植物组织培养实验指导书.docx
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植物组织培养实验指导书
《植物组织培养实验指导》
《植物组织培养实验指导》的相关说明
一、本指导用于《植物组织培养概论》课程的实验教学。
二、各专业班级根据实际情况做相应调整,调整情况详见各专业班级的授课计划。
其中15个课时的内容调整如下:
实验一、二、五3学时
实验六3学时
实验七3学时
实验九、实验十二3学时
实验十三3学时
实验一 实验室基本设备及其用途的识别
一、目的
认识植物组织培养实验室的基本结构,必须的基本设备及其用途与作用方法。
二、实验室的基本结构
(一)化学实验室(工作室)培养基药品称量、配制、分装、灭菌;材料预处理;培养材料的观察分析;制蒸馏水。
设备、药柜、工作台、蒸馏水器、天平、冰箱,手提高压消毒锅、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器等。
安装水、电、排气等装置。
(二)接种室
无菌操作室
接种箱
超净工作台
(三)培养室
(四)洗涤、消毒室;卧式高压消毒锅。
(五)温室(培养大棚)。
实验二 常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法、
常用几种药剂的配制
一、目的
认识植物组织培养必需的仪器、器皿,几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制。
二、常用仪器
1.蒸馏水器(学习操作)
2.手提式高压消毒锅、卧式高压消毒锅(学习使用、操作)
3.天平
药物天平(工业天平)、粗天平、(精密度1/10)
扭力天平(精密度1/100)
分析天平(精密度1/10000)
4.超净工作台(学习、使用、操作)
5.电热干燥箱(烘箱)
6.恒温光照培养箱(学习、操作)
7.电冰箱
8.显微镜和解剖镜
1手提式解剖镜(学习、使用、操作)
2立体解剖镜
3普通显微镜
9.旋转培养机
10.离心机(学习、使用、操作)
11.酸度测定仪:
⑴精密PH4-7试纸;⑵笔型 袖珍酸度计。
三、必要的器皿
(一)玻璃器皿
1. 培养器皿
1试管
2三角烧瓶(锥形瓶)
3圆形高形培养瓶(罐头瓶)
4培养皿
5扁身培养瓶
6L型和T型管
7凹面载玻片
2. 盛装器皿
1试剂瓶
2烧杯
3. 计量器皿
1量筒
2容量瓶
3吸管
4. 其它器皿
滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。
(二)金属器械
1. 镊子类
120-25cm长型镊子(接种或转移愈伤组织)
2尖端弯曲“枪型”镊子(镊取较小的植物组织)
3尖头钟表镊子和鸭嘴镊子(剥离表皮用)
4尖端为小铲状镊子(挖取带琼脂培养基的培养物)
2. 解剖刀和刀类
1眼科用刀种牛痘疫苗的菱形刀(切割柔软组织中小细胞团)
2解剖刀(手术刀)
3双面刀片焊接在玻棒上(切取茎尖用)
4锋利小刀、大刀和小铁锹
3. 剪刀类
① 解剖剪 ② 眉剪 ③ 眼科剪 ④18-25cm弯头剪 ⑤ 俢枝剪
4.接种针
四、几种常用药剂的配制
(一)用95%尝试酒精配比不同浓度的酒精的配制。
学习配制70%和75%酒精。
(二)消毒剂
1. 20%次氯酸钠溶液 称取20g次氯酸钠用少许水溶解,100ml水定容。
2. 0.1%升汞(HgCl2)溶液 称取0.1gHgCl2少许水溶解,100ml水定容。
(三)洗涤剂
1. 2HCl酒精 95%酒精100ml加入2mlHCl
2. 硫酸-重铬酸钾洗液
称取10g重铬酸钾加入蒸馏水90ml,加热溶解冷却后,逐渐加入浓硫酸175ml,放入棕色玻璃瓶备用,(注意:
切记不可将盛过洒精,甲醛等原剂的药品玻璃器皿直接泡入洗液在,因为重铬酸钾是一种强的氧化剂,一旦被还原氧化,洗液变绿,失去洗涤作用)。
这些器皿必须用自来水冲洗干净并晾干再浸入洗液。
(四)1摩尔浓度(mg/L)NaOH和1摩尔浓度(mg/L)HCl配制。
摩尔浓度是指用1升(1000ml)溶液中所含溶质的分子量数来表示的溶液的浓度。
用M表示。
1. NaOH摩尔浓度(M)
NaOH摩尔质量=分子克数=40g
1MNaOH是指1000ml溶液中含有40克摩尔质量的NaOH,现要配制100ml
40×0.1=4g
称取NaOH4g,用少量溶解,定容100ml.
