苯酚硫酸法测定胞外多糖含量标准作业指导书.docx
- 文档编号:9914249
- 上传时间:2023-05-22
- 格式:DOCX
- 页数:13
- 大小:37.54KB
苯酚硫酸法测定胞外多糖含量标准作业指导书.docx
《苯酚硫酸法测定胞外多糖含量标准作业指导书.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《苯酚硫酸法测定胞外多糖含量标准作业指导书.docx(13页珍藏版)》请在冰点文库上搜索。
苯酚硫酸法测定胞外多糖含量标准作业指导书
》
产品质量胞外多糖的测定
1目的
依据有关方法和标准,建立公司测量土壤中胞外多糖的标准方法。
2适用范围
本文件规定了测定胞外多糖含量的苯酚-硫酸法。
本实验采用苯酚-硫酸法,该实原理是:
浓硫酸水合产生的高温快速分解多糖产生单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,生成的糖醛衍生物又与苯酚反应生成橙黄色化合物,再以比色法测定
本标准适用于蓝藻门、绿藻等藻类胞外多糖的测定。
3参考文件
|
无
4定义
胞外多糖(Exopolysaccharides,EPS):
是一些特殊微生物在生长代谢过程中分泌到细胞壁外、易与菌体分离、分泌到环境中的水溶性多糖,属于微生物的次级代谢产物。
5职责
测试工程师依照国家标准的更新、或者方法的改良,不定期更新本文件。
测试工程师应当对测试人员进行培训、考核、上岗认定和定期技能查验,对于技能不达标的人员予以相关处理。
测试人员应当严格依照本文件方法测定相关样品的胞外多糖含量,保证安全的情况下,认真仔细地完成实验。
6程序
!
试剂和材料
表1准备试剂和材料清单
序号
名称
等级
密度要求
1
待测藻液
*
/
/
2
蒸馏水
高纯度去离子水
/
3
葡萄糖
/
基准物质
4
浓硫酸
优级纯
ρ=ml
5
苯酚
%
分析纯
表2混合材料和溶液配置清单
序号
名称
浓度
配置方法
保存方法
…
1
葡萄糖标准溶液
ρ=40μg/L
(1)将葡萄糖置干燥箱于105℃干燥至恒重;
(2)然后称取该葡萄糖mg,溶于水,并定容于500ml的容量瓶;即为40μg/mL葡萄糖标准溶液。
贮于棕色试剂瓶中保存
2
苯酚溶液
·
80%
取重蒸后的苯酚(分析纯)80g,加20g水溶解
置于冰箱中避光储存
仪器设备
表3仪器设备清单
序号
仪器设备
要求
。
备注
1
真空冷冻干燥机
2
水浴锅
"
3
离心机
配50ml/10ml离心管
4
烘箱
温度可达105℃,分辨率℃。
>
5
干燥器
6
分析天平
配具塞称量瓶
%
7
移液枪
8
比色管
10ml/20ml
>
9
酸式滴定管
最小刻度≤
25ml或50ml
10
分光光度计
·
11
通风橱
12
漩涡振荡器
!
操作流程表
表4胞外多糖的测定操作流程表
图示
◇检查/检验□操作顺序→过程走动路线+安全▼CC/PC▽SC/PC
标记
—
步骤
步骤名称
特性分级
工作时间
走动时间
工作流程图
□
1
,
试验
准备
SC/PC
10min
10min
□
2
多糖提取
CC/PC
&
1min
□
3
配置葡萄糖标线
CC/PC
2min
【
□
4
多糖含量测定
SC/PC
30min
□
5
计算
10min
~
□
6
填写试验报告
1day
安全要点:
(1)…
(2)本方法所使用的浓硫酸具有一定的腐蚀性,操作时应尽量避免直接接触;
(3)苯酚具有一定的毒性,可通过呼吸道、皮肤伤害试验人员,因此尤其需要注意在通风橱配置溶液,并佩戴好必要的口罩等防护措施。
反应计划:
(1)每批样品应进行10%的平行样品测定,当样品在10个样品以下时,平行样品不少于1个。
平行双样测量结果的相对偏差应在15%以内。
(2)配置苯酚溶液时,苯酚难以从瓶中取出固体时,可使用温水浸泡。
(3)由于苯酚没有重蒸纯度不足,或者比色管没有经过充分摇匀,经水浴后的具塞比色管内有时候仍存在分层现象,导致同一比色管内的溶液前后测试数值不一。
因此,在测试标准曲线吸光度之前,采用旋涡振荡器摇匀后测试会有较好的效果。
具体操作流程
…
表5胞外多糖的测定具体操作
步骤
图示
步骤名称
操作要点
需求试剂
仪器设备
.
