微生物作业指导书 2.docx
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微生物作业指导书 2.docx
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微生物作业指导书2
潍坊安食捷检测服务有限公司作业指导书
编号:
ASJ/ZY5041-2014
主题:
电位滴定与永停滴定标准操作规程
第1页共1页
题目:
A版第0次修订
起草:
王建玲
审核:
韩静静
批准:
刘希东
2014-4-8实施
一目的:
规定电位滴定与永停滴定的标准操作规程,保证分析结果的准确性。
二引用标准:
《中华人民共和国兽药典》(2010年版一部附录)。
三适用范围:
适用于检品采用永停滴定法或电位滴定法的质量检测。
四责任者:
检验员对本标准的实施负责。
五正文:
1误差要求
名称
法定标准
原料
相对偏差≤0.3%
半成品、成品
相对偏差≤0.8%
2仪器与用具
2.1电位滴定法与永停滴定法是容量分析中用以确定终点、选择核对指示剂变色域的方法。
选用适当的电极系统可以作氧化还原法、中和法(水溶液或非水溶液)、沉淀法、重氮化法或水分测定法等的终点指示。
电位滴定法适用2支不同的电极。
1支为指示电极,其电极电势随溶液中被分析成分的离子浓度的变化而变化;另1支为参比电极,其电极电势固定不变。
在到达滴定终点时,因被分析成分的离子浓度急剧变化而引起指示电极的电势突减或突增,此转折点称为突跃点。
2.2永停滴定法采用2支相同的铂电极,当在电极间加一低电压(例如50mV)时,若电极在溶液中极化,则在未到滴定终点时,仅有很小或无电流通过;但当到达终点时,滴定液略有过剩,使不成电极去极化,溶液中即有电流通过,电流计指
针突然偏转,不再回复。
反之,若电极由去极化变为极化,则电流计指针从有偏转回到零点,也不再变动。
2.3仪器装置电位滴定可用电位滴定仪、酸度计或电位差计,永停滴定可用永停滴定仪或按图示装置。
电流计的灵敏度除另有规定外,测定水分时用10-6A/格,重氮化法用10-9A/格。
所用电极可按下表选择。
方法
电极系统
说明
水溶液氧化还原法
铂-饱和甘汞
铂电极用加有少量三氯化铁的硝酸或用铬酸清洁液浸洗
水溶液中和法
玻璃-饱和甘汞
非水溶液中和法
玻璃-饱和甘汞
饱和甘汞电极套管内装氯化钾的饱和无水甲醇溶液。
玻璃电极用过后应即清洗并浸在水中保存
水溶液银量法
银-玻璃
银电析可用稀硝酸迅速浸洗
银-硝酸钾盐桥-饱和甘汞
—C≡CH中氢置换法
玻璃-硝酸钾盐桥-饱和甘汞
硝酸汞电位滴定法
铂-汞-硫酸亚汞
铂电极可用10%硫代硫酸钠溶液浸泡后用水清洗。
汞-硫酸亚汞电极可用稀硝酸浸泡后用水清洗
永停法
铂-铂
铂电极用加有少量三氯化铁的硝酸或用铬酸清洁液浸洗
3操作方法:
3.1电位滴定法将盛有供试品溶液的烧杯置电磁搅拌器上,浸入电极,搅拌,并自滴定管中分次滴加滴定液;开始时可每次加入较多的量,搅拌,记录电位;至将近终点前,则应每次加入少量,搅拌,记录电位;至突跃点已过,仍应继续滴加几次滴定液,并记录电位。
滴定终点的确定用坐标纸以电位(E)为纵坐标,以滴定液体积(V)为横坐标,绘制E-V曲线,以此曲线的徒然上升或下降部分的中心为滴定终点。
或以ΔE/ΔV(即相邻两次的电位差和加入滴定液的体积差之比)为纵坐标,以滴定液体积(V)为横坐标,绘制(ΔE/ΔV)-V曲线,与ΔE/ΔV的极大值对应的体积即为滴定终点。
也可采用二阶导数确定终点。
根据求得的ΔE/ΔV计算,计算相邻数值间的差值,即Δ2E/ΔV2,绘制(Δ2E/ΔV2)-V曲线,曲线过零时的体积即为滴定终点。
如系供指示剂变色域的选择核对,滴定前加入指示剂,观察终点前至终点后的颜色变化,以选定该品种终点时的指示剂颜色。
3.2永停滴定法用作重氮化法的终点指示时,调节R1使加于电极上的电压约为50mV。
取供试品适量,精密称定,置烧杯中,除另有规定外,可加水40ml与盐酸溶液(1→2)15ml,而后置电磁搅拌器上,搅拌使溶解,再加溴化钾2g,插入铂-铂电极后,将滴定管的尖端插入液面上约2/3处,用亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L或0.05mol/L)迅速滴定,随滴随搅拌,至近终点时,将滴定管的尖端提出液面,用少量水淋洗尖端,洗液并入溶液中,继续缓缓滴定,到电流计指针突然偏转,并不再回复,即为滴定终点。