2. HCl的摩尔浓度
具体配制酸的mol浓度时,应考虑原浓酸的比重mol浓度。
要求配制的mol浓度×需配制的体积×原酸分子量
V=———————————————————————
原酸的百分浓度×原酸的比重×1000
配制1.0M HCl 100ml,量取38%,比重为1.19的HCl8.06ml加蒸馏水,定容至100ml。
实验三 洗涤――灭菌
植物组织培养能否成功重要的一环是在无菌条件下进行操作与培养,导致污染的来源主要有:
⑴ 器皿和用具;⑵ 培养基;⑶ 培养材料;⑷ 工作人员本身;⑸ 操作时的空气。
防止污染的有效方法是将所有与培养有关的器皿,用具、培养基、接种室、培养室等进行灭菌和无菌操作。
一、洗涤
(一)玻璃器皿的洗涤
1. 新购置的玻璃器皿的洗涤(学习、操作)
因有游离碱性物质,使用前先用1%稀盐酸浸泡一夜,然后用肥皂水洗净,清水冲洗,最后用蒸馏水冲洗一次,干后备用。
2. 已用过玻璃器皿
先将残渣除去;用清水洗净,再用热肥皂水或洗衣粉洗净,清水冲洗干净,最后用蒸馏水冲洗一次,干后备用。
3. 对一些不宜刷洗的玻璃器皿如:
吸管,滴管及较脏的器皿等先用去污粉和去油剂刷洗,自来水冲干净后,晾干,再浸入硫酸-重铬酸钾洗液中浸泡若干小时,用夹子取出在自来水冲洗干净,再用蒸馏水冲洗1-3遍,稍晾不滴水后置于干燥箱内烘干备用。
4. 对带有凡士林,石蜡,或胶布的器皿选用特殊方法处理后,再用常规方法洗涤。
带有凡士林的器皿须先用废纸把凡士林擦去,再用汽油擦洗干净,然后用热肥皂水煮沸半小时,刷洗后,自来水冲干净。
若带有石蜡,可在玻璃器皿下垫几层废纸,放入60-70℃温箱中1加热-2小时,待石蜡融化后,再用废纸反复擦2-3次即去石蜡再泡入洗衣粉的热水中洗干净最后用自来水冲洗,蒸馏水冲洗干净若有胶布粘着物,先用70%酒精棉球擦数遍,溶解粘胶物,并用少许去污粉刷抺,再用洗衣粉煮沸半小时,刷洗干净,自来水冲洗,晾干,再泡入洗液。
(二)金属器皿
新购置金属器皿因其上有润滑油或防绣油,用蘸有四氯化碳(CCl4 )布擦去油脂,再用湿布擦净,干燥备用。
二、灭菌
(一)器皿和用具常用灭菌方法:
1. 热压灭菌法(学习操作)
将洗净的培养器皿,用具,用牛皮纸包好,放入高压消毒锅中,1.1压力下灭菌20-30分钟。
2. 干热灭菌法
洗净的玻璃器皿置于电热干燥箱中,150℃40分钟或120℃两小时,待冷却后使用。
(二)无菌室灭菌(接种室、培养室)
1.用新洁尔灭擦抺工作台,70%酒精擦拭超净工作台。
2.薰蒸(学习操作)
用甲醛、高锰酸钾提前1-3天薰蒸密封房间方法1:
甲醛倒入蒸发皿加热,用量10ml/m2。
方法2:
甲醛(HCHO)与高锰酸钾(KMn4)以10:
1比例混合。
3.接种前用70-75%酒精喷雾,使飘在空气中的尘埃沉积下来。
4.用紫外光灯进行照射灭菌(波长2650-2660A最好)接种箱及用具30-40分钟。
(三)培养基灭菌(略)
(四)培养材料灭菌(略)
(五)工作人员无菌操作(略)
实验四 培养基
(一)培养基成分介绍
一、培养基的成分是影响组织培养的最根本的外部因素。
对某种植物培养成功与否是各种条件综合影响的结果。
这些综合因素存在于每一个培养步骤。
每一个单因子都可能导致培养的失败。
影响培养效果的因素分有外因和内因,外因有培养基成分及物理状态,培养温度,光照强度,光的质及波长等等。
这五种最根本的是培养基成分,因为它是培养材料的生命之地,它若适宜。
培养则易成功,反之则失败。
二、培养基的成分
(一)大量元素
