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外文文献翻译

2016届

采用溴甲酚绿测定利扎曲坦剂型的

新萃取分光光度法

学生姓名胡绮丽

学号11114308

院系化学化工学院

专业药学

指导教师邓莉平

填写日期2015-12-28

采用溴甲酚绿测定利扎曲坦剂型的

新采掘分光光度法

ANewextractivespectrophotometricmethodfordeterminationofrizatriptandosageformsusingbromocresolgreen

EffatSouri1*,AbbasKaboodari1,NoushinAdib2andMassoudAmanlou1

DaruJournalofPharmaceuticalSciences2013,21:

12

利扎曲坦被有效地用于偏头痛的治疗。

在这项研究中，提出了一种基于所述离子络合，能对利扎曲坦在原料和剂型的测定的一种简单，快速和低成本的分光光度法。

在缓冲溶液中进行用溴甲酚绿作为试剂的离子对络合将吸光度用分光光度计测定。

本文对离子对的形成条件进行了优化，以及对该方法的准确度和精确度进行了计算。

结果与主要结论：

最好的结果是通过使用磷酸盐缓冲液（pH3.0）、6毫升溴甲酚绿试剂来实现的。

所得络合物的化学计量为1：

1。

在日内和日间精度值均低于2.9%和1.8％校准范围0.5-50，10-100微克/毫升。

该方法已成功地用于利扎曲坦的剂型的测定。

关键词利扎曲坦；溴甲酚绿；经度对的络合；分光光度法

引言

苯甲酸利扎曲坦（图1），N，N-二甲基-5-（1H-1，2，4-三氮唑基-1-甲基）-1H-吲哚-3-乙胺苯甲酸酯（N,N-dimethyl-5-（1H,1,2,4-triazol-1-ylmethyl）-1H-indole-3-ethanaminebenzoate），选择性地以高亲和力结合至人类5-羟色胺1B/1D受体。

