DNA粗提取与鉴定实验PPT课件下载推荐.ppt
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,沸水浴,蓝色,现配现用,通常选用2mol/LNaCl溶液溶解细胞中的_,此时杂质易沉淀;
在0.14mol/LNaCl溶液中DNA溶解度_,可使_。
DNA,最小,DNA析出,1.利用DNA的溶解特性粗提取DNADNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。
考点一DNA提取与鉴定原理,DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。
利用这一原理,可将DNA与蛋白质进一步分离。
思考:
为提取到DNA,曾先后使用不同浓度的NaCl溶液,则在质量浓度为2mol/LNaCl溶液及0.14mol/LNaCl溶液中应取滤液,还是滤得的固体物?
在质量浓度为2mol/LNaCl溶液中DNA呈溶解状态,应取滤液,在质量浓度为0.14mol/LNaCl溶液中DNA溶解度极低,易析出,应取固体物。
2.利用DNA对酶、高温及洗涤剂的耐受性提取DNA(见下表),特别提醒
(1)甲基绿可将DNA染成绿色,且不需水浴加热。
二苯胺鉴定DNA属于颜色反应,需要水浴加热5min,可使DNA呈蓝色。
(2)二苯胺试剂要现配现用,否则二苯胺会变成浅蓝色,影响鉴定效果。
归纳DNA的粗提取原理及目的归纳,1.蛋白酶能将蛋白质水解而使染色质中的DNA分离出来。
下列药品可达到上述同一目的的是()A.蒸馏水B.NaCl溶液C.NaOH溶液D.盐酸2.(2013江苏)某同学用洋葱进行DNA粗提取和鉴定实验,操作错误的是()A.加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨B.用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的DNAC.加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌D.加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热,B,A,学以致用,3.关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是()A.充分溶解DNA的盐溶液是0.14mol/L的NaCl溶液B.实验中提取较纯净的DNA利用了DNA不溶于酒精的特点C.对最后提取出DNA用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热D.实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同4.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是()A.析出DNA时要缓慢地加蒸馏水,当析出黏稠物时即不再加水B.在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中,自变量是洗涤剂和食盐C.提取的DNA溶解后加入二苯胺试剂即可染成蓝色D.将含有DNA的滤液放在6075的恒温水浴箱中保温后过滤,能去除蛋白质杂质,A,D,1.实验材料的选取选用含量相对较高的生物组织。
2.破碎细胞,获取含DNA的滤液
(1)动物细胞的破碎以鸡血为例在鸡血细胞液中加入一定量的,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集即可。
二、DNA粗提取实验流程,DNA,蒸馏水,滤液,
(2)植物细胞的破碎以洋葱为例先将洋葱切碎,然后加入一定量_;
进行充分和_,过滤后收集研磨液。
搅拌,研磨,洗涤剂和食盐,思考:
用猪的血液与鸡的血液提取DNA哪个效果更好?
用鸡的血液;
因为鸡血细胞核DNA含量丰富,材料易得,而猪的红细胞无细胞核DNA含量少。
1.为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?
蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂),从而释放出DNA。
2.加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?
洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA的释放;
食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。
3.在处理植物组织时需要进行研磨,其目的是什么?
如果研磨不充分,会对实验结果产生什么影响?
破碎细胞壁,使DNA更多地溶解在NaCl溶液中,研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全,提取的DNA量少,影响实验结果,导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。
3.去除滤液中的杂质最初获得的DNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质,需要进一步提纯DNA。
具体做法如下:
方案一:
滤液NaCl(2mol/L)过滤除去杂质加入蒸馏水使NaCl溶液浓度为0.14mol/LDNA析出过滤得到过滤物放到2mol/LNaCl溶液中溶解DNANaCl溶解液方案二:
滤液嫩肉粉(木瓜蛋白酶)静置1015min过滤获得DNA滤液方案三:
滤液6075处理过滤获得DNA滤液方案一的原理是_;
方案二的原理是_;
方案三的原理是_。
DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同,蛋白酶分解蛋白质,不分解DNA,蛋白质和DNA的变性温度不同,思考:
1.过滤时应当选用滤纸还是尼龙布?
