dna粗提取和鉴定教学.ppt
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dna粗提取和鉴定教学.ppt
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讨论2:
怎样才能将细胞内的这些物质分离出来?
讨论1:
构成生物体的遗传物质是什么?
1、提取生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子,2、生物大分子主要指蛋白质、酶和核酸,3、提取DNA的基本思路利用DNA与等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分,提取DNA的方法,RNA、蛋白质和脂质,4、原理
(1)分离-DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图,思考在什么浓度下,DNA的溶解度最小?
DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的?
在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低;在0.14mol/L时,DNA溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA的溶解度又逐渐增大。
如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出?
当氯化钠的物质的量浓度为2molL时,DNA的溶解度最大,浓度为014molL时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理,可以使DNA在盐溶液中溶解或析出,4、原理
(2)提纯-DNA在酒精溶液中的溶解性DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质则可以溶于酒精。
利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步分离,
(2)提纯-DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性,蛋白酶能水解蛋白质,但是对DNA没有影响大多数蛋白质不能忍受6080C的高温,而DNA在80C以上才会变性洗涤剂能够瓦解细胞膜,去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响,5、DNA的鉴定
(1)DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
(2)甲基绿(蓝绿色),
(一)实验材料的选取,
(二)破碎细胞,获取含DNA的滤液,讨论:
为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?
2、植物细胞植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜,实例:
提取洋葱DNA时,在切碎的洋葱中加入一定的和,进行充分的,过滤后收集研磨液,洗涤剂,食盐,搅拌和研磨,讨论:
如果研磨不充分,会对实验结果产生怎样的影响?
(三)去除滤液中的杂质,为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理,讨论:
此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分?
答:
可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质,为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质,(四)DNA的析出与鉴定,1、以血液为实验材料时,每100ml血液中需要加入3g,防止。
2、加入后,动作要,否则容易产生大量的,不利于后续步骤的操作。
加入和用搅拌时,动作要轻缓,以免加剧,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
3、二苯胺试剂要,否则会影响鉴定的效果。
柠檬酸钠,血液凝固,洗涤剂,轻缓、柔和,泡沫,酒精,玻璃棒,DNA分子的断裂,现配现用,.案例一:
以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取,三.实验案例,.鸡血细胞极易吸水胀破,而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心,对设备要求较高,操作繁琐,历时较长。
1.鸡血细胞做实验材料的原因,.鸡血细胞核的DNA含量丰富,材料易得。
2.实验原理,.DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为0.14molL时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
.DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。
利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
3.实验材料和用具:
鸡血细胞液(510ml);体积分数为95%的冷酒精溶液(实验前置于冰箱内冷却24h);蒸馏水;质量浓度为0g/ml的柠檬酸钠溶液;物质量浓度分别为2mol/L和0015mol/L的氯化纳溶液;二苯胺试剂。
铁架台;铁环;镊子;三角架;酒精灯;石棉网;载玻片;玻璃棒;滤纸;滴管;量筒(100ml,一个);烧杯;(100ml,一个,50ml、500ml各二个);试管(20ml,二个);漏斗;试管夹;纱布。
5.方法步骤,将制备好的鸡血细胞液5mL10mL,注入到50mL烧杯中。
向烧杯中加入蒸馏水20mL,同时用玻璃棒充分搅拌5min,使血细胞加速破裂。
然后,用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。
取其滤液。
.提取鸡血细胞的细胞核物质,4.课前准备鸡血细胞液,取质量浓度为01g/ml的柠檬酸纳溶液100ml,置于500ml烧杯中。
注入新鲜的鸡血(约180ml),同时用玻璃棒搅拌,使血液与柠檬酸纳溶液充分混合,以免凝血。
将烧杯中的血液置于冰箱内,静置一天,使血细胞自行沉淀。
(也可以将血液倒入离心管内,用1000r/min(转每分)的离心机离心2min,血细胞沉淀于离心管底部。
实验时。
用吸管除去离心管上部的澄清液,就可以得到鸡血细胞液。
),.过程,.柠檬酸钠作用,防止血液凝固。
.作用机理,柠檬酸钠能与血浆中的Ca2+发生反应,生成柠檬酸钙络合物,血浆中游离的Ca2+大大减少,血液就不会凝固。
鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,所以在提取过程中为了减少DNA的损失,最好使用塑料的容器盛放鸡血细胞液。
.注意事项,5.方法步骤,将制备好的鸡血细胞液5mL10mL,注入到50mL烧杯中。
向烧杯中加入蒸馏水20mL,同时用玻璃棒充分搅拌5min,使血细胞加速破裂。
然后,用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。
取其滤液。
.提取鸡血细胞的细胞核物质,讨论:
答:
让细胞内浓度大于周围溶液的浓度,细胞会吸水以至胀破,1.为什么要加入蒸馏水?
加入蒸馏水后细胞会有什么变化?
2.用玻璃棒搅拌有什么意义?
答:
用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。
注意应沿一个方向快速搅拌,但也不能太快太猛,防止打碎DNA,3.滤去的是什么物质?
得到的是什么?
