杞竹精口服液成品检验操作规程.docx
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杞竹精口服液成品检验操作规程.docx
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杞竹精口服液成品检验操作规程
目的:
制订杞竹精口服液成品检验操作规程。
范围:
适用于杞竹精口服液成品的检验。
责任人:
检验员。
程序:
1性状:
每批取口服液5盒,在距离25cm自然光亮处下,用目测法观察,为无杂质的淡黄色透明液体。
2限度检查
2.1装量:
取供试品5支,开启时注意避免损失,将内容物分别用干燥并预经标化的注射器抽尽。
读出每个容器内容物的装量,并求其平均装量。
平均装量应不少于标示装量且每支装量不少于9.5ml但不超过10.5ml。
如有1支装量不符合规定,则另取5支复试,应全部符合规定。
2.2PH值测定
2.2.1PH标准缓冲液:
将已分装好的邻苯二甲酸氢钾、磷酸盐缓冲液(PH6.8)分别用煮沸放冷的纯化水溶解并稀释至250ml。
2.2.2仪器:
PHS—3C型酸度计及其复合电极。
2.2.3操作步骤:
打开酸度计电源,将温控旋钮调至室温,预热半小时。
在测定前先用邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液(PH4.0)进行校正(定位),再用磷酸盐缓冲液(PH6.8)核对仪器示值,误差应不大于±0.02pH单位。
符合规定后取供试液测定,显示的数字稳定时读取,连续测定三次,取其平均值,PH值应为4.5~6.5。
2.2.4注意事项及建议
2.2.4.1酸度计的精密度和准确度应符合要求,每年检定一次。
2.2.4.2用新沸过的冷纯化水配制标准缓冲液,每次更换标准缓冲液和供试液前应用纯化水充分洗涤电极,然后用滤纸角将水吸尽。
2.2.4.3仪器定位时应使仪器示值与标准规定温度下的数值一致。
再用磷酸盐缓冲液(PH6.8)核对仪器示值,误差应不大于±0.02PH单位。
若大于此偏差,则应小心调节斜率,使示值与第二种标准缓冲液的各温度下的标准数值相符。
重复上述定位与斜率调节操作,至仪器示值与标准缓冲液的规定数值相差不大于±0.02pH单位否则,需检查仪器或更换电极后,再行校正至符合要求。
2.2.4.4标准缓冲液配制后可使用2~3个月,但发现有浑浊、发霉和沉淀现象时,不能继续使用。
2.2.4.5复合电极使用期限为一年。
2.3澄明度:
用灯检法进行检查。
2.3.1将待检的瓶子放入瓶斗内,当进瓶斗内的瓶子小于1/2时应及时加满。
2.3.2打开总电源,灯检室内灯光亮,拨瓶电机运转。
2.3.3用脚踩动脚踏开关,主机运转,等距螺杆开始送瓶,灯检开始。
2.3.4被检瓶子送到灯检区,通过放大镜观察,溶液应透明无杂质。
2.4砷:
采用银盐法。
2.4.1原理:
锌与酸作用产生新生态氢。
在碘化钾和氯化亚锡存在下,使五价砷还原为三价。
三价砷与新生态氢生成砷化氢气体。
通过用乙酸铅溶液浸泡的棉花去除硫化氢的干扰,然后与溶于三乙醇胺-氯仿中的二乙氨基二硫代甲酸银作用。
生成棕红色的胶态银,比色定量。
2.4.2仪器:
分光光度计、砷化氢发生器。
2.4.3试剂
2.4.3.1无砷锌粒。
2.4.3.2硝酸-高氯酸混合液(4+1):
量取80ml硝酸,加20ml高氯酸,混匀。
2.4.3.3碘化钾溶液:
称取15g碘化钾(KI),溶于纯水中并稀释至100ml,贮于棕色瓶内。
2.4.3.4酸性氯化亚锡溶液:
称取40g氯化亚锡(SnCl2·2H2O),加盐酸溶解并稀释至100ml,投入数粒金属锡粒。
2.4.3.5乙酸铅棉花:
将脱脂棉浸入10%乙酸铅溶液中,压除多余溶液,并使疏松,在100℃以下干燥后,贮存于玻璃瓶中。
2.4.3.6硫酸(6+94):
量取6.0ml硫酸加于80ml水中,冷后再加水稀释至100ml。
2.4.3.7吸收溶液:
称取0.25g二乙二硫代氨基甲酸银(C5H10NS2·Ag)置研钵中,研碎后用少量氯仿溶解,移入100ml量筒中,加入8ml三乙醇胺,再用氯仿分次洗涤研钵,洗液一并移入量筒中,再用氯仿稀释到100ml,放置过夜。
过滤至棕色瓶内,贮存于冰箱中。
