血脂康与辛伐他汀的治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的研究.docx
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血脂康与辛伐他汀的治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的研究
血脂康与辛伐他汀治疗大鼠脑缺血-再灌注损伤的研究
第31卷第17期
2006年9月
中国中药杂志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vo1.31,Issue17
September,2006
血脂康与辛伐他汀治疗大鼠脑缺血一再灌注
损伤的研究
周富友,张进,宋涛,高峰,吴继敏
(1.浙江大学医学院附属第二医院,浙江杭州310009;
2.中南大学附属湘雅医院,湖南长沙410008)
[摘要]目的:
比较血脂康与辛伐他汀对大鼠脑缺血.再灌注损伤的作用,并观察.硝基精氨酸甲酯(—
NAME)干预的影响.方法:
大鼠每日用血脂康(2.4g?
kg),辛伐他汀(80mg?
kg)或生理盐水连续灌胃2周,
血脂康和辛伐他汀治疗的大鼠各取一半于脑缺血前45min经侧脑室注射L—NAME,后用线栓法制作大鼠脑缺血-再
灌注损伤模型;于再灌注后2,24,48h进行神经功能评分;采用TTC染色法测定脑梗死体积并检测脑组织脂质过氧
化产物丙二醛含量.结果l血脂康与辛伐他汀均能减少大鼠脑缺血.再灌注损伤后的脑梗死体积和脑组织脂质过
氧化产物含量,并改善功能,与溶媒组比较有显着性差异;L-NAME能部分抑制血脂康和完全抑制辛伐他汀的上述
保护作用.结论:
血脂康对大鼠脑缺血.再灌注损伤具有保护作用,其保护作用部分与其含他汀类成分有关.
[关键词]血脂康;他汀类;脑缺血
[中图分类号]R285.5[文献标识码]A[文章编号]1001.5302(2006)17—1447-04
大量研究表明,他汀类药物可降低脑卒中的发
病率,且具有不依赖于其降脂作用的神经保护效
应.血脂康是从特制红曲中提炼精制而成的生
物制剂,富含他汀类的血脂调节剂,其主要成分为
HMG—CoA还原酶抑制剂洛伐他汀,同时伴有少量的
其他他汀类成分,还有多种不饱和脂肪酸,氨基酸和
微量元素.自上市以来,经国内外大量的临床试
验证实,血脂康可安全,稳定,显着地降低血脂,并在
治疗糖尿病,肾病综合征合并血脂异常及脂肪肝等
方面也取得了可喜的疗效,表明血脂康具有多效
性作用.然而血脂康是否与他汀类药物一样具有与
降脂无关的脑保护作用以及相似的疗效,至今未见
文献报道.本试验通过观察血脂康与辛伐他汀对血
脂正常大鼠脑缺血,再灌注损伤的影响,探讨血脂康
用于治疗缺血陛脑损伤的可行性及机制,为临床脑
缺血的治疗提供新的手段.
1材料与方法
1.1动物及分组健康雄性SD大鼠72只,体重
[收稿日期]2005—11-24
[基金项目]浙江省医药卫生科学研究基金项目计划(2005
A051)
[通讯作者]张进,Tel:
(0571)87784810,Fax:
(0571)
87784751,E—mail:
medic@tom.corn
300—350g(浙江大学实验动物中心提供).随机
分为生理盐水组,辛伐他汀组,血脂康组,辛伐他汀
+£,硝基精氨酸甲酯(L—NAME)组,血脂康+£.
NAME组和假手术组,每组各l2只.
1.2大鼠脑缺血一再灌注损伤模型的制备参照
Longa等描述的腔内线栓法,麻醉动物后将3-0手
术尼龙线由右侧颈外动脉插入至右侧大脑中动脉起
始部,阻闭右侧大脑中动脉.阻闭120min后,再次
麻醉动物,将尼龙线缓慢拔出再灌注.术中肛温保
持37—37.5℃.假手术组动物仅分离出颈总动脉
和颈外动脉,不插线栓.
