基质固相分散液相色谱法测定血豆腐中的激素精.docx
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基质固相分散液相色谱法测定血豆腐中的激素精
分析与检测
基质固相分散液相色谱法测定血豆腐中的激素
周建科,宋歌,张明翠,刘瑞英
(河北大学理化分析中心,河北省分析科学技术重点实验室,河北保定,071002
摘要采用基质固相分散样品前处理方法,高效液相色谱同时测定血豆腐中雌三醇、诺龙、甲基睾丸酮、己烯雌酚4种激素。
考察了分散剂种类、样品与分散剂质量比、洗脱剂及洗脱体积对测定结果的影响。
色谱条件为:
DikmaC18柱(5m,250mm46mmid,流动相为V(甲醇V(四氢呋喃V(水=601030。
4组分线性相关系数为09998-09999。
样品检出限为0025-01g/g(S/N=3,回收率830%-940%。
关键词基质固相分散,液相色谱,血豆腐,激素
第一作者:
学士,研究员。
收稿日期:
2009-06-22,改回日期:
2009-09-15
蛋白同化激素是具有性激素活性的同化剂,它能
够促进动物生长,在特定的饲喂期间可引起蛋白质沉积,从而提高饲料转化率。
20世纪70年代以前,许多国家和地区均将其用作畜禽的促生长剂。
但毒理研究表明这些药物可能诱发癌症,干扰生殖系统、神经系统、免疫系统
[1-2]
。
包括我国在内的绝大多数国
家已禁止将蛋白同化激素用作动物促生长剂[3-7]
。
若非法将这类药物用于畜禽、水产养殖,导致药物在动物体内及动物性食品中的残留,将危害人类健康。
因此,快速有效的检测动物源食品中蛋白同化激素残留量很有必要。
血豆腐是人们日常食用的大众食品,有关血豆腐中蛋白同化激素的测定尚未见报道。
本文采用基质固相分散技术处理样品,高效液相色谱检测血豆腐中的雌三醇、诺龙、甲基睾丸酮、己烯雌酚4种蛋白同化激素,效果良好。
1实验部分
11仪器与试剂
LC10AT高效液相色谱仪(日本岛津公司,SPD10A紫外检测器;7725i型手动进样阀,N2000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所,UV265紫外可见分光光度计(日本岛津公司。
雌三醇、诺龙、甲基睾丸酮标准品(Sigma公司;己烯雌酚标准品(AcrosOrganics公司;四氢呋喃、甲醇、乙醇均为色谱纯;二次去离子水;血豆腐购自超市。
12色谱条件
色谱柱:
DikmaC18柱(5m,250mm46mm
id;流动相:
V(甲醇V(四氢呋喃V(水=60
1030;流速:
10mL/min;检测波长:
雌三醇280nm,诺龙、甲基睾丸酮、己烯雌酚241nm;柱温:
室温;进样量:
20L。
采用色谱峰的保留时间定性,外标法峰面积定量。
13标准溶液配制
准确称取雌三醇、诺龙、甲基睾丸酮、己烯雌酚标准品各20mg,用乙醇配制成质量浓度为10mg/mL标准储备液,4!
冰箱存放。
标准工作溶液:
用乙醇逐级稀释标准储备液。
14样品预处理
准确称取10g样品和20g分散剂,放入研钵,轻轻研磨,将研磨好的混合物装填到可加压磨口玻璃层析柱中,柱底和柱顶均加一圆形滤纸片,用注射器塞轻压使装填紧密。
先用4mL二次水冲洗,去除其中的水溶性物质,再用4mL正己烷冲洗,去除其中的脂溶性物质,最后用80mL甲醇洗脱目标化合物,收集洗脱液过045m滤膜,滤液置40!
