农化分析蔬菜中还原糖抗坏血酸及总酸度的测定.docx
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农化分析蔬菜中还原糖抗坏血酸及总酸度的测定
课程实验设计计划
课程名称:
《土壤农化分析与环境监测》
实验名称:
蔬菜中还原糖、抗坏血酸及总酸度的测定
年级专业:
10级农业资源与环境
小组成员:
指导教师:
杨XX
2013年5月13日
目录
一、还原糖测定-1-
1.目的意义-1-
2.测定方法-1-
3.试验原理-1-
4.仪器试剂-1-
5.试剂的配制-2-
6.操作步骤-2-
7.结果计算-3-
8.实验数据记录-3-
二、抗坏血酸的测定-4-
1.目的意义-4-
2.测定方法-4-
3.测定原理-4-
4.仪器试剂-4-
5.试剂配制-5-
6.操作步骤-6-
7.结果计算-7-
8.实验数据记录-7-
三、总酸度的测定-8-
1.目的意义-8-
2.测定方法-8-
3.测定原理-8-
4.仪器试剂-8-
5.操作步骤-8-
6.结果计算-9-
7.实验数据记录-9-
一、还原糖的测定
1、目的意义
糖是植物的贮藏物质,也是大多数农产品最主要的物质构成和产品质量的特征,因此农产品中还原糖含量的测定,是农产品质量检测的必需项目。
2、实验方法
高锰酸钾滴定法
3、测定原理
还原糖(指葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖)能在碱性溶液中将二价铜还原,生成一价的氧化亚铜沉淀,反应完成后,将反应生成的氧化亚铜沉淀过滤出来,沉淀经洗涤后,在酸性条件下,用一定量的硫酸铁将一价铜被重新氧化成二价铜,硫酸铁则被还原为硫酸亚铁,再用标准的高锰酸钾溶液滴定被还原的硫酸亚铁,由高锰酸钾的消耗量可以计算出氧化亚铜的量,然后查表,得出还原糖的含量。
4、仪器试剂
表1.1还原糖测定仪器试剂表
仪器
试剂
仪器名称
数量
试剂名称
浓度
用量(ml)
25-50ml古氏坩埚
2
斐林试剂A液
—
35
250ml容量瓶
4
斐林试剂B液
—
25
200和250ml烧杯
6
高锰酸钾标液
0.1mol(1/5)·L-1
—
10,25,50ml移液管
8
精制石棉
—
—
十分之一天平
1
氢氧化钠溶液
1mol·L-1
4
真空泵或水泵
2
硫酸铁溶液
—
25
电炉
1
盐酸
3mol·L-1
—
玻璃棒
1-3
一级纯水
—
—
滤纸
2
5、试剂配制
(1)斐林试剂A液:
取化学纯硫酸铜(CuSO4.5H2O)69.28g溶于1000ml水中,过滤;斐林试剂B液:
称取化学纯酒石酸钠346g和化学纯氢氧化钠100g溶于1000ml水中,过滤。
(2)0.1mol(1/5)/L高锰酸钾标准溶液:
称取高锰酸钾的3.3g,溶于100ml水中煮沸15分钟、加塞放置2天以上,过滤,在棕色试剂瓶中保存。
吸取0.0500mol/L草酸钠标准溶液25ml(称取在110℃干燥至恒重的草酸钠6.7010g溶于水,定容1000ml,即为0.0500mol/L草酸钠标准溶液),放入500ml三角瓶中,加经煮沸冷却的水250ml、浓硫酸7ml,置水浴上加热至70℃~80℃,在不断的搅拌下,用高锰酸钾滴定,至溶液呈微红色,并保持30秒钟不褪色,滴定完毕时,溶液温度应不低于55℃;同时做空白试验。
(3)精制石棉:
取石棉先用3mol/L的盐酸浸泡2-3天,用水洗净,在用10%氢氧化钠溶液浸泡2~3天,滤去溶液。