答:
过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质;得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA,.溶解细胞核内的DNA,将氯化钠的物质的量浓度为2mol的溶40mL加入到滤液中,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状态。
沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水,同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物出现,注意观察丝状物呈什么颜色。
继续加入蒸馏水,溶液中出现的粘稠物会越来越多。
当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水(这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14molL),.析出含DNA的粘稠物,5.方法步骤,将制备好的鸡血细胞液5mL10mL,注入到50mL烧杯中。
向烧杯中加入蒸馏水20mL,同时用玻璃棒充分搅拌5min,使血细胞加速破裂。
然后,用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。
取其滤液。
.提取鸡血细胞的细胞核物质,讨论:
答:
让细胞内浓度大于周围溶液的浓度,细胞会吸水以至胀破,1.为什么要加入蒸馏水?
加入蒸馏水后细胞会有什么变化?
2.用玻璃棒搅拌有什么意义?
答:
用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。
注意应沿一个方向快速搅拌,但也不能太快太猛,防止打碎DNA,3.滤去的是什么物质?
得到的是什么?
答:
过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质;得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA,.溶解细胞核内的DNA,将氯化钠的物质的量浓度为2mol的溶40mL加入到滤液中,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状态。
沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水,同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物出现,注意观察丝状物呈什么颜色。
继续加入蒸馏水,溶液中出现的粘稠物会越来越多。
当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水(这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14molL),.析出含DNA的粘稠物,讨论:
加入蒸馏水的目的?
降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点,使DNA从NaCl溶液中析出,将溶液中的DNA与其他杂质分离,这一步骤是实验成败的关键。
实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌,以利于DNA分子的附着和缠绕.,注意事项:
.滤取含DNA的粘稠物,用放有多层纱布的漏斗,过滤步骤3中的溶液至500mL的烧杯中,含DNA的粘稠物被留在纱布上,.将DNA的粘稠物再溶解,取1个50mL烧杯,向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为2molL的溶液20mL。
用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中,用玻璃择不停地搅拌,使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中,.过滤含有DNA的氯化钠溶液,取1个100mL烧杯,用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。
取其滤液,DNA溶于滤液中,.提取含杂质较少的DNA,在上述滤过的溶液中,加入冷却的、酒精的体积分数为95的溶液50mL(使用冷却的酒精,对DNA的凝集效果较佳),并用玻璃棒搅拌,溶液中会出现含杂质较少的丝状物。
用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分。
这种丝状物的主要成分就是DNA,取两支20mL的试管,各加入氯化钠的物质的量浓度为0015molL的溶液5mL,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。
然后,向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。
混合均匀后,将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后,观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化,.DNA的鉴定,讨论:
答:
有丝状物的试管变成蓝色,另一试管还是原来颜色。
2.这一鉴定结果说明什么问题?
1.比较两个试管中溶液的颜色有什么不同?
答:
提取出的丝状物是DNA。
3.DNA的直径约为2010-10m,实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小?
答:
DNA分子直径只有2nm。
丝状物是多个DNA子聚在一起形成的。
DNA粗提取,柠檬离下一水滤二钠三水四滤粘五钠六水七酒析八胺沸浴鉴为蓝,DNA析出与鉴定过程中,会出现白色丝状物,用玻璃棒搅拌时为什么要沿一个方向轻轻搅拌DA、为了省力B、加快蛋白质的析出C、为了加大DNA的溶解度D、防止DNA结构被破坏在DNA析出与鉴定过程中加入酒精的目的是CA、溶解DNAB、除去DNA中所有杂质C、析出DNAD、稀释溶液降低浓度,在DNA粗提取过程中,先后两次向烧杯中加入蒸馏水的作用分别是BA稀释血液;冲洗样品B使血细胞破裂;降低NaCl浓度使DNA析出C使血细胞破裂;增大DNA溶解量D使血细胞破裂;提取含杂质较少的DNA,关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是BA充分溶解DNA的盐溶液是0.14mol/L的NaCl溶液B实验中提取较纯净的DNA利用了DNA不溶于酒精的特点C对最后提取出DNA用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热D实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同,关于DNA在NaCl溶液中的溶解度,下面的叙述哪一个是正确的()DA随着NaCl溶液浓度的增大,DNA在NaCl溶液中的溶解度也增大B随着NaCl溶液浓度的减小,DNA在NaCl溶液中的溶解度也减小CDNA在NaCl溶液中的溶解度与NaCl溶液的浓度无关D当NaCl溶液的浓度为0.14M时,DNA的溶解度最低,下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是DA洗涤剂能瓦解细胞膜,同时也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度B在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中,需要控制的变量是洗涤剂和植物细胞C常温下,DNA遇二苯胺被染成蓝色D将滤液放在6075的恒温水浴箱中保温1015分钟能去除滤液中的杂质,其原理是利用了DNA和蛋白质对高温耐受性的不同,下列有关“DNA粗提取与鉴定”实验原理的叙述正确的是(B)ADNA在NaCl溶液中的溶解度,随NaCl溶液浓度的降低而减小B利用DNA不溶于酒精的性质,可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNACDNA是大分子有机物,不溶于水而溶于所有有机溶剂D在沸水中,DNA遇二苯胺会出现紫色反应,下列DNA粗提取的实验操作中,经离心或过滤后取上清液或滤液的有()A在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸钠,混合均匀后离心B在盛有血细胞的塑料烧杯中加蒸馏水,快速搅拌后过滤C在2molL的氯化钠溶液中放入丝状物,轻轻搅拌后过滤D在溶有DNA的氯化钠溶液中缓缓加入蒸馏水,轻轻搅拌后过滤,BC,
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- dna 提取 鉴定 教学