水浴,氮气流吹至02mL,取浓缩液20L进样分析。
2结果与讨论
21色谱条件优化
用UV265紫外分光光度计分别对4组分进行光谱扫描,由光谱图可知,雌三醇在280nm有强吸收峰;诺龙、甲基睾丸酮和己烯雌酚在241nm有强吸收峰;故采用波长时间程序设定检测波长为前5min,280nm,5min后241nm。
在等度洗脱条件下,分别考察了甲醇水体系和甲醇四氢呋喃水体系作为流动相的情况。
结果显示,用甲醇水体系作流动相时,出峰时间较晚且峰形不好,用甲醇四氢呋喃水体系作为流动相,4组分分离良好。
如图1所示。
食品与发酵工业
FOODANDFERMENTATIONINDUSTRI
ES
1-雌三醇,2-诺龙,3-甲基睾丸酮,4-己烯雌酚
图1标准品色谱图
22分散剂及用量确定
考察了中性氧化铝、红色硅藻土、2种Florisil作分散剂的情况。
结果表明,中性氧化铝对被分析物吸附作用强,回收率差;国产Florisil和红色硅藻土净化
效果不佳,杂峰多,干扰严重;进口Florisil杂峰少干扰小,回收率较好,因此选用进口Florisil作为分散剂。
实验中考察了分散剂与样品质量比分别为11、21、31的情况。
21时回收率最高,故本实验选择分散剂与样品质量比为21。
23洗脱剂和洗脱体积的选择
考察了甲醇、乙醇及二氯甲烷作为洗脱剂的情况,通过比较发现,二氯甲烷杂质峰较多,影响组分峰的测定,甲醇回收率低,乙醇回收率高且没有干扰,因此选用乙醇作为洗脱剂。
洗脱剂用量对洗脱效率有较大影响。
增加洗脱体积有利于回收率的提高,但洗脱体积过大会稀释被测组分,增加浓缩时间,浪费溶剂,污染环境。
实验考察了不同淋洗体积与回收率的关系。
结果显示甲醇体积为8mL时,回收率最高。
24线性方程及检出限
移取适量储备液混合后逐级稀释,配成一系列浓度的工作溶液。
在所选条件下,以峰面积对质量浓度绘制工作曲线,线性方程及相关系数见表1。
4组分的方法检出限分别为01、0025、005、005g/g。
表1线性方程
组分测定范围/(mg∀L-1
线性方程
R雌三醇005-2500Y=216665E6X-2111309998诺龙0005-250Y=12211E7X+2405009999甲基睾丸酮001-500
Y=155862E7X-6197409999己烯雌酚
001-500
Y=217632E7X+19611
09998
26回收率与精密度
10g血豆腐中加入适量雌三醇、诺龙、甲基睾丸酮、己烯雌酚的混合标准溶液,按照14处理样品,在优化的色谱条件下,分别测定样品的本底值和加标后的含量,平行6次,回收率见表2。
样品加标色谱图见图2。
表2回收率(n=6
组分本底/(g∀g-1
加入量/(g∀g-1
测得量/(g∀g-1
回收率/%雌三醇0
100
8.94
89.4诺龙
0100.9494.0甲基睾丸酮0201.7487.0己烯雌酚
20
1.66
83.0
1-雌三醇,2-诺龙,3-甲基睾丸酮,4-己烯雌酚
图2样品加标色谱图
27样品测定
在优化的色谱条件下对市售血豆腐样品进行了测定,雌三醇、诺龙、甲基睾丸酮、己烯雌酚均未被检出。
样品色谱图见图3。
1-雌三醇,2-诺龙,3-甲基睾丸酮,4-己烯雌酚
图3样品色谱图
3结论
采用本方法测定血豆腐中的雌三醇、诺龙、甲基睾丸酮、己烯雌酚4种蛋白同化激素,方法简便、快速、重现性好、有较好的回收率,适合常规样品的检测。
本方法能满足对血豆腐中蛋白同化激素进行监控的需要。
分析与检测
参考文献
[1]李端药理学[M](第5版北京:
人民卫生出版社,
2006:
293-307
[2]雷忻,李东升,张育辉浅谈环境化学污染物的雌激素
效应-环境雌激素[J]延安大学学报(自然科学版,2002,21(1:
56-58
[3]SauerMJ,SamuelsTPW,HowellsLG,etalResidues
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2653-2660
[4]McEvoyJDG,McVeighCE,McCaugheyWJResidues
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2475-2478[5]McEvoyJDG,McVeighCE,McCaugheyWJResidues
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2479-2484[6]WalsheM,OK'eeffeM,LeBizecBStudiesonthedeter