临床试验已经证明口服利扎曲坦对偏头痛[1-3]的治疗的有效性。

根据液相色谱[4,5]或高效液相色谱荧光检测[6]等几种分析方法已被报道用于测定生物体液中的利扎曲坦。

HPLC[7-9]和HPTLC[10]的方法也被用于原料药或药物剂型中定量测定利扎曲坦。

此外，很少有文献报道分光方法用于利扎曲坦在剂型的确定[11-16]。

这些方法的一些[11-16]是基于离子对络合，在铁离子的存在下，氧化还原络合反应，氧化偶联反应。

在之前报道的大多数分光光度方法存在线性范围相对狭窄或高量化的限制。

在USP、BP中利扎曲坦是不是官方正式的，但仍然需要一个新的简便、灵敏、快速的测定方法，以满足药物的新时代形成的药物需求。

本研究涉及使用溴甲酚绿（BCG）作为络合离子对试剂的灵敏萃取分光光度法的开发和验证。

与之前在我们的实验室已经被用于测定的一些其它药物[17-19]相比溴甲酚绿（BCG）试剂是相对便宜。

分光光度法方法是快速，经济高效，简便和所需仪器实验室常见常见。

经验证，此方法可以成功地用于常规质量控制分析，不需要任何特殊的样品制备。

图1利扎曲坦的化学结构1

材料和方法

设备

双光束紫外可见分光光度计（UV-160，岛津，日本）200-800波长范围内被用于分光光度测量。

型号515泵的沃特世高效液相色谱系统，由型号717自动进样器加上和一个型号486UV-可见光检测器（所有来自沃特世，米尔福德，美国）组成。

多信道的色度＆规格软件色谱（版本1.5×）用于进行数据处理。

化学制品

苯甲酸利扎曲普坦（纯度99.8％）是由默克公司（批号：

0007051260048038），并承蒙伊朗德黑兰卫生部食品和药物实验室研究中心提供的。

溴甲酚绿（BCG）和其它分析级化学品购自默克公司（达姆施塔特，德国）购得。

标准试剂的制备

苯甲酸利扎曲坦（5×10-4M）的标准溶液的制备是在100ml蒸馏水中溶解13.5毫克的药物。

5×10-4MBCG溶液的制备是在1000毫升蒸馏水中溶解349毫克BCG,加入2毫升的0.1MNaOH增加溶解度。

磷酸盐缓冲液（0.1M）的制备通过在1000ml蒸馏水中溶解1.78克NaH2PO4。

调节PH至3.0。

所需B-R缓冲液的pH范围是2-7，是用0.1M乙酸、0.1M硼酸、0.1M磷酸混合配制而成,使用时用1MNaOH溶液在酸度计上调至所需pH值。

样品制备

2毫升利扎曲坦溶液（5×10-4M），1毫升缓冲液（pH3），6ml的卡介苗试剂（5×10-4M），和1毫升蒸馏水的等分试样被转移到的100毫升分液漏斗中。

萃取混合物，用5，3和2毫升的氯仿萃取三次。

分液漏斗大力动摇30秒进行萃取。

将有机相分离并脱水通过使无水硫酸钠中，并转移至10ml的容量瓶中。

用氯仿定容后，测定吸光度，用416纳米的试剂做空白对照。

反应条件的优化

选择最适pH

pH对离子对络合物的形成的影响通过研究使用pH2-7的范围内BR缓冲液的实验方法。

此外，对相同的pH值也进行了研究，不同类型的缓冲区（邻苯二甲酸酯，乙酸盐，磷酸盐），以找出最适效果的缓冲液。

选择试剂量

使用2毫升利扎曲坦溶液（5×10-4M）和1毫升磷酸盐缓冲溶液（pH=3.0），加入不同量的BCG试剂（0.5-7毫升），并将络合物提取后，分别在416纳米处测定所得溶液的吸光度。

选择提取溶剂

为了找出最好的提取溶剂，分别用氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚作萃取溶剂，对所得到的离子对络合物的吸光度进行比较。