1.3药物与给药方法血脂康(北大维信生产,批
号041202),辛伐他汀(默沙东公司产品),非选择性
一
氧化氮合酶(NOS)抑制剂L—NAME(Sigma公
司),丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京建成生物工程
研究所).用生理盐水3mL将血脂康(1.2g)或辛
伐他汀(40mg)分别配成混悬液,两药分别以每日
2.4g?
kg和80mg?
kg灌胃,假手术组与生理
盐水组给予等体积的生理盐水,连续2周.L—NAME
用生理盐水配制成5mg?
L的溶液,以0.4{xg?
kg剂量,按文献方法[5]于大脑中动脉闭塞前45
min经侧脑室注射给药,注射时间为10min,其余各
组侧脑室注射等体积生理盐水.
.
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2006年9月
中国中药杂志
ChinaJournaIofChineseMateriaMedica
Vo1.31,lssue17
September,2006
1.4神经功能评价再灌注后,分别在2,24,48h
采用Longa的5级神经缺陷评分法对大鼠进行神经
功能评分J.
1.5脑梗死灶体积测定再灌注48h后,随机将
每组动物的一半(6只)断头取脑置于冰盐水中,去
掉嗅球,小脑和低位脑干,取冠状面按解剖位置均匀
切成约2mm厚脑片,迅速放人2%氯化三苯基四氮
唑(TI’C)溶液(37℃)中闭光孵育30min,然后用
10%甲醛溶液固定,用数码相机拍照,输入计算机,
用图像处理软件(AdobePhotoshop7.0)计算各脑片
梗死面积,各脑片梗死面积之和乘以厚度(2mm)为
总的梗死体积.
1.6脑组织MDA测定再灌注48h后,将每组动
物的另一半(6只)断头取脑,去嗅球,小脑和低位脑
干,用冷生理盐水漂洗,除去血液,滤纸拭干后称重,
加9倍体积预冷的生理盐水,用玻璃匀浆器制成
10%的匀浆.用台式高速离心机4000r?
min离
心15min,取出上清液,一20℃保存.MDA}贝0定按
试剂盒说明书进行.
1.7统计学处理所有数据均表示为元±s.多组
间采用单因素方差分析(ANOVA),方差分析有显着
差异时,用Student—Newman.Keuls法作两两比较,神
经功能评分采用Kruska1.Wallis非参数检验.
2结果
2.1血脂康,辛伐他汀对大鼠脑缺血一再灌注后神
经缺陷评分的影响各组大鼠除假手术组外,麻醉
清醒后不同程度出现精神状态低靡,提尾时损伤对
侧前肢不能伸直,走路向对侧旋转或倾倒.再灌注
2h各组大鼠神经功能评分无显着性差异;再灌注
24h,生理盐水组大鼠评分无显着变化,而血脂康与
辛伐他汀组大鼠评分比2h时有所降低,与生理盐
水组比较有显着性差异(P<0.01,P<0.05),加用
L.NAME能抑制血脂康与辛伐他汀对评分的降低作
用,且对辛伐他汀的抑制作用更为显着(P<0.05);
再灌注48h各组大鼠评分较前2个时间点均有所
降低,血脂康与辛伐他汀组降低尤为明显,与生理盐
水组比较有显着性差异(P<0.05,P<0.01),L.
NAME抑制血脂康与辛伐他汀对评分的降低作用,
且对辛伐他汀的抑制作用更为显着(P<0.05).结
果见表1.
表1血脂康,辛伐他汀对大鼠脑缺血.再灌注神经缺陷评分的影响(±s,n=12)
注:
与生理盐水组比IJP<0.05,P<0.01;与对应的不加,J—NAME组比j】P<0.05
2.2血脂康,辛伐他汀对大鼠脑梗死体积及脑组织(P<0.01),而L—NAME几乎完全取消了辛伐他汀
MDA的影响再灌注48h后,生理盐水组大鼠脑降低MDA的作用,辛伐他汀+L—NAME组与生理盐
梗死体积达(267.6±25.9)mm,假手术组无梗死水组MDA比较无显着性差异.见表2.