2.4.3.8砷标准贮备溶液:
准确称取0.1320g经105℃干燥2h的三氧化二砷(As2O3),加5ml20%氢氧化钠溶液,溶解后加25ml硫酸(6+94),移入1000ml容量瓶中,加新煮沸冷却的水稀释至刻度,贮存于棕色玻塞瓶中。
此溶液每毫升相当于0.10mg砷。
2.4.3.9砷标准溶液:
吸取1.0ml砷标准贮备液,置于100ml容量瓶中,加1ml硫酸(6+94),加水稀释至刻度,此溶液每毫升相当于1.0µg砷。
2.4.4试样处理:
吸取5ml样品,置于250ml定氮瓶中,先加水少许湿润,加数粒玻璃珠、5ml硝酸-高氯酸混合液,摇匀。
缓缓加入5ml硫酸,待作用缓和停止起泡沫后,先用小火缓缓加热(糖分易炭化),不断沿瓶壁补加硝酸-高氯酸混合液,待泡沫全部消失后,再加大火力,至有机质分解完全,发生白烟,溶液应澄明无色或微带黄色,放冷加20ml水煮沸,除去残余的硝酸至产生白烟为止,如此处理两次,放冷。
将冷后的溶液移入50ml容量瓶中,用水洗涤定氮瓶,洗液并入容量瓶中,放冷,加水至刻度,混匀。
定容后的溶液每10ml相当于1g试样,相当加入硫酸量1ml。
取与消化试样相同量的硝酸-高氯酸混合液和硫酸,按同一方法做试剂空白试验。
2.4.5分析步骤:
吸取一定量的消化后的定容溶液(相当于5g试样)及同量的试剂空白液,分别置于150ml锥形瓶中,补加硫酸至总量为5ml,加水至50ml~55ml。
2.4.5.1标准曲线的绘制:
吸取0、1.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml砷标准溶液(相当于0、1.0、4.0、6.0、8.0、10.0µg),分别置于150ml锥形瓶中,加水至40ml,再加10ml硫酸(1+1)。
2.4.5.2用湿法消化液:
于试样消化液、试剂空白液及砷标准溶液中各加3ml碘化钾溶液(150g/L)、0.5ml酸性氯化亚锡溶液,混匀,静置15min。
各加入3g锌粒,立即分别塞上装有乙酸铅棉花的导气管,并使管尖端插入盛有4ml银盐溶液的离心管中的液面下,在常温下反应45min后,取下离心管,加氯仿补足4ml。
用1㎝比色杯,以零管调节零点,于波长520nm处测吸光度,绘制标准曲线。
2.4.5.3注意:
颗粒大小不同的锌粒在反应中所需要的酸量不同,一般为4~10ml,需在使用前用标准溶液进行预试验,以选择适宜的酸量。
2.4.6结果计算
(A1-A2)×1000
X=
m×V2/V1×1000
式中:
X───试样中砷的含量(mg/kg或mg/L);
A1───测定用试样消化液中砷的质量(μg);
A2───试剂空白液中砷的质量(μg);
m───试样质量或体积(g或ml);
V1───试样消化液的总体积(ml);
V2───测定用试样消化液的总体积(ml)。
计算结果保留两位有效数字。
2.4.7精密度:
在重复性条件下获得的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
2.5铅:
采用二硫腙比色法
2.5.1原理:
样品经消化后,在pH8.5~9.0时,铅离子与二硫腙生成红色络合物,溶于氯仿。
加入柠檬酸铵、氰化钾和盐酸羟胺等,防止铁、铜、锌等离子干扰,与标准系列比较定量。
2.5.2试剂
2.5.2.1盐酸(1+1):
量取100mL盐酸,加入100mL水中。
2.5.2.2酚红指示液(1g/L):
称取0.10g酚红,用少量多次乙醇溶解后移入100mL容量瓶中并定容至刻度。
2.5.2.3盐酸羟胺溶液(200g/L):
称取20g盐酸羟胺,加水溶解至50mL,加2滴酚红指示液,加氨水(1+1),调pH至8.5~9.0(由黄变红,再多加2滴),用二硫腙—氯仿溶液提取至氯仿层绿色不变为止,再用氯仿洗二次,弃去氯仿层,水层加盐酸(1+1)呈酸性,加水至100mL。
2.5.2.4柠檬酸铵溶液(200g/L):
称取50g柠檬酸铵,溶于100mL水中,加2滴酚红指示液,加氨水(1+1),调pH至8.5~9.0,用二硫腙—氯仿溶液提取数次,每次10~20mL,至氯仿层绿色不变为止,弃去氯仿层,再用氯仿洗二次,每次5mL,弃去氯仿,加水稀释至250mL。
2.5.2.5氰化钾溶液(100g/L):