用作水分测定的终点指示时,可调节R1使电流计的初始电流为5~10μA,待滴定到电流突增至50~150μA,并持续数分钟不退回,即为滴定终点。
潍坊安食捷检测服务有限公司作业指导书
编号:
ASJ/ZY5042-2014
主题:
标准操作规程
第1页共1页
题目:
抗生素微生物检定的标准操作规程
A版第0次修订
起草:
王建玲
审核:
韩静静
批准:
刘希东
2014-4-8实施
一目的:
规定抗生素微生物检定的标准操作规程,保证分析结果的准确性。
二引用标准:
《中华人民共和国兽药典》(2010年版一部附录)。
三适用范围:
适用于公司检品采用抗生素微生物检定法的质量测定。
四责任者:
检验员
五正文:
1原理
本法系是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用,采用量反应平行线原理的设计,比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小,以测定供试品效价的一种方法。
标准品的品种、分子式及理论计算值见表2。
2仪器、用具及试验条件
2.1操作室光线明亮,操作室应分为两部分,彼此分开;一部分为一般操作间,一部分为半无菌操作间。
半无菌操作间,设有紫外线灯达到空气消毒。
应装有空调设备,控制室温在20~25℃。
室内注意抗生素的污染。
2.2双碟为硬质玻璃培养皿,内径90mm,高16~17mm,碟底厚薄均匀水平,无气泡。
用过的双碟经高压灭菌倒出培养基后,置玻璃仪器专用洗液或其他清洗液中浸泡过夜,冲洗,沥干,置150~160℃干热灭菌2小时或高压121℃蒸气灭菌30分钟,备用。
2.3陶瓦盖内径约103mm,外径108mm
2.4钢管内径(6.0±0.1)mm,外径(7.8±0.1)mm或(8.0±0.1)mm,高(10.0±0.1)mm,钢管内外壁及两端面光洁平坦,管壁厚薄一致.每次使用后应置1:
1000新洁尔灭溶液内,浸泡2小时以上,进行灭菌后再洗涤,洗完后置带盖的容器内在150~160℃干热灭菌2小时,备用。
2.5钢管放置器置半无菌操作间内,有6孔和4孔两种,钢管下落时应垂直平稳、位置正确,双碟升降平稳.应保持清洁,防止抗生素污染。
并定期干烤灭菌。
潍坊安食捷检测服务有限公司作业指导书
编号:
ASJ/ZY5042-2014
主题:
标准操作规程
第1页共1页
题目:
抗生素微生物检定的标准操作规程
A版第0次修订
起草:
王建玲
审核:
韩静静
批准:
刘希东
2014-4-8实施
2.6恒温培养箱隔水式为宜,35~37℃及24~16℃,隔板上可备有带孔的玻璃试垫。
2.7灭菌刻度吸管吸取菌液及培养基用。
用后应立即置5%石炭酸或1:
1000新洁尔灭溶液中消毒后再按玻璃器常规洗涤。
置适宜容器中120℃以上干热灭菌或121℃蒸气灭菌30分钟,烘干备用。
2.8玻璃容器包括滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶等,经标定并且长次使用前用清洁液浸泡,水冲洗,蒸馏水冲洗3次。
2.9具塞称量瓶。
2.10毛细滴管用玻璃管拉制,管口光滑。
在120℃干燥3小时后备用。
2.11CHB-1抗生素效价测量仪
2.12超净工作台用于菌种的接种或传代。
放在洁净工作室内。
3试液
3.1灭菌缓冲液体制备缓冲液的试剂应为分析纯,配制后的缓冲液应澄明,分装于玻璃容器内,经115℃蒸气灭菌30分钟,备用。
3.1.1磷酸盐缓冲液(pH6.0)取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g,加水使成1000ml,滤过,分装,灭菌。
3.1.2磷酸盐缓冲液(pH7.0)取磷酸氢二钾9.39g与磷酸二氢钾3.5g,加水使成1000ml,滤过,分装,灭菌。
3.1.3磷酸盐缓冲液(pH7.8)取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g,加水使成1000ml,滤过,分装,灭菌。