反应时间的影响

反应时间对离子络合物的形成的影响进行了研究，在0-60分钟的范围内调整反应时间。

化学计量关系

控制变量法，找出离子对络合的化学计量比。

不同体积利扎曲坦和BCG的，以等摩尔浓度（4×10-4M），进行混合，测定得到的固定体积的离子对络合物的吸光度。

将得到的吸光度和利扎曲坦与BCG的摩尔比作图。

测定利扎曲坦

二十片利扎曲普坦片剂（5毫克）（法拉比药业有限公司，伊朗）使用研钵和研杵研成细粉。

接着，将得到的相当于一个片剂（5毫克利扎曲坦）的药物精确称量，并转移到100ml容量瓶中，加入约70毫升的蒸馏水制成溶液。

将混合物超声处理15分钟，并用相同的溶剂补足体积。

通过0.45μm注射器过滤器过滤后，根据一般方法对利扎曲坦的浓度进行测定。

利扎曲坦的量进行了计算得到的吸光度与相同浓度的标准溶液进行比较。

相同的方法过去也被用于HPLC测定利扎曲坦[20]。

相对回收

用标准加入法对利扎曲普坦剂型的相对回收率进行评估。

以40微克/毫升浓度水平利扎曲坦标准溶液加入到从片剂粉末得到等于一片剂的溶液中。

按照一般流程离子对络合后，该溶液的吸光度与40微克/毫升的片剂粉末的吸光度减去之后的标准溶液进行比较。

然后计算相对回收。

精度和准确性

找出的精度和准确性，准备三组利扎曲坦浓度不同的实验，为每个校准范围制备一式三份，并测量3天。

对日内和日间精密度和准确度进行了计算。

结果与讨论

吸收光谱

利扎曲坦和BCG用氯仿做空对照白溶液在200-800纳米范围内，通过测定萃取之后离子对络合物的吸收光谱表明，其最大吸收在416纳米（图2）。

该波长用于分光光度法测量。

没有在利扎曲坦或BCG单独溶液中观察到可见光区域的吸收。

在利扎曲坦和BCG之间所形成的离子对络合物在可见光区域产生最大吸光度时，辅料的干扰是最小的。

图2（A）利扎曲坦的吸收度（B）的卡介苗（C）利扎曲坦和BCG的混合物2ml的利扎曲坦的离子对络合物（5×10-4M）和6mlBCG（5×10-4M）。

选择合适的pH值

离子对络合根据使用的B-R缓冲液中的2-7的范围内的一般操作来进行。

其结果表明在图3中在pH3.0获得的最大吸光度值。

使用不同类型的缓冲区（邻苯二甲酸的BR或磷酸盐）在相同的pH值，最好的结果，出现在1毫升磷酸盐缓冲液时。

还观察到，加入当缓冲溶液利扎曲坦和BCG溶液后，吸收强度提高了。

图3pH值对离子对络合物形成所产生的影响

选择试剂量

为了实现完全的反应和最大吸收，对利扎曲坦和BCG试剂不同的量（0.5-7毫升）的固定浓度的溶液进行了测试。

结果表明，最大效应是通过使用6ml的BCG试剂（图4）来实现的。

继续增加试剂量对络合物形成不再具有影响。

图4BCG（5×10-4M）的量对离子对络合物的吸光度的影响

选择提取试剂

不同提取溶剂（氯仿，二氯甲烷，乙醚和乙酸乙酯）被使用。

用氯仿作提取溶剂时实现了最大吸光度和的离子对络合物更高选择性萃取。

人们还发现，用5,3和2毫升溶剂三次提取比一次性用10毫升氯仿萃取有着更好的结果。

反应时间的影响

通过在不同的时间间隔（0，5，10，20，30和60分钟）的离子对络合，表明最大吸光度混合利扎曲坦溶液和BCG试剂在缓冲溶液的存在后，立即实现，故反应时间不存在影响。

离子对络合物的稳定性

利扎曲坦BCG离子对络合物的稳定性，在室温下放置24小时进行评价。

结果表明，所形成的络合物在至少8小时内（回收率>95％）相对稳定。

离子对络合物组合物

控制变量法，通过使用不同的量利扎曲坦（4×10-4M）和BCG（4×10-4M）的等摩尔溶液分别用来找出的离子对络合物的化学计量。

利扎曲坦的摩尔比与吸光度作图（图5）。

最高点出现在0.5摩尔分数时说明等摩尔的最大值（1：

1）的基础上离子对络合。

离子对络合物所提出的结构显示在图6中。

图5利扎曲坦的摩尔比与吸光度的关系1

线性

校准曲线在0.5-50微克/毫升和10-100微克/毫升的范围内，根据表1中所示的统计参数为线性的。

分别实现相关系数和截距的值较小的高值。

参数

低量程

高量程

线性范围

0.50–50μg/ml

10–100μg/ml

回归方程

y=0.025x+0.004

y=0.0107x++0.036

斜率的标准偏差

0.00033

0.00016

斜率相对标准偏差（%）

1.32

1.53

标准差

0.0015

0.0097

相关系数（r2）

0.9997

0.9998

定量限（LOQ）

0.50

10.00

检测限（LOD）

0.17

3.33

吸光系数（ε）

2.1×104

2.1×104

表1利扎曲坦的标准溶液校准曲线的统计数据（N=6）

精度和准确性

在日内和日间精密度和准确度进行了评估利扎曲坦的一天，连续三天选定的浓度。

结果总结在表2。

偏差系数和误差函数,表明了该方法的精密度和准确度。

浓度（μg/ml）

Within-day（n=3）

Between-day（n=9）

实测值

（μg/ml）

偏差（%）

误差（%）

实测值

（μg/ml）

偏差（%）

误差（%）

0.50

0.49±0.11

2.24

-2.00

0.49±0.01

2.85

-2.00

5.00

5.01±0.08

1.59

0.20

5.08±0.10

1.96

1.60

50.00

50.32±0.65

1.30

0.64

50.37±0.88

1.75

0.74

10.00

9.86±0.09

0.91

−1.40

9.94±0.1

1.81

−0.60

50.00

49.83±0.89

1.79

−0.34

50.33±0.78

1.55

0.66

100.00

99.13±1.52

1.53

−0.87

99.54±1.79

1.80

−0.46

表2利扎曲坦的精密度与准确度测定（n=9;3组3天）

相对回收

从统计的样品利扎曲普坦的相对回收率为98％左右，可以看出没有来自辅料的干扰。

该方法的应用

该方法已用于片剂剂型测定利扎曲坦。

所提出的分光过程与先前公布的HPLC法进行比较。

分别使用这两种方法观察，没有显著差异（P<0.05）。

结论

所提出的分光光度法比较简单，快速，经济有效的，也能准确敏感的测定的散装粉末和片剂剂型中的利扎曲坦。

不需要特别的样品制备的，也不受片剂赋形剂的干扰。

这种测定方法的限制比其他先前报道分光光度法低。

因此，是一种有效的可用于利扎曲坦的原料药和剂型的常规质量控制检测的方法。

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