这一检测技术得植物研究工作者寥寥无几,且大多就是在国外实验室完成得.研究内容包括植物生理、程序性死亡、倍性鉴定等。
植物研究中使用得流式细胞仪基本上都就是Partec公司得产品,也有少量就是BD公司生产得流式细胞仪。
BD公司得产品主要定位于医学研究与应用,与Partec产品相比,不太适合从事植物染色体倍性得鉴定。
主要体现在不能提供植物样品制备技术/试剂,数据获取软件可同时检测到得倍性数目少。
鉴于目前我国科研院所中使用较多得就是BD公司生产得流式细胞仪,在下一篇中将会对利用BD流式细胞仪进行植物倍性检测得技术与技巧做详细报告。
如何选择流式细胞仪
自七十年代出现第一代流式细胞仪以来,随着计算机技术、电子制造技术、激光技术及荧光素合成技术得不断发展,现代流式细胞仪已今非昔比,制造工艺、功能、精确度有了质得飞跃.
流式细胞仪生产厂商推出各种不同型号得流式细胞仪来满足用户得不同需要。
现生产流式细胞得厂商全球至少有六家,各厂商产品又有不同得系列,各具特点。
如何从众多得型号中挑选出最适合自己得机型,我们还需从分析应用出发,评估自己得需求来决定什么样得流式细胞仪最具性价比、最适合自己。
⑴、DNA倍体分析
DNA分析就是流式细胞仪最初且就是现在应用最广检测项目。
由于恶性细胞DNA含量通常与正常细胞不同,存在异倍体细胞,所以现有很研究评价异倍体细胞与肿瘤恶性度及其预后得关系.DNA含量检测还可提供细胞周期方面得信息,这在细胞生物学中运用很广泛。
特别地,它可表示出细胞毒性药物对细胞作用过程.这些DNA检测还可与细胞表面标志物标记同时进行,这样在细胞混合培养中,可通常追踪表达特异标志物得细胞显示其生长周期情况.所有方法都就是基于染料能与核酸起特异得化学反应并发射出荧光,常用得染料为PI,DAPI.
流式细胞仪要求:
488nm光源,575nm滤光片.
⑵、细胞生存能力实验
使用Heochest 33342染料与DNA特异性结合,后因细胞活力不同,染料得结合程度也各异,故可评估细胞得活性度。
流式细胞仪要求:
360nm光源,455nm滤光片。
⑶、计数外周血中检测网织红细胞
使用TO染料能够特异性地与RNA结合,结合系数高达3000,故具有很好得性价比。
流式细胞仪要求:
488nm光源,525nm滤光片,液量绝对计数系统。
⑷、外周血、骨髓采集物中CD34阳性干细胞计数,临床上用于骨髓移植前干细胞数理得测定
使用标准ISHAG方案,需要DNA或其她核染料占用FITC通道,PE标记CD34抗体,PE—CY5标记CD45抗体。
流式细胞仪要求:
488nm光源,525nm、575nm、675nm滤光片,液量绝对计数系统。
⑸、交叉淋巴细胞、粒细胞毒实验
检测识别供体血清中免疫球蛋白与受体粒细胞之间就是否存在反应有着重要临床意义,因为这种反应会导致移植后发热、移植后肺损伤及免疫性粒细胞缺乏症。
流式细胞仪可检测全血样本与血清孵育后粒细胞上结合得人免疫球蛋白。
FITC标记人免疫球蛋白抗体、PE标记粒细胞表面标志物、PE-CY5标记HLA抗体。
流式细胞仪要求:
488nm光源,525nm、575nm、675nm滤光片.
⑹、血小板自身抗体检测
血小板自身抗体识别人血小板抗原,会引起各种临床相关症状,如新生儿自免性血小板减少症、输血后紫癜、难治性血小板减少。
流式细胞可快速准确地检测血小板自身抗体。
FITC标记抗人免疫球蛋白抗体、PE标记识别血小板抗体。
流式细胞仪要求:
488nm光源,525nm、575nm滤光片。
⑺、移植交叉配型
原细胞毒实验,主要用于避免移植物超急性排拆反应。
流式细胞仪用于监测T或B细胞就是否受到受体血清中免疫球蛋白攻击,作为HLA配型前得预实验。
流式细胞仪因其高精确性已成为该领域内得金标准.FITC标记抗人免疫球蛋白抗体、PE标记识别T细胞CD3或B细胞CD29抗体。
仪器要求:
488nm光源,525nm、575nm滤光片。
⑻、
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- 细胞 原理 用途