3.1.4磷酸盐缓冲液(pH7.8)取磷酸氢二钾9.8g与磷酸二氢钾0.2g,加水使成1000ml,滤过,分装,灭菌。
4培养基按培养基说明书进行配制,灭菌后备用。
5菌悬液的制备
5.1枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)悬液取枯草芽孢杆菌(63501)的营养琼脂斜面培养物,接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中在35~37℃培养7日,用革兰氏染色法涂片镜检,应有芽孢85%以上。
用灭菌水将芽孢洗下,在65℃加热30分钟,备用。
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编号:
ASJ/ZY5042-2014
主题:
标准操作规程
第1页共1页
题目:
抗生素微生物检定的标准操作规程
A版第0次修订
起草:
王建玲
审核:
韩静静
批准:
刘希东
2014-4-8实施
5.2短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)悬液取短小芽孢杆菌(63202)的营养琼脂斜面培养物,照上述方法制备。
5.3金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)悬液取金黄色葡萄球菌(26003)的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,在35~37℃培养20~00小时。
临用时,用灭菌水或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下,备用。
5.4藤黄微球菌(Micrococcusluteus)悬液取藤黄微球菌(28001)的营养琼
脂斜面培养物,接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中,在26~27℃培养24小时,或采用适当方法制备的菌斜面,用培养基Ⅲ或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下,备用。
5.5大肠杆菌(Escherichiacoli)悬液取大肠杆菌(44102)或(44103)的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,在35~37℃培养20~22小时。
临用前,用灭菌水将菌苔洗下,备用。
6标准品溶液的制备标准品的使用和保存,应照标准品说明书的规定。
临用时照表1的规定进行稀释。
7供试品溶液的制备精密称(或量)取供试品适量,用各药品项下规定的溶剂溶解后,再按估计效价或标示量照表1的规定稀释至与标准品相数的浓度。
8双碟的制备取双碟分别注入加热融化的培养基(照表1)20ml,使在碟底内均匀摊布,放置水平台上使凝固,作为底层。
另取培养基适量加热融化后,放冷至48~50℃(芽孢可至60℃),加入规定的试验菌悬液适量,摇匀,在每1双碟中分别加入5ml,使在底层上均匀摊布,作为底层。
放置水平台上冷却后,在每1双碟中以等距离均匀放置不锈钢小钢管4个(二剂量法)或6个(三剂量法),用陶瓦盖覆盖备用。
9检定法
9.1二剂量法取照上述方法制备的双碟不和少于4个,在每1双碟中对角的2个不锈钢管中分别滴装高浓度及低浓度的标准品溶液,其余两个小管中分别滴装相应的高低两种浓度的供试品溶液;高、低浓度的剂距为2:
1或4:
1,在规定条件下培养后,
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标准操作规程
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抗生素微生物检定的标准操作规程
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王建玲
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2014-4-8实施