称取10.0g氰化钾,用水溶解后稀释至100mL。
2.5.2.6氯仿:
不应含氧化物。
2.5.2.6.1检查方法:
量取10mL氯仿,加25mL新煮沸过的水,振摇3min,静置分层后,取10mL水液,加数滴碘化钾溶液(150g/L)及淀粉指示液,振摇后应不显蓝色。
2.5.2.6.2处理方法:
于氯仿中加入1/10~1/20体积的硫代硫酸钠溶液(200g/L)洗涤,再用水洗后加入少量无水氯化钙脱水后进行蒸馏,弃去最初及最后的1/10馏出液,收集中间馏出液备用。
2.5.2.7淀粉指示液:
称取0.5g可溶性淀粉,加5mL水搅匀后,慢慢倒入100mL沸水中,随倒随搅拌,煮沸,放冷备用。
临用时配制。
2.5.2.8二硫腙氯仿溶液(0.5g/L):
保存冰箱中,必要时用下述方法纯化。
称取0.5g研细的二硫腙,溶于50mL氯仿中,如不全溶,可用滤纸过滤于250mL分液漏斗中,用氨水(1+99)提取三次,每次100mL,将提取液用棉花过滤至500mL分液漏斗中,用盐酸(1+1)调至酸性,将沉淀出的二硫腙用氯仿提取2~3次,每次20mL,合并氯仿层,用等量水洗涤二次,弃去洗涤液,在50℃水浴上蒸去氯仿。
精制的二硫踪置硫酸干燥器中,干燥备用。
或将沉淀出的二硫腙用200,200,100mL氯仿提取三次,合并氯仿层为二硫腙溶液。
2.5.2.9二硫腙使用液:
吸取1.0mL二硫腙溶液,加氯仿至10mL混匀。
用1cm比色杯,以氯仿调节零点,于波长510nm处测吸光度(A),用下式算出配制100mL二硫腙使用液(70%透光率)所需二硫腙溶液的毫升数(V)。
10×(2-lg70)1.55
V==
AA
2.5.2.10铅标准溶液:
精密称取0.1598g硝酸铅,加10mL硝酸(1+99),全部溶解后,移入100mL容量瓶中,加水稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于1.0mg铅。
2.5.2.11铅标准使用液:
吸取1.0mL铅标准溶液,置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于10.0μg铅。
2.5.3仪器
2.5.3.1所用玻璃仪器均用硝酸(10%~20%)浸泡24h以上,用自来水反复冲洗,最后用水冲洗干净。
2.5.3.2分光光度计。
2.5.4分析步骤
2.5.4.1样品预处理:
量取1.0~5.0ml样品于瓷坩埚中,加2~4mL硝酸浸泡1h以上,先小火炭化,冷却后加1.00~3.00g过硫酸铵盖于上面,继续炭化至不冒烟,转入马弗炉,500℃恒温2h,再升至800℃,保持20min,冷却,加2~3mL硝酸(1.0mol/L),用滴管将样品消化液洗入或过滤入(视消化后样品的盐分而定)10~25mL容量瓶中,用水少量多次洗涤瓷坩埚,洗液合并于容量瓶中并定容至刻度,混匀备用;同时作试剂空白。
2.5.4.2样品消化:
同砷测定项下的试样处理。
2.5.5测定:
吸取10.0mL消化后的定容溶液和同量的试剂空白液,分别置于125mL分液漏斗中,各加水至20mL。
吸取0,0.10,0.20,0.30,0.40,0.50mL铅标准使用液(相当0,1,2,3,4,5μg铅),分别置于125mL分液漏斗中,各加1mL硝酸(1+99)至20mL。
于样品消化液、试剂空白液和铅标准液中各加1.0mL柠檬酸铵溶液(200g/L),1.0mL盐酸羟胺溶液(200g/L)和2滴酚红指示液,用氨水(1十1)调至红色,再各加1.0mL氰化钾溶液(100g/L),混匀。
各加5.0mL二硫腙使用液,剧烈振摇1min,静置分层后,氯仿层经脱脂棉滤入1cm比色杯中,以氯仿调节零点于波长510nm处测吸光度,各点减去零管吸收值后,绘制标准曲线或计算一元回归方程,样品与曲线比较。
2.5.6计算
(m1-m2)×1000
X=
m3×V2/V1×1000
式中:
X——样品中铅的含量,mg/Kg或mg/L;
m1——测定用样品消化液中铅的质量,μg;
m2——试剂空白液中铅的质量,μg;
m3——样品质量(体积),g(mL);
V1——样品消化液的总体积,mL;
V2——测定用样品消化液体积,mL。
计算结果保留二位有效数。