植物生长必须的C、H、O、N、P、K、S、Ca、Mg九种元素在植物组成中含量较多,通常占干重或灰分的千分之几,百分之几,所以在培养基中用量较大叫大量元素,大量元素H、O两种元素主要从水中获得,C从光合作用CO2来,但离体植物或组织没有光合作用能力。
因此通过加糖提供C源,常用浓度为1-5%,常用分析纯、化学纯的蔗糖。
N常用硝态N(硝酸钾等)和铵态N(硫酸铵等)大多数以硝态N为主。
MS培养基和N6培养基既含有硝态N又含有铵态N,P参与植物生命过程中的核酸合成,蛋白质合成,光合作用,呼吸作用及能量贮存,转化和释放等重要生理生化过程。
K在近代培养基中,用量有提高的趋势,Ca、Mg、S的需要则较少。
能提供这些元素的物质主要有磷酸二氢钾(KH2PO4),七个结晶水的硫酸镁(MgSO4.7H2O),二个结晶水的氯化钙(CaCl2.2H2O)。
(二)微量元素
包括Fe 、Cu、Mo(钼)、Zn、Na、Mn、Co(钴)、B(硼)和I(碘),它们在植物组织培养基中需要量极微,体内含量常在10-3-10-5moi/L之间,培养基中添加10-7-10-5moi/L(摩/升)就可满足需要,多了就会引起植物细胞酶失活,代谢障碍,蛋白质变性及组织死亡。
Fe是用量较多的一种微量元素,对植物组织叶绿素的合成和延长生长起重要作用。
因使用Fe(SO4)3(硫酸铁)和FeCl3(氯化铁)在培养基PH为5.2以上时Fe(OH)3沉淀,植物材料无法吸收,故常用FeSO4.7H2O(硫酸亚铁)和二乙铵四乙酸二钠(Na2-EDTA)结合成螯合铁成为有机态被吸收和利用。
Cu有促进离体根生长的作用;Mo是合成活跃的硝酸还原酶的组成部分,也是固N酶的组成部分,还有防止叶绿素受破坏的作用;Mg、Zn、Na、是酶的组成部分,也是防止叶绿素被破坏的作用;Mn与植物呼吸作用、光合作用有关;B与糖的运输,蛋白质合成有关,总之,微量元素在生命活动中,多以酶系中的辅基形成起重要作用。
(三)有机营养
1. 维生素类:
大多数植物组织或细胞能够合成必要的维生素,但是在数量上显然是不够的,通常在培养基中补加一种或多种维生素但各标准营养培养基所用维生素组合差别较大,常使用的有:
维生素B1(盐酸硫铵素)用量0.1-5.0mg·L-1
维生素B6(盐酸吡哆醇)用量0.1-1.0mg·L-1
维生素H(生物素) 用量0.01-1.0mg·L-1
烟酸 用量0.1-5.0mg·L-1
肌醇 用量100-200mg·L-1
核黄素 用量0.1-1.0mg·L-1
抗坏血酸 用量1-100mg·L-1
泛酸钙、叶酸 用量0.5-2.5mg·L-1
2. 氨基酸:
是重要的有机N源,有甘氨酸、丝氨酸、谷氨酸、天冬酰铵,水解酪蛋白(CH),水解乳蛋白(LH),它们主要作为营养提供,以利于蛋白质合成,CH和LH是近二十种氨基酸的混合物,常用量100-1000mg·L-1
3. 有机添加物
是一些成分较复杂,大多数含氨基酸、激素、酶等的复杂化合物,它们对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用,但成分大多不清楚,含量也不稳定,所以一般应尽是避免使用,特别是新的生长调节剂物质不断产生,更缩小它们的使用范围。
⑴ 椰乳(CM):
液体胚乳,一般浓度10-20%
⑵ 香蕉:
用量20-200g·L-1黄熟的小香蕉加入培养基后即变紫色,对PH的缓冲作用影响很大,主要于兰花组培。
⑶ 马铃薯,去皮去芽后用量150-200g·L-1,切碎,30煮分钟,过滤液,加入培养基,对PH有缓冲作用。
⑷ 其他还有酵母提取液(YE),用量约0.5%;麦芽提取液用量0.1-0.5%苹果汁、番茄汁、柑桔汁等。