用抗生素效价测量仪测量各个抑菌圈的直径或面积,即可。
9.2三剂量法取照上述方法制备的双碟不和少于6个,在每1双碟中间隔的3个不锈钢管中分别滴装高浓度(S3)、中浓度(S2)及低浓度(S1)的标准品溶液,其余3个小管中分别滴装相应的高、中、低三种浓度的供试品溶液;三种浓度的剂距为1:
0.8,在规定条件下培养后,用抗生素效价测量仪测量各个抑菌圈的直径或面积,即可。
本法计算所得效价,如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时,则应调整其估计效价,予以重试。
除另有规定外,本法中试验菌为藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌的可信限率不得大于8%;试验菌为枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌及大肠杆菌的可信限率不得大于7%。
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ASJ/ZY5042-2014
主题:
标准操作规程
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题目:
抗生素微生物检定的标准操作规程
A版第0次修订
起草:
王建玲
审核:
韩静静
批准:
刘希东
2014-4-8实施
表1抗生素微生物检定试验设计表
抗生素类别
试验菌
培养基
灭菌缓冲
液pH值
抗生素浓度范围单位/ml
培养条件
编号
pH值
温度
℃
时间
小时
链霉素
卡那霉素
吉他霉素
盐霉素
庆大霉素
红霉素
新霉素
青霉素②
四环素
土霉素
金霉素
多西环素
杆菌肽
林可霉素
泰乐菌素
大观霉素
枯草芽孢杆菌(63501)
枯草芽孢杆菌(63501)
枯草芽孢杆菌(63501)
短小芽孢杆菌(63202)
短小芽孢杆菌(63202)
短小芽孢杆菌(63202金黄色葡萄球菌(26003)
金黄色葡萄球菌(26003)
藤黄微球菌(28001)
藤黄微球菌(28001)
藤黄微球菌(28001)藤黄微球菌(28001)
藤黄微球菌(28001)
藤黄微球菌(28001)
藤黄微球菌(28001)
大肠杆菌(44102或44103)
Ⅰ
Ⅰ
Ⅵ
Ⅳ
Ⅰ
Ⅰ
Ⅱ
Ⅱ
Ⅱ
Ⅱ
Ⅱ
Ⅱ
Ⅱ
Ⅱ
Ⅱ
Ⅴ
7.8~8.0
7.8~8.0
7.8~8.0
6.5~6.6
7.8~8.0
7.8~8.0
7.8~8.0
6.5~6.6
6.5~6.6
6.5~6.6
6.5~6.6
6.5~6.6
6.5~6.6
7.8~8.0
7.8~8.0
7.8~8.0
7.8
7.8
7.8
6.0
7.8
7.8
7.8①
6.0
6.0
6.0
6.0
6.0
6.0
7.8
7.8
8.0
0.6~1.6
0.9~4.5
10.0~40.0
10.0~40.0
2.0~12.0
5.0~20.0
4.0~25.0
0.5~2.0
10.0~40.0
10.0~40.0
4.0~25.0
4.0~25.0
0.5~12.0
2.0~12.0
2.5~10.0
50.0~300
35~37
35~37
35~37
35~37
35~37
35~37
35~37
35~37
35~37
35~37
35~37
35~37
35~37
35~37
35~37
35~37
14~16
14~16
14~16
14~16
14~16
14~16
14~16
14~16
16~18
16~18
16~18
16~18
16~18
16~18
16~18
16~18
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标准操作规程
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题目:
抗生素微生物检定的标准操作规程
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王建玲
审核:
韩静静
批准:
刘希东
2014-4-8实施
表2抗生素标准品品种与理论值
标准品
品种
标准品分子式或品名
理论计算值
μg/㎎