用斐林试剂B浸泡数小时,用水洗净,再以3mol/L盐酸浸泡数小时,用水洗至不呈酸性,然后加水振荡,使成细微的浆状软纤维,用水浸泡并贮存在玻璃瓶中,用时取出填充古氏坩埚。
(4)1mol/L氢氧化钠溶液:
称取氢氧化钠4克,溶于水并稀释至100ml。
(5)硫酸铁溶液:
称取硫酸铁50g,加水200ml,溶解后慢慢加入硫酸100ml,冷却后,加水稀释至1000ml。
(6)3mo/L盐酸:
量取盐酸500ml,加水稀释至200ml
6、操作步骤
(1)植物鲜样处理:
取代表性的样品50~100g,于捣碎机中捣至面糊状,取糊状样品10~20g于200ml烧杯中,加少量水搅拌后用水转入250ml容量瓶中,加水至约200ml,在45℃水浴中加热1小时,且不断的摇动,冷却后用水定容,混匀,静置。
吸取上清液200ml于另一250ml容量瓶中,加斐林试剂A10ml及1mol/l氢氧化钠溶液4ml,摇匀,加水至刻度,混匀后静置30分钟,干过滤,弃去最初部分滤液,滤液备用。
(2)测定:
吸取制备好的样品溶液50ml(根据含糖量多少而定)于250ml~400ml烧杯中,加入斐林试剂A和B各25ml,加盖表皿,加热,并控制在4分钟内沸腾,再准确煮沸2分钟,趁热用铺好石棉的古氏坩埚抽滤,用60℃左右的热水洗涤烧杯及沉淀,至洗液不显碱性为止。
将古氏坩埚增连同沉淀放入原烧杯;加入硫酸铁溶液25ml及水25ml,用玻璃棒搅拌使沉淀完全溶解,以0.1mol/L高锰酸钾标准溶液滴定至微红色为终点。
同时取水50ml,按上述同样操作,做空白试验。
7、结果计算
X=(V-V0)×N×71.54
式中:
X——相当于样品中还原糖质量的氧化亚铜质量(mg);
V——滴定样品时所耗高猛酸钾标准溶液的体积(ml);
V0——滴定空白时所耗高猛酸钾标准溶液的体积(ml);
N——高猛酸钾标准溶液的浓度(0.1mol(1/5)·L-1);
71.54——1mol(1/5)高锰酸钾所相当于氧化亚铜的质量(mg).
根据以上计算所得氧化亚铜的质量。
查附表《相当于氧化亚铜质量的葡萄糖、果糖、乳糖、转化糖质量表》,在计算出样品中还原糖的含量。
式中:
A——由附表查出的还原糖的质量(mg);
V——测定时所吸样品溶液体积(ml);
W——样品质量(或体积,g或ml);
250——样品处理后的定容体积(ml);
1000——mg换算成g。
8、实验数据记录
表2还原糖测定原始记录表
测定项目
序号
植物鲜样重(g)
糊状样品重(g)
测定时所吸样品溶液体积(ml)
滴定所耗高锰酸钾标液体积(ml)
高锰酸钾标液浓度0.1mol(1/5)·L-1
氧化亚铜的质量(mg)
由附表查出的还原糖的质量(mg)
还原糖含量
相对误差
还原糖的测定
1
2
空白
二、抗坏血酸的测定
1、目的意义
抗坏血酸(C6H3O6)也称维生素C(Vc),是维持人体健康的一种重要物质。
测定蔬菜中抗坏血酸的含量具有重要的意义,是鉴定蔬菜品质的重要指标之一。
2、试验方法
2,6-二氯靛酚滴定法
3、实验原理
维生素C分子中具有双链,能可逆地被氧化跟还原,还原型抗坏血酸能将蓝色的2,6-二氯苯酚吲哚酚(2,6-二氯靛酚)染料还原为无色的化合物,而其自身则被氧化为脱氢抗坏血酸。
染料2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈浅红色,在中性或碱性溶液中呈深蓝色。
因此当用深蓝色的碱性2,6-二氯酚靛酚染料溶液滴定含有抗坏血酸的草酸溶液时,其中的抗坏血酸可以将2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型。