灶.血脂康与辛伐他汀与生理盐水比较均明显缩小表2血脂康,辛伐他汀对大鼠脑梗死体积及脑
脑梗死体积(P<0.01),而血脂康与辛伐他汀组之组织MDA的影响(=ks,n=6)
间无显着性差异;L—NAME部分取消血脂康的保护
作用,而L—NAME几乎完全取消了辛伐他汀的保护
作用,辛伐他汀+L.NAME组与生理盐水组比较无
显着性差异.各组脑缺血.再灌注后大鼠的脑组织
MDA均明显升高,与假手术组比较有显着性差异
(P<0.01);血脂康和辛伐他汀与生理盐水组比较
均明显减少MDA的升高(P<0.01),L.NAME对血
脂康降低MDA的作用有所抑制,但无显着性差异;
血脂康+L.NAME组MDA仍明显低于生理盐水组
?
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剂量梗死体积MDA
组别
/g....d一/mm3/nmo1.tug一/g’_.’_.’一
注:
与生理盐水组比P<0.01;与对应的不加L-NAME组比
‘P<0.
05.’P<0.01与假手术组比’P<0.01
第31卷第17期
2006年9月
中国中药杂志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vo1.31,Issue17
September,2006
3讨论
临床和实验均表明J,无论血脂水平的高低,
他汀类药物都能降低脑卒中的发生率并对脑缺血有
保护作用.他汀类药物上调脑组织中内皮源性一氧
化氮合酶(eNOS)的表达,促进内皮源性NO的释放
可能是其脑保护作用的关键J.近来发现,血脂康
同样具有非降脂作用的多效性,且能够提高血中
NO水平],因此,作者推测血脂康同样具有与他汀
类药物类似不依赖与降脂的脑保护作用.本研究结
果显示,血脂康与辛伐他汀均能显着减少脑缺血一再
灌注后的梗死体积,并能显着改善脑缺血后的神经
缺陷,两者在所选用剂量上保护效应无显着差异.
脑内的MDA作为自由基与生物膜不饱和脂肪
酸发生脂质过氧化反应的代谢产物,其含量变化可
间接反映脑组织中氧自由基含量的变化和脑组织的
损伤程度.本研究通过检测脑缺血一再灌注后大鼠
脑组织中的MDA发现,血脂康与辛伐他汀用药2周
均能降低脑组织MDA,说明两者的脑缺血损伤保护
作用与降低脑缺血一再灌注后的脂质过氧化程度有
关.研究中还发现,经侧脑室注射L.NAME能基本
取消辛伐他汀的保护作用,与文献报道基本一
致,但只能部分取消血脂康的保护作用.文献表
明,1.2g血脂康中的他汀类含量与20mg辛伐他汀
相当,因此本研究所选用血脂康剂量中的他汀类
足以被L.NAME所阻断.一k述现象提示,血脂康的
脑保护作用可能部分与其他汀类成分产生的NO途
径有关,另外还有不依赖与NO途径的脑保护作用
可能与其他成分有关.血脂康中他汀类以外的哪些
成分,通过何种途径也参与了脑缺血保护作用,尚有
待于进一步研究.
本研究首次在血脂正常大鼠脑缺血.再灌注模
型上观察了血脂康的脑缺血保护作用,表明血脂康
具有不依赖于降脂作用的脑保护效应,其保护作用
除部分与其中的他汀类成分有关,还可能与其他成
分有关.血脂康的安全性高,尚未发现明显不良反
应,因此对其深人的研究很可能扩大该药的临床应
用范围.