(四)琼脂
是一种从海藻中提取出来的凝胶性物质,作固体培养基凝固剂用,一般用浓度0.6-1%,视琼脂质量而异。
因天然产物,牌号,批号不同,质量差异大,用量亦有所差异,有时还有一些有害物质,用前要浸洗琼脂以色白,洁净为好。
(五)糖
糖是碳源,提供营造新细胞,新的化合物的碳骨架,也为组织呼吸代谢提供底物及能源,还能维持培养物所需渗透压。
植物组织培养中提供碳源的糖类有蔗糖、葡萄糖、果糖是最好的碳源,多数植物在芽分化时糖用量为30g·L-1,根分化时用15-20g·L-1,但也有高达50-60g·L-1,培养基筛选等项研究工作时,为避免出现误差而影响实验效果,最好用纯度较高的蔗糖,实际生产中,完全可以用市集的白糖代替化学纯的蔗糖。
(六)活性炭
加入活性炭目的是除去琼脂中的毒物或培养物产生的芳香族的代谢废物,活性炭可防止组织变褐并利于胚胎发生与生根培养,活性在制造方法和来源不同,差异较大,一般用量0.1-0.5%。
(七) 植物生长调节物质
植物生长调节物质是培养基中关键物质,对植物组织培养起着生根而又明显的调节作用,没有哪一种比植物调节剂所生产的影响更大,它用量的多少,配比的适当程度,将影响培养的成败,即影响到愈伤组织的生长,形态建造,根和芽的分化等等。
目前已知的生长素,赤霉素,细胞分裂素,脱落酸和乙烯五大类植物激素,几乎都与分化有关。
在植物组织培养中,生长调节剂,尤其是生长素和细胞分裂素非常重要可以说没有生长调节就不可能进行植物组织培养。
生长素常用2.4-D,萘乙酸(IAA),吲哚乙酸(NAA),吲哚丁酸(IBA)等,其生理作用主要是促进细胞生长,刺激生根,对愈伤组织的形成起关键作用。
细胞分裂常用激动素(KT),6-苄基氨基嘌呤(BA),玉米素(ZT),2-异戊烯腺嘌呤(Zip),它们经高温高压灭菌后性能仍稳定。
SLKT受光易分解,故应在4-5℃低温黑暗下保存,细胞分裂素有促进细胞分裂和分化,延长组织衰老,增强蛋白质合成,抑制顶端优势,促进侧芽生长及显著改变其他激素作用的特点。
通常认为,生长素和细胞分裂素的比值大时,有利于根的形成;比值小时,则促进芽的形成。
低浓度2.4-D有利于胚状体的分化,但妨碍胚状体进一步发育 ,NAA有利于单子叶植物分化,IBA诱导生根效果最好。
赤霉素(GA)的生理作用是促进植物伸长,节间伸长,分生组织芽生长,诱导淀粉的合成,打破休眠和促进开花等,与生殖器官发生有关,一般不常用。
脱落酸是植物体天然存在的生长抑制物,有促进叶部脱落,诱导休眠作用,与生殖器官发生有关。
乙烯是植物内唯一呈气体状态的激素,与植物衰老和成熟有关。
植物营养培养基中常用的植物生长调节剂
类别
名 称
缩写词
分子量
使用浓度范围
母液配制
说 明
生 长
素
2,4-二氯苯氧乙酸
2,4-D
221.0
0.001-10mg/L
生长素通常用NaOH溶液滴至溶解成溶液。
能溶于乙醇
IAA易被植物细胞所氧化。
故培养基中很少单独使用。
α-萘乙酸
NAA
186.2
0.001-10mg/L
吲哚-3-乙酸
IAA
175.2
0.001-10mg/L
吲哚-3-丁酸
IBA
203.2
0.001-10mg/L
细
胞
分
裂
6-苄基氨基嘌呤
BA
225.2
分裂素通常能溶于稀NaOH,含水乙醇或稀盐酸
玉米素不耐热,不能高压灭菌。
6-糠基氨基嘌呤
KT
215.2
N-异戊烯氨基嘌呤
(玉米素)
ZT
219.2
赤
霉
素
赤霉素
GA3
346.4
能溶于乙醇
不耐热不能高压灭菌在愈伤组织和悬浮培养物的启动和保持生长时才需要有时小植株再生时也需要
二、PH的调整