但当溶液中的抗坏血酸完全被氧化之后,再滴2,6-二氯酚靛酚就会使溶液呈浅红色。
借此可以指示滴定终点,根据滴定用去的标准2,6-二氯酚靛酚溶液的量,可以计算出被测样品中抗坏血酸的含量。
4、仪器试剂
表3抗坏血酸测定仪器试剂表
仪器
试剂
仪器名称
数量
试剂名称
浓度
用量(ml)
不锈钢刀
2
1%草酸溶液
—
—
电动组织捣碎机
1
碘酸钾标液
0.001mol·L-1
—
100ml小烧杯
1
1%淀粉溶液
—
—
100ml容量瓶
3
6%碘化钾溶液
—
0.5ml
十分之一天平
1
Vc标准溶液
0.2mg·mL-1
5ml
10ml移液管
1
碳酸氢钠
—
52mg
半微量滴定管
1
2,6-二氯靛酚溶液
—
—
玻璃棒
1-3
一级纯水
—
—
滤纸
1
50ml三角瓶
5
5、试剂配制
(1)1%草酸的配制:
称化学纯草酸1g溶于100ml纯水中。
(2)0.1mol/L碘酸钾标液:
称取102g0C烘干2个小时的KIO30.3567g于烧杯中,用水溶解后全部转入100ml容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,次液为0.1mol/L碘酸钾贮备液。
准确吸取次液于100ml容量瓶中,加水稀释定容,即为0.01mol/LKO3标准溶液。
1ml次溶液相当于0.088mg抗坏血酸。
(3)1%淀粉溶液:
溶解1g可溶性淀粉于沸水中,继续煮至透明,稀释至100ml,用时现配。
(4)6%碘化钾溶液:
6g碘化钾溶于100ml水中。
(5)Vc标液:
称取0.2000g分析纯抗坏血酸于烧杯中,用1%草酸溶解后,转入1000ml容量瓶,用1%草酸稀释至刻度,摇匀,此溶液含Vc0.2mg/ml,至冰箱中保存。
使用前配制和标定。
标定Vc溶液:
吸取Vc标液5ml于50ml三角瓶中,加入1%草酸10ml,6%碘化钾溶液0.5ml,1%淀粉溶液3-5滴,用0.001ml/LKIO3标液滴定至淡绿色为终点。
由碘化钾的用量计算Vc的准确浓度。
Vc的浓度(mg/ml)=V1*0.088/V2
式中:
V1-------滴定时所耗碘化钾的量(ml);
V2-------吸取Vc溶液的体积(ml);
0.088----ml0.001碘化钾标准溶液相当于Vc的量(mg/ml)。
(6)2,6-二氯酚靛酚溶液:
称取50mg2,6-二氯酚靛酚溶于200ml含有52mgNaHCO3的温水中,冷却后用水稀释至250ml,放入冰箱中过夜,次日过虑于棕色瓶中,至冰箱内保存。
使用过程中每周标定一次。
标定:
吸取5ml已标定的Vc标液与50ml三角瓶中,加入1%草酸10ml,摇匀,用2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至溶液呈浅红色,15分钟内不退色为终点。
计算每ml2,6-二氯酚靛酚相当于抗坏血酸的毫克数(即滴定度T):
T=C*V1/V2
式中:
C--------Vc标液浓度(mg/ml);
V1--------所有Vc标量的用量(ml);
V2--------滴定所消耗2,6-二氯酚靛酚的量。
6、操作步骤
(1)样品制备
选取新鲜蔬菜样品10-20株,迅速洗净擦干,放入瓷盘中,用不锈钢刀从每个样品中切取一定部分,得到平均样品,在切成粗块,立即称取50.0-100.0g,放入电动组织搅碎机中的杯中,加入等量的1%草酸,快速捣碎成匀浆(整个制样过程在10min内完成)。
称取5g匀浆液于小烧杯中,用草酸溶液洗入100ml容量瓶中,并用草酸稀释到刻度,定容、摇匀、过滤。