选用尼龙布进行过滤2.方案二与方案三的原理有什么不同?
方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白,从而使提取的DNA与蛋白质分开;
方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同,从而使蛋白质变性,与DNA分离。
3.为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质?
用高盐浓度的溶液溶解DNA,能除去在高盐中不能溶解的杂质;
用低盐浓度使DNA析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质。
因此,通过反复溶解与析出DNA,就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质,4.DNA的进一步提纯利用DNA不溶于冷却的这一原理,可从溶液中析出较纯净的DNA,此时DNA的状态为。
5.DNA的鉴定将呈丝状物的DNA溶解于5mL质量浓度为溶液中,再加入4mL的试剂,加热5min,冷却后观察溶液的颜色。
注意要同时设置实验。
酒精溶液,白色丝状物,2mol/L的NaCl,二苯胺,沸水,对照,1.实验材料的选取本实验用鸡血细胞作实验材料有两个原因:
一是因为鸡血细胞的核DNA含量丰富,材料易得;
二是鸡血细胞极易吸水涨破,而用动物肝脏细胞等作实验材料常常需要匀浆和离心,对设备要求较高,操作繁琐,历时较长。
考点二实验设计,
(1)不同生物的组织中DNA含量不同在选取材料时,应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。
(2)材料不同所采用的提取方法不同植物组织:
取材研磨过滤沉淀。
在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤剂和食盐(洗涤剂能够溶解细胞膜),充分搅拌和研磨,过滤后收集研磨液鸡血:
制备鸡血细胞液提取核DNA溶解细胞核内DNA析出并滤取DNADNA再溶解提取较纯净的DNA。
2.提取DNA的具体步骤,
(2)溶解核内DNA:
滤液质量浓度为2mol/LNaCl溶液(3)过滤:
除去不溶的杂质,得滤液(4)析出含DNA的黏稠物:
向滤液中缓缓加入蒸馏水,并用玻璃棒轻轻沿一个方向不停地搅拌,直到丝状物不再增加时,停止加水(此时NaCl质量浓度约为0.14mol/L),(5)过滤:
用多层纱布过滤,含DNA的黏稠物被留在纱布上(6)DNA的黏稠物再溶解:
将其溶解在质量浓度为2mol/L的NaCl溶液中(7)过滤:
用两层纱布滤得含DNA的滤液(8)对DNA进一步提纯:
向滤液中加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的酒精,静置23min,溶液中会出现白色丝状物,即粗提取的DNA,(9)DNA的鉴定,共“两次蒸馏水,三次过滤,两次析出,六次搅拌”,讨论:
两次蒸馏水第一次:
细胞吸水胀破第二次:
使DNA黏稠物析出,此实验过程中有几次使用蒸馏水?
几次过滤,几次析出,几次搅拌?
分别在哪一步?
三次过滤第一次:
DNA存在于滤液里第一步第二次:
DNA被留在纱布上第四步第三次:
DNA存在于滤液里第六步,过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关,第二次要用其滤出的黏稠物有关,所以要使用多层纱布,第一次和第三次均要用其滤液,使用的纱布为12层,两次析出,第一次:
用0.14molL的NaCI溶液含杂质多,第三步,第二次:
用冷却的95的酒精,第七步,六次搅拌:
第一、二、三、五、七步,其中除第八步外,其余均要朝一个方向搅拌,在第三、五步搅动还要轻缓,玻璃棒不要直插烧杯底部,这样才能保证得到完整的DNA,讨论:
实验结果不明显,可能是什么原因?