2.5.7精密度:
在重复性条件下获得的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
2.6铜的测定:
采用二乙胺基二硫代甲酸钠法。
2.6.1原理:
样品经消化后,在碱性溶液中铜离子与二乙胺基二硫代甲酸钠生成棕黄色络合物,溶于四氯化碳,与标准系列比较定量。
2.6.2试剂
2.6.2.1柠檬酸铵、乙二胺四乙酸二钠溶液:
称取20g柠檬酸铵及5g乙二胺四乙酸二钠溶于水中,加水稀释至100ml。
2.6.2.2硫酸(1+17):
量取20ml硫酸,缓缓加入300ml水中,冷后再加水稀释至360ml。
2.6.2.3酚红指示液(1g/L):
称取0.1g酚红,用乙醇溶解至100ml。
2.6.2.4铜试剂溶液:
0.1%二乙胺基二硫代甲酸钠[(C2H5)2NCS2Na·3H2O]溶液,必要时可过滤,贮存于冰箱中。
2.6.2.5铜标准溶液:
精密称取1.0000g金属铜(99.99%),分次加入硝酸(4+6)溶解,总量不超过37ml,移入1000ml容量瓶中,用水稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于1.0mg铜。
2.6.2.6铜标准使用液:
吸取10.0ml铜标准溶液,置于100ml容量瓶中,加0.5%硝酸稀释至刻度。
摇匀如此再稀释一次,至每毫升相当于10μg铜。
2.6.2.7硝酸(3+8):
量取60ml硝酸,加水稀释至160ml。
2.6.3仪器:
分光光度计。
2.6.4操作方法
2.6.4.1样品消化:
同铅的测定。
2.6.4.2测定:
吸取10.0ml消化后的定容溶液和同量的试剂空白液,分别置于125ml分液漏斗中,加水稀释至20ml。
吸取0.00、0.50、1.00、1.50、1.00、1.50ml铜标准使用液(相当0、5、10、15、20、25μg铜),分别置于125ml分液漏斗中,各加2N硫酸至20ml。
于样品消化液、试剂空白液和铜标准液中,各加5ml柠檬酸铵、乙二胺四乙酸二钠溶液和3滴酚红指示液,混匀,用1:
1氨水调至红色。
各加2ml铜试剂溶液和10.0ml四氯化碳,剧烈振摇2min,静置分层后,四氯化碳层经脱脂棉滤入2cm比色杯中,以零管调节零点,于波长440nm处测吸光度,绘制标准曲线比较。
2.6.5计算
(A1-A2)×1000
X=──────────
m×(V1/V2)×1000
式中:
X——样品中铜的含量,mg/kg或mg/l;
A1——测定用样品消化液中铜的含量,μg;
A2——试剂空白液中铜的含量,μg;
m——样品质量(体积),g(ml);
V1——样品消化液的总体积,ml;
V2——测定用样品消化液体积,ml。
计算结果保留二位有效数。
2.6.6精密度:
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
3功效成分
3.1氨基酸
3.1.1茚三酮试验
3.1.1.1概述:
α氨基酸与茚三酮的水合作物作用,氨基酸氧化成醛、氨和二氧化碳,而茚三酮被还原成仲醇,与所后成的氨及另一分子茚三酮缩合生成有蓝紫色的化合物。
3.1.1.2检验方法:
取检品的水溶液1ml,加入茚三酮试液2-3滴,加热煮沸4-5分钟,待其冷却,呈现红色棕色或蓝紫色。
3.1.1.3注意事项:
茚三酮试剂主要是多肽和氨基酸的显色剂,反应在1小时内稳定。
试剂溶液pH值以5~7为宜,必要时可加吡啶数滴或醋酸钠调整;此反应非常灵敏,但有个别氨基酸不能呈紫色,而呈黄色,如脯氨酸。
3.1.2氨基酸薄层层析检出反应
3.1.2.1吸附剂:
硅胶G。
3.1.2.2展开剂:
正丁醇:
水(1:
1)或正丁醇:
醋酸:
水(4:
1:
5)。
3.1.2.3显色剂:
0.5%茚三酮丙酮溶液,喷雾后于110℃烘箱放置5分钟,显蓝紫色或紫色。
3.2蛋白质
3.2.1加热或矿酸试验:
取样品1ml于试管中,加热至沸或加5%盐酸,应发生混浊或有沉淀。
3.2.2缩二脲试验:
3.2.2.1原理:
蛋白质结构中含有的肽键(-CONH-)在碱性溶液中与Cu2+生成络合物,呈现一系列的颜色反应,二肽呈蓝色,三肽呈紫色,多肽以上呈红色,肽键越多颜色越红。