标准品
品种
标准品分子式或品名
理论计算值
μg/㎎
有链霉素
(C21H39N7012)2·3H2O
C18H36N4O11·H2SO4
硫酸新霉素
硫酸庆大霉素
C22H24N2O8·HCl
C22H24N209·2H2O
C22H23ClN2O8·HCl
C18H34N206S·HCl·H2O
798
831.6
1000
927
1000
881.7
多西环素
杆菌肽
红霉素
盐霉素
泰乐菌素
大观霉素
青霉素
吉他霉素
C22H24N208HCl·C2H5OH·H2O
杆菌肽锌
C37H67N013
C42H69011Na
C46H77N017
C14H24N207·2HCl·5H2O
C16H17KN204S
吉他霉素
866.5
1000
1000
1000
670.9
1589
卡那霉素
新霉素
庆大霉素
四环素
土霉素
金霉素
林可霉素
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ASJ/ZY5043-2014
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标准操作规程
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题目:
水分测定标准操作规程
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起草:
王建玲
审核:
韩静静
批准:
刘希东
2014-4-8实施
一目的:
规定水分测定的标准操作规程,保证分析结果的准确性。
二引用标准:
《中华人民共和国兽药典》(2010年版一部附录)。
三适用范围:
适用于公司检品采用水分测定法的质量检查。
四责任者:
检验员。
五正文:
1试剂:
aI2(AR级)bSO2(AR级)cC5H5N(AR级)d无水CH3O4(AR级)
2仪器与用具:
a附滴定装置的棕色瓶b微量水分测定仪
3操作步骤:
3.1原理:
本法是根据碘和二氧化硫在吡啶和甲醇溶液中能与水起定量反应的原理以测定水分。
所用仪器应干燥,并能避免空气中水分的侵入;测定操作宜在干燥处进行。
本法即为费休氏法中的容量滴定法。
3.2费休氏试液的制备与标定:
3.2.1配制称取碘(置硫酸干燥器内48小时以上)110g,置干燥的具塞烧瓶中,加无水吡啶160ml,注意冷却振摇至碘全部溶解后,加无水甲醇300ml,称定重量,将烧瓶置冰浴中冷却,通入干燥的二氧化硫至重量增加72g,再加无水甲醇稀释成1000ml,密塞,摇匀,在暗处放置24小时。
本液应遮光,密封,置阴凉干燥处保存。
临用前再标定浓度。
3.2.2标定用水分测定仪直接标定。
或取干燥的具塞玻瓶,精密称入重蒸馏水约30mg,除另有规定外加无水甲醇2-5ml,用本液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色,或用永
停滴定法(附录ⅧA)指示终点;加作空白试验,按下式计算。
F=
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ASJ/ZY5043-2014
主题:
标准操作规程
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题目:
水分测定标准操作规程
A版第0次修订
起草:
王建玲
审核:
韩静静
批准:
刘希东
2014-4-8实施
式中:
F为每1ml费休氏试液相当于水的重量,mg;
W为称取重蒸镏水的重量,mg;
A为滴定所消耗费休氏试液的容积,ml;
B为空白所消耗费休氏试液的容积,ml。
3.3测定法精密称取供试品适量(约消耗费休氏试液1~5ml),除另有规定外,溶剂为甲醇,用水分测定仪直接测定。
或将供试品置干燥的具塞玻瓶中,加溶剂2~5ml,在不断振摇(或搅拌)下用费休氏试液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色,或用永停滴定法(附录41页)指示终点;另作空白试验,按下式计算。
供试品中水分含量(%)=
×100%
式中:
A为供试品所消耗费休氏试液的容积,ml;