1.材料未充分研磨成糊状2.加入酒精后振动或搅拌时过猛,DNA被破坏3.二苯胺配制时间过长,最好现配现用,否则二苯胺会变成浅蓝色4.析出含DNA的黏稠物中,蒸馏水不能一次快速倒入,否则会影响结果5.实验中多个步骤要用玻璃棒进行搅拌,不同步骤中用法不同,做实验时如果不注意,会影响实验结果,特别提醒
(1)做该实验时,不能用猪血代替鸡血,因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核,不能提取DNA。
(2)制备鸡血细胞液时,要注意向鸡血中加柠檬酸钠,防止血液凝固,静置后上层是血浆,下层为所需要的血细胞。
(3)涨破细胞的方法:
向血细胞中加入蒸馏水,血细胞溶液的浓度大于蒸馏水的浓度,从而使血细胞大量吸水而涨破。
不能用生理盐水,因为血细胞溶液的浓度与生理盐水的浓度相当,所以血细胞在生理盐水中不能吸收水分。
(4)两次加入蒸馏水,第一次是为了使血细胞吸水涨破,释放出核内的DNA;
第二次是为了降低氯化钠的浓度,有利于DNA的析出。
(5)两次析出DNA的方法:
第一次是加入蒸馏水,降低氯化钠的浓度,促使DNA析出;
第二次是加入冷酒精,因为DNA不溶于酒精溶液。
(6)在DNA粗提取中三次过滤时,DNA存在的部分及所用的纱布层数不同:
第一次过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液,是为了得到含DNA的滤液,使用的纱布为12层。
第二次过滤含有黏稠物的NaCl溶液,是为了得到从低浓度的NaCl溶液中析出的附着在纱布上的含DNA的黏稠物,所用的纱布为多层。
第三次过滤溶解有DNA的NaCl溶液,目的是为了使DNA再溶解,所以只要用两层纱布即可。
1.(2012江苏)下列关于“DNA粗提取与鉴定实验”的叙述,正确的是()A.洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度B.将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝C.常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNA的提取D.用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNA获得量减少2.(2011江苏)在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中,下列相关叙述正确的是()A.用蒸馏水将NaCl溶液质量浓度调至0.14mol/L,滤去析出物B.调节NaCl溶液质量浓度或加入木瓜蛋白酶,都可以去除部分杂质C.将丝状物溶解在质量浓度为2mol/LNaCl溶液中,加入二苯胺试剂即呈蓝色D.用菜花替代鸡血作为实验材料,其实验操作步骤相同,C,课堂巩固,B,3.下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的相关操作。
这些操作目的正确的是(),A.是洗涤红细胞,去除血细胞表面的杂质B.是溶解DNA,去除不溶于酒精的杂质C.是溶解DNA,去除不溶于质量浓度为2mol/LNaCl溶液的杂质D.是稀释NaCl溶液,去除不溶于低浓度NaCl溶液的杂质,C,4.下图为“DNA的粗提取与鉴定”的实验装置,请回答下列相关的问题。
(1)实验材料选用鸡血细胞液,而不用鸡全血,主要原因是鸡血细胞液中有较高含量的_。
(2)在图A所示的实验步骤中加蒸馏水的目的是_,通过图B所示的步骤取得滤液,再在溶液中加入质量浓度为2mol/L的NaCl溶液的目的是_(3)图C所示实验步骤中加蒸馏水的目的是_。
DNA,使血细胞破裂,使滤液中的DNA溶于浓NaCl溶液,使DNA析出,5.下图表示以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取与鉴定的操作程序,请分析回答下列问题:
(1)步骤一中,向鸡血细胞液中加入并搅拌,可使鸡血细胞破裂。
(2)步骤二中,过滤后收集含有DNA的。
蒸馏水,滤液,(3)步骤三、四的操作原理是_;
步骤四中,通过向溶液中加入调节NaCl溶液的物质的量浓度至mol/L时,DNA将会析出,过滤去除溶液中的杂质。
(4)步骤七:
向步骤六过滤后的中加入等体积的冷却的,静置23min,溶液中会出现色丝状物,这就是粗提取的DNA。
(5)步骤七:
DNA遇试剂,沸水浴5min,冷却后,溶液呈色。
DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同,通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质,蒸馏水,0.14,滤液,酒精,白,二苯胺,蓝,
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