若样液不易过滤则用离心机分离,若滤液颜色深则加1-2勺白瓷土脱色(注意:
多汁果蔬样品,如西瓜、葡萄、柑橘、番茄等,可直接压汁后用棉花快速过滤,吸取10-20ml滤液于100ml容量瓶中,立即用1%草酸滴定)。
(2)测定抗坏血酸
用移液管吸取以上制备液5.00-10.00ml,于50ml三角瓶中,用2,6-二氯酚靛酚染料溶液通过半微量滴定管滴定至样液呈浅红色,15ml不褪色则为滴定终点。
平行测定两次。
(3)空白试验
取等量的浸提液(1%草酸)代替待测样液,用2,6-二氯酚靛酚染料溶液滴定。
7、结果计算
植物中维生素C含量,通常以1000g样品中所含mg数表示:
维生素C的含量(mg·kg-1)=((V1-V2)×T×D)×1000/m
式中:
V1—滴定待测液所耗2,6-二氯靛酚溶液的ml数;
V2—空白试验所耗染料的体积(ml);
T—染料溶液的滴定度;
m—待测液相当于新鲜样品的重量(g);
D—分取倍数。
8、实验数据记录
表4抗坏血酸测定原始记录表
测定项目
序号
鲜样重(g)
待测液体积(ml)
待测液相当于新鲜样品的重量(g)
滴定所耗2,6-二氯靛酚溶液体积(ml)
分取倍数
标定所耗碘酸钾的量(ml)
已标定Vc标液浓度(mg·mL-1)
标定所需2,6-二氯靛酚溶液的量(ml)
滴定度(mg·mL-1)
相对误差
抗坏血酸的测定
1
2
空白
三、总酸度的测定
1.目的意义:
总酸度是指食品中所有酸性物质的总量,包括已解离的酸浓度和未解离的酸浓度。
果蔬中的总酸度测定可判断果蔬的成熟程度、新鲜程度以及是否符合质量要求。
2.方法选择:
酸碱滴定法
3.方法原理
待测样品加纯水磨细后,置于80℃的水浴上,保温30分钟,以提取有机酸。
提取液定容过滤后,取一定体积直接用0.1mol•L氢氧化钠溶液滴定,根据消耗的标准碱液的毫升数来确定其总酸度,并乘上0.067系数,换算为苹果酸表示。
4.仪器试剂
表5抗坏血酸测定仪器试剂表
仪器
试剂
仪器名称
数量
试剂名称
浓度
用量(ml)
常量滴定管
1
氢氧化钠标液
0.1mol·L-1
—
50ml烧杯
3
石英砂
—
—
250ml容量瓶,三角瓶
各3个
酚酞
—
—
干滤纸
3
纯水
—
—
十分之一天平
1
50ml移液管
1
5.操作步骤
取多个样品混合,洗去泥沙,立即擦干。
水果、蔬菜样品各纵横二厚片,切碎混匀,盛于瓷蒸发器皿或烧杯内,用差减法称取样品25g于研钵体内,加少许石英砂磨细至浆状,用水转入250ml容量瓶内,加纯水至约150ml,然后在80℃水浴上保温半小时,每隔5-10分钟摇动一次,促进其提取完全。
待瓶内溶液冷却后,加纯水至刻度,摇匀,经干过滤或脱脂棉过滤。
用移液管吸取50ml滤液于250ml容量瓶内,用0.1mol/L氢氧化钠溶液滴定,以酚酞作为指示终点,记录所消耗碱液的毫升数。
6.结果计算C×V×K×100
总酸(%)=
m
式中:
C氢氧化钠标准溶液的浓度(mol/L);
V滴定时所消耗的氢氧化钠标准溶液毫升数;
K换算为适当酸之系数;
M样品重
D分取倍数
柠檬酸0.064(含一分子水时为0.070)
苹果酸0.067
酒石酸0.075
7.实验数据记录
表6总酸度定原始记录表
测定项目
序号
植物鲜样重(g)
滴定消耗氢氧化钠标液的体积(ml)
所用氢氧化钠浓度(mol·L-1)
换算为适当算的系数K
相对误差
总酸度的测定
1
2
空白
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