B为空白所消耗费休氏试液的容积,ml;
F为每1ml费休氏试液相当于水的重量,mg;
W为供试品的重量,mg。
4注意事项
4.1配制时所用试剂的纯度,特别是含水量应严格控制在0.1%以下,如试剂水分超过规定,可事先用干燥的分子筛将其水分除掉后再用。
本试液接触的一切仪器均应清洁干燥,标定或测定时宜在干燥环境中进行。
4.2配制本试液时必须配戴眼镜等保护用具。
4.3本试液不稳定,随放置时间增加浓度逐渐降低,因为碘、二氧化硫、吡啶、甲醇四种组分在一起容易发生副反应。
当F值低至3.0mg/ml以下时,滴定终点不敏锐,不宜再用。
F值应在4.0mg/ml以上。
4.4某些固体供试品需先溶于无水甲醇(或规定溶剂)2-5ml中,再依法测定。
另作空白试验校正。
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ASJ/ZY5044-2014
主题:
标准操作规程
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题目:
澄清度检查标准操作规程
A版第0次修订
起草:
王建玲
审核:
韩静静
批准:
刘希东
2014-4-8实施
一目的:
规定澄清度检查的标准操作规程,保证分析结果的准确性。
二引用标准:
《中华人民共和国兽药典》(2010年版一部附录)。
三适用范围:
适用于公司检品采用澄清度检查法的质量测定。
四责任者:
检验员。
五正文:
1原理
本法系在室温条件下,将用水稀释至一定浓度的供试品溶液与等量的浊度标准液分别置于配对的比浊用玻璃管(内径15~16㎜,平底,具塞,以无色、透明、中性硬质玻璃制成)中,在浊度标准液制备后5分钟,在暗室内垂直同置于伞棚灯下,照度为1000lx,从水平方向观察、比较,用以检查溶液的澄清度或其浑浊程度。
除另有规定外,供试品溶解后应立即检视。
2浊度标准贮备液的制备
称取于105℃干燥至恒重的硫酸肼1.00g,置100ml量瓶中,加水适量使溶解,必要时可在40℃的水浴中温热溶解,并用水稀释至刻度,摇匀,放置4~6小时;取此溶液与等容量的10%乌洛托品溶液混合,摇匀,于25℃避光静置24小时,即得。
本液置冷处避光保存,可在两个月内使用,用前摇匀。
3浊度标准原液的制备
取浊度标准贮备液15.0ml,置1000ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,取适量,置1㎝吸收池中,用分光光度计在550nm的波长处测定,其吸收度应在0.12~0.15范围内。
本液应在48小时内使用,用前摇匀。
4浊度标准液的制备
取浊度标准原液与水,按下表配制,即得。
本液应临用时制备,使用前充分摇匀。
具体情况见下表:
级号
0.5
1
2
3
4
浊度标准原液/ml
2.50
5.0
10.0
30.0
50.0
水/ml
97.50
95.0
90.0
70.0
50.0
潍坊安食捷检测服务有限公司作业指导书
编号:
ASJ/ZY5045-2014
主题:
标准操作规程
第1页共1页
题目:
最低装量检查标准操作规程
A版第0次修订
起草:
王建玲
审核:
韩静静
批准:
刘希东
2014-4-8实施
一目的:
规定最低装量检查的标准操作规程,保证分析结果的准确性。
二引用标准:
《中华人民共和国兽药典》(2010年版一部附录)。
三适用范围:
适用于本公司检品采用最低装量检查法的质量检测。
四责任者:
检验员。
五正文:
本法适用于固体、半固体和液体制剂。
除制剂通则中规定检查重(装)量差异与装量外,其装量限度应符合下列规定。
标示装量
固体、半固体、液体
粘稠液体(容量法)
平均装量
每个容器装量
平均装量
每个容器装量
20g(ml)以下
不少于标示装量
不少于标示装量的93%
不少于标示装量
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- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
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- 微生物作业指导书 微生物 作业 指导书