培养基的PH值(酸碱度)直接影响对离子的吸收,所以过酸或过碱都对植物材料有很大影响。
此外,琼脂培养基的PH值还影响到凝固情况最好用酸度计,若无也可用精密PH-试纸(干燥保存)过酸用1N NaOH调节,过碱用1N HCl调节,经高压灭菌后,由于某些成分的分解(如蔗糖分解)或氧化,酸度会增加,PH一般可降低(0.2),培养基PH一般调至5.6-5.8的范围。
三、培养基中采用浓度单位计量有:
1. 毫克·升(mg/L 或mg·L-1)
每升溶液中所含某化合物的毫克重。
2. 微克·升(ug/L或ug·L-1)
每升溶液中所含某化合物的微克重。
3. 重量百分率:
每100ml溶液中含某化合物的克重如:
2%表示1000ml溶液中含化合物20g,采用琼脂和蔗糖时常用此单位。
4. 克分子重量(mol·L-1即mol/L)mol
每升溶液中所含某化合物的克分子重(mol),此种单位常用于生长调节剂,按用量不同,又分毫克分子重(mmol·L-1)和微克分子(umol·L-1)。
5. 容积百分率:
100ml溶液中含有某化合物的毫升量,常用于表示椰子乳汁,番茄汁、马铃薯汁等。
三、实验操作内容:
1.棉球塞制作
2.无菌接种操作练习
3.分装培养基练习
4.容量瓶定容练习
实习五培养基母液的配制
一.培养基的种类
培养基的种类,成分直接影响到培养材料的生长,故应根据培养植物的种类、部位选择适宜的培养基。
(一)高盐成分培养基:
包括MS、LS、BL、BM、ER等培养基,它应用最广泛,其钾盐,铵盐及硝酸盐含量均较高,微量元素种类齐全,目前植物组织快繁中,应用MS培养基最多。
(二)硝酸钾含量较高的培养基
1.B5培养基B5培养基除含有较高的钾盐外,还含有较低的铵态氮和较高的盐酸硫铵素,较适应南洋杉,葡萄和大豆科,十字花科植物的培养。
2.N6培养基N6培养基(朱至清等)1975年我国学者创造,获国家发明二等奖,适用于单子叶植物花药培养,柑桔花药培养也适合,楸树、针叶树等的组织培养使用效果也好。
3.SH培养基此培养基是矿盐浓度较高的培养基,其中铵与磷酸是由NH4H2PO4提供的。
(三)中等无机盐含量的培养基
1.H培养基(Bourgin与lNitsch)大量元素为MS培养基的一半,仅KH2PO4及氯化钙稍低,微量元素种类减少,而含量较MS为高,维生素种类比MS多,适于花药培养。
2.尼奇培养基(Nitsch)与H培养基的成分基本相同,仅生物素较H培养基高10倍,也适于花药培养。
3.米勒培养基(Miller),Blaydes培养基适合于大豆愈伤组织培养和花药培养用。
(四)低无机盐培养基,大多数情况下用于生根培养基
1.改良怀特培养基(White)
2.WS培养基(Wolterandskoog)
3.克诺普液(sknop)花卉培养上用得多
4.贝尔什劳特液(Berthelot)
5.HB(HolleyandBaker)花卉培养,木本植物的茎尖培养效果良好,其成分是大量元素比1/2克诺普液稍多,微量元素用贝尔劳什特液,每升培养基中加0.5ml
二.培养基的选择
所培养的植物已有前人作过研究的,可以从文献中找到可供采用的合适培养条件;若前人从未培养过,就要选择和建立一个最适于该植物的营养培养基。
可采用一种已知培养基如MS、B5或SH,对少数成分进行改变;进行一系列试验,在修改一种培养基时,对无机成分和有机成分分别处理。
在植物组织培养基中最可变的因素是生长调节剂,尤其是生长素和细胞分裂素,具体方法:
首先选择好一种基本培养基(MS)对生长素(NAA)和细胞分裂素(BAP)均分别制定大约五种浓度0,0.5,2.5,5,10μmol(微克量)将这两种调节剂的五种浓度进行排列组合便可以得到25个组合的试验性培养基,从25个培养基中挑选出最好的培养条件
(2)进一步选择最合适的生长素和细胞分裂素(浓度均与最适条件浓度相同)方法是先保持其中的生长素不变。
只改变细胞分裂素的类型,反之亦然。
虽然高盐培养基(MS等)从许多植物系统中已证明是良好的,但是有些培养物在低盐培养基上生长得更好,因此值得花精力去检验一下在最适生长调节剂组合下改变MS的无机盐浓度为1/2和1/4水平,从而可以找到最好的无机盐尝试和最适生长调节剂组合的营养培养基。
三.培养基母液配制
为了减少工作量,减少多次称量所造成的误差,一般将常用药品配成比所需浓度高10—100倍的母液,现以MS培养基为例,预先配制,四组不同母液,说明母液的配制方法。
母液
成 分
规定量
浓缩
倍数
称取量
母液
体积
配制1升培养基吸取量定容
编号
种类
大量元素
KNO3
1900
10
19000
1000
100
NH4NO3
1650
10
16500
MgSO4·7H2O
370
10
3700
KH2PO4
170
10
1700
CaCl2·2H2O
440
10
4400
微量元素
MnSO4·4H2O
22.3
100
2230
100
10
ZnSO4·7H2O
8.6
100
860
H3BO3
6.2
100
620
KI
0.83
100
83
Na2MoO4·7H2O
0.25
100
25
CuSO4.5H2O4
0.025
100
2.5
CoCL2.6H2O
0.025
100
2.5
铁盐
Na2-EDTA
37.3
100
3730
1000
10
FeSO4.4H2O
27.8
100
2780
有机物
甘氨酸
2.0
50
100
500
10
盐酸吡哆醇
0.5
50
25
盐酸硫铵素
0.1
50
5
烟酸
0.5
50
25
肌酸
100
50
5000
MS培养基母液配制(单位:
毫克 mg)
注意:
1.大量元素按照使用时高10倍的数值称取,分别将各种化合物称量后,除CaCl2·2H2O单独配制外,其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2.微量元素母液的配制
按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。
3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。
4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。
5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。
6.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。
7.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。
四.生长调节剂母液配制:
为了操作方便,节约时间,生长调节剂也可如同配制母液一样,先配成原液,这样配制培养基时只要稍加计算,按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水,可用少量不同的溶剂先溶解,萘乙酸(NAA),吲哚乙酸(IAA),赤霉素(GA3),2,4-D等生长素和
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