3.2.2.2检查方法:
取样品1ml,加10%氧化钠溶液2滴,充分摇匀,逐渐加入硫酸铜试液,随加摇匀,应呈现紫色或紫红色。
3.3钙
3.3.1鉴别:
取铂丝,用盐酸湿润后,蘸取供试品,在无色火焰中燃烧,火焰即显砖红色。
3.3.2鉴别:
取样品10ml,加甲基红指示液2滴,用氨试液中和,再滴加盐酸至恰呈酸性,加草酸铵试液,即生成白色沉淀;分离,沉淀不溶于醋酸,但可溶于盐酸。
3.4铁
3.4.1鉴别:
取样品5ml,加亚铁氰化钾试液,即生成深蓝色沉淀;分离,沉淀在稀盐酸中不溶,但加氢氧化钠试液,即分解成棕色沉淀。
3.4.2鉴别:
取样品5ml,加硫氰酸铵试液,即显血红色。
3.5锌
3.5.1鉴别:
取样品5ml,加亚铁氰化钾试液,即生成白色沉淀;分离,沉淀在稀盐酸中不溶解。
3Zn2++2K4[Fe(CN)6]→K2Zn[Fe(CN)6]2↓(白色)+6K+
3.5.2鉴别:
取样品5ml,以稀盐酸酸化,加0.1%硫酸铜溶液1滴及硫氰酸铵试液数滴,即生成紫色沉淀。
4卫生学检验
4.1菌落总数。
4.1.1设备和材料:
培养箱、恒温水浴、吸管、三角瓶、平皿、试管、酒精灯、试管架。
4.1.2培养基和试剂:
营养琼脂培养基、灭菌生理盐水、75%乙醇。
4.1.3操作步骤
4.1.3.1检样稀释及培养:
以无菌操作,取5支样品,倾出溶液混匀,吸取10ml至灭菌三角瓶中,加入灭菌生理盐水90毫升,使成1∶10均匀供试液;用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水(注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管,混合均匀,做成1∶100的稀释液;另取1mL灭菌吸管,按上条操作顺序,做10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1mL火菌吸管。
根据对供试品污染情况的估计,从供试液起选择2~3个适宜稀释度进行,分别在做10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。
稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养48±2h。
4.1.3.2菌落计数方法:
做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏。
在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
4.1.3.3菌落计数的报告
4.1.3.3.1平板菌落数的选择:
选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落;如果有不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计。
4.1.3.3.2稀释度的选择:
应选择平均菌落数在30~300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之; 若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30~300之间,则视两者之比如何来决定。
若其比值小于或等于2,应报告其平均数;若大于2则报告其中较小的数字;若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之;若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之;若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之;若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
4.1.3.3.3菌落数的报告:
菌落数在100以内时,按其实有数报告;大于100时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算。