暂无图片
安全准备
(1)在进行危险操作之前,应当佩戴护目镜、口罩、手套、防护服;
暂无图片
溶液的配置
(1)'
(2)按表2配置葡萄糖标准溶液,待用;
(3)按表2配置80%苯酚溶液,待用;临用时配置5%苯酚溶液(80%苯酚溶液:
水=:
)
见表2
暂无图片
制备冻干藻粉
(1)取待测藻液若干,摇匀后倾倒至灭菌平板(或更大的器皿中),使用保鲜膜缠绕密闭封口,确保保鲜膜绷直不与藻液直接接触。
然后使用镊子或其他尖锐物品,洗净后沿绷直保鲜膜平面扎出若干小孔。
(2)~
(3)将平板转移至冰箱中,常压低温冰冻至冰块;
(4)将冻成冰块的藻液转移至真空冷冻干燥机,按操作指示操作。
当一次性冻干藻液较多时,每12h要清理一次冰块。
1灭菌平板
2保鲜膜
3镊子
4冰箱
5真空冷冻干燥机
、
暂无图片
胞外多糖的提取
(1)取m毫克(通常取100mg-200mg)冻干的样品,加蒸馏水(1:
100)在98℃提取4h,5000r/min离心10min,取上清液用于分析(此处记为V1);向离心后沉淀中加水4ml,在98℃提取1h,5000r/min离心10min,取上清液用于分析(此处记为V2)。
(2)合并V1+V2,转移至25ml容量瓶,加水至标线。
1冻干样品
1离心机
2水浴锅
…
3容量瓶
3
暂无图片
配置葡萄糖标线
(1)用移液枪分别吸取、、、、、、、、、的40μg/mL葡萄糖标准溶液放入具塞试管内,再各适量蒸馏水补足溶液至L。
(2)使用漩涡振荡器将各管溶液摇匀,然后向每管依次加入6%苯酚溶液和浓硫酸(必须使用移液管),漩涡振荡混匀于90℃水浴加热20min。
以第一管为空白对照,于490nm处测定吸值,建立葡萄糖标准曲线。
1葡萄糖标准溶液
2苯酚溶液
|
3浓硫酸
1移液枪
2漩涡振荡器
3分光光度计
暂无图片
多糖含量测定
从25ml容量瓶中取样品溶液,加蒸馏水补足至L,摇匀,依次加入6%苯酚溶液和浓硫酸(必须使用移液管),漩涡振荡混匀后于90℃水浴加热20min,于490nm处测定吸光值,得到样品浓度。
|
1葡萄糖标准溶液
2苯酚溶液
3浓硫酸
1移液枪
2漩涡振荡器
3分光光度计
暂无图片
空白试验
以葡萄糖标准曲线的吸光值作为空白试验的参考值。
5
暂无图片
计算
多糖含量(mg/g)计算公式按下列公式计算:
式中:
EPS——为多糖含量,单位为mg/g;表示每1g冻干藻样中含有多糖的质量;
Ci——表示各藻类的测试浓度,单位为μg/mL;
2ml——表示在测试样品时,比色管加蒸馏水至2ml;ci*2ml表示,在比色管中的溶质质量;
25ml——表示为采用25ml容量瓶进行定容;
——表示从25ml容量瓶中取出进行样品测试;
m——表示冻干的样品,通常取g;
1000——表示由换算为单位由μg换算为mg。
6
暂无图片
填写试验报告
(1)按照附件1《实验室测试报告》格式,填写数据和计算结果。
(2)总结试验结论,出具完整报告。
实验室测试报告
7附件
附件1《实验室测试报告》
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 苯酚 硫酸 测定 多糖 含量 标准 作业 指导书