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2687-2691[7]农业部、卫生部、国家药品监督管理局农业部176号
公告[B]禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录,2001
DeterminationofHormonesintheBloodBeamCurdby
HighPerformanceLiquidChromatographyZhouJianke,SongGe,ZhangMingcu,iLiuRuiying
(ResearchCenterofPhysicsandChemistryAnalysis,KeyLaboratoryofAnalyticalScienceand
TechnologyofHebeiProvince,HebeiUniversity,Baoding071002,China
ABSTRACTMatrixsolidphasedispersionhighperformanceliquidchromatographic(MSPDHPLCmethodwas
usedforthesimultaneousdeterminationoffourhormonesinthebloodbeamcurdsample,includingestrio,lnorethindrone,methyltestosteronanddiethylstilbestro.lParameterssuchasthekindofdispersan,ttheweightratioofdispersantandsample,thekindandvolumeofeluentwerestudiedandoptimized.DikmaC18column(5m,250mm4.6mm.id.wasusedforseparationofthetargetcompounds.Mobilphasewas601030(v/v/vmethanoltetrahydrofuranwater.Theflowratewas1.0mL/minandthewavelengthsofUVdetectorwere280nmand241nm.Thelinearcorrelationcoefficientofthefourhormoneswere0.9998-0.9999.Thedetectionlimitsofthefourhormoneswere0.025-0.1g/g.Theaveragerecoveryofthecompoundsrangedfrom82.9%to93.7%.Keywordsmatrixsolidphasedispersion,liquidchromatography,bloodbeamcurd,hormones
政策法规标
准2010年6月1日起食品标识要符合新修改的#食品标识管理规定∃质检总局对#食品标识管理规定∃进行了新的修订,食品生产者在2010年6月1日前生产加工的食品可以继续使用符合原规定要求的原有标识包装,自2010年6月1日起,食品标识内容和形式要符合新修改的#食品标识管理规
定∃。
国家质检总局网站11月12日消息,#食品标识管理规定∃(总局第102号令于2007年8月27日公布,自2008年9月1日起施行。
该规定实施以来对规范食品标识标注,加强食品标识的监管,保护消费者的合法权益,发挥了重要作用。
为切实做好食品安全法的贯彻实施工作,进一步加强对食品标识的监督管理,根据#中华人民共和国食品安全法∃及其实施条例等有关规定,国家质检总局于2009年10月22日公布了#国家质量监督检验检疫总局关于修改<食品标识管理规定>的决定∃(以下简称决定,自公布之日起施行。
#食品标识管理规定∃根据该决定作相应的修订,重新公布。
广大食品生产者和各级质量技术监督部门应当认真学习和掌握新修改的#食品标识管理规定∃,规范食品标识标注,加强管理和监督检查,严格贯彻执行#中华人民共和国食品安全法∃。
鉴于部分食品生产者尚有一定数量的符合原规定要求的食品包装库存,为节约资源、避免和减少浪费,现将有关事宜公告如下:
食品生产者在2010年6月1日前生产加工的食品可以继续使用符合原规定要求的原有标识包装,也可以在销售单元中通过加贴标签、另附补充说明等形式完善原有标识中有关内容,保证全部标识内容符合新修改的#食品标识管理规定∃。
自2010年6月1日起,各级质量技术监督部门对生产加工的食品标识内容和形式不符合新修改的#食品标识管理规定∃要求的,依法予以查处。
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- 关 键 词:
- 基质 分散 色谱 测定 豆腐 中的 激素