为了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示。
4.2霉菌(酵母菌)。
4.2.1设备和材料:
玻塞三角瓶、试管、平皿、吸管、酒精灯、试管架。
4.2.2培养基和试剂:
孟加拉红培养基、灭菌生理盐水、乙醇。
4.2.3操作步骤:
以无菌操作,用灭菌吸管吸取细菌总数测定项下的1∶10稀释液10mL,注入试管中,另用1mL灭菌吸管反复吹吸50次,使霉菌孢子充分散开;取1mL1∶10稀释液注入含有9mL灭菌盐水的试管中,另换一支1mL灭菌吸管吹吸5次,此液为1∶100稀释液。
按上述操作顺序做10倍递增稀释液,每稀释一次,换用一支1mL灭菌吸管,根据对样品污染情况的估计,选择3个合适的稀释度,分别在做10倍稀释的同时,吸取1mL稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做2个平皿,然后将凉至45℃左右的培养基注入平皿中,待琼脂凝固后,倒置于25~28℃温箱中,3天后开始观察,共培养观察5天。
4.2.4计算方法:
通常选择菌落数在10~150之间的平皿进行计数,同稀释度的2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数,即为每克检样中所含霉菌和酵母数。
4.2.5报告:
每克样品所含霉菌和酵母数以个/g表示。
4.3大肠菌群。
4.3.1设备和材料:
培养箱、恒温水浴、吸管、三角瓶、平皿、试管、酒精灯、试管架。
4.3.2培养基和试剂:
乳糖胆盐发酵管、灭菌生理盐水、伊红美蓝琼脂、乳糖发酵管、接种环。
4.3.3操作步骤
4.3.3.1乳糖发酵试验:
取1mL细菌总数测定项下的各级稀释液接种于单料乳糖胆盐发酵管内,每一稀释度接种3管,置36±1℃温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
4.3.3.2分离培养:
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃温箱内,培养18~24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
4.3.3.3证实试验:
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1~2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。
凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
4.3.4报告:
根据证实为大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100g大肠菌群的MPN值。
4.4沙门氏菌。
4.4.1设备和材料:
培养箱、灭菌三角瓶、灭菌吸管、平皿、试管、试管架、酒精灯、接种环。
4.4.2培养基和试剂:
缓冲蛋白胨水、氯化镁孔雀绿(MM)增菌液、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液、亚硫酸铋琼脂、SS琼脂。
4.4.3操作步骤
4.4.3.1前增菌和增菌:
吸取样品5ml至装有45mL缓冲蛋白胨水的三角瓶内。
微温使溶解,摇匀于36±1℃培养4h,移取5mL,转种于50mL氯化镁孔雀绿增菌液内,于42℃培养18~24h。
同时,另取5mL,转种于50mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液内,于36±1℃培养18~24h。
4.4.3.2分离:
取增菌液1环,划线接种于一个亚硫酸铋琼脂平板和一个SS琼脂平板。
两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。
于36±1℃分别培养18~24h或40~48h(BS),观察各个平板上生长的菌落,沙门氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ
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