[参考文献]
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EffectsofXuezhikangandsimvastatinoncerebral
ischemia-reperfusioninjuryinrat
ZHOUFu—you,ZHANGJin,SONGTao,GAOFeng,WUJi—min
(1.DepartmentofNeurology,SecondAffiliatedHospitalZhejiangUniversityCollegeofMedicine,Hangzhou310039,China;
2.DepartmentofNeurology,XiangyaHospitalofCentre—southUniversity,Changsha410008,China)
[Abstract]Objective:
ToobservetheeffectsofXuezhikangandsimvastatinoncerebralischemia/reperfusioninjuryinrat,as
wellastheinfluencesafterinterventionwithL-NAME.Method:
RatsweregivenorallywithXuezhikangandsimvastatinorvehiclefor
2weeks,andthensubjectedtomiddlecerebralarteryocclusionfor120minusingintraluminalfilamentmode1.L-NAMEwereinjected
?
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第31卷第l7期
2006年9月
中国中药杂志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vo1.31,Issue17
September,2006
intothelateralventriclesinhalfoftheratstreatedwithXuezhikangandsimvastatin45minbeforetheischemia.Theneurologicaldeft-
citsexaminationswereperformedat2,24,48hafterreperfusion.Afterthelastexaminationtheanimalsweresacrificed,
thei~arct
volumesweredeterminedbyTFCstaining,andMDAlevelswerealsomeasured.Reset:
Xuezhikangandsimvastatinbothsignificantly
reducedtheinfarctvolumeandimprovedthefunctionalrecoverywhencomparedtovehicle.Xuezhikangandsimvastatinbothsignifi-
candydecreasedtheMDAaccumulationafterreperfusion.L-NAMEpartiallyinhibitedtheprotectiveeffectofXuezhikangbutnearly
completelyabolishedtheprotectiveeffectofsimvastatin.Conclusion:
Xuezhikanghasprotectiveeffectsonischemicbraindamagein
rats,whichthebeneficialeffectsarepartlyduetothestatinscomponents.TheothercomponentsinXuezhikangmayalsoaccountfor
theneuroprotectiveeffects,whichisworthfurtherinvestigations.
[Keywords]Xuezhikang;statins;cerebralischemia
[责任编辑古云侠]
粉背南蛇藤中新三萜化合物对RKO细胞
体外抗癌作用的研究
毛建山,王奎武,郑树¨,潘远江
(1.浙江大学医学院附属第二医院消化内科,浙江杭州310009;
2.浙江大学化学系,浙江杭州310027;3.浙江大学肿瘤研究所,浙江杭州310009)
[摘要]目的:
探讨粉背南蛇藤中新的三萜齐墩果-12一烯-3/3,6-二醇对人结肠癌细胞系RKO细胞的体外增
殖抑制作用和诱导凋亡作用.方法:
采用MTT法检测齐墩果-12-烯-313,6e~-二醇对体外培养人结肠癌细胞系RKO
细胞的增殖抑制作用,通过AO/EB双染色荧光显微镜,HE染色光学显微镜,DNA琼脂糖凝胶电泳,流式细胞仪分
析齐墩果-12.烯-313,6e~-二醇对RKO细胞的诱导凋亡作用及对细胞周期的影响.结果:
齐墩果一12-烯一3B,6一二醇
对RKO细胞生长抑制作用具有剂量依赖性和时间依赖性,作用48h时Ic.为(12.20±0.79)lag?
mL~;AO/EB
双染色,HE染色可见典型的肿瘤细胞凋亡改变;10lag?
mL.’的三萜处理RKO细胞48h即可出现明显的DNA梯
带,流式细胞仪可检测到亚二倍体峰,在10—20g?
mL内具有明显的量-效作用关系;并可见RKO细胞G.-G.
期,G-M期的细胞明显减少,而s期细胞无变化.结论:
粉背南蛇藤中新的三萜齐墩果-12-烯-313,6e~-二醇能抑制
人结肠癌细胞系RKO细胞增殖和诱导凋亡.
[关键词]齐墩果-12-烯-3/3,6e~-二醇;粉背南蛇藤;抗肿瘤;细胞凋亡;RKO细胞
[中图分类号]R285.5[文献标识码]A[文章编号]1001—5302(20o6)17—1450434
南蛇藤系卫矛科南蛇藤属CelastrusLinn植物,
我国约有30种,分布于全国各地,多数产自长江以
南地区,又名过山风,黄藤,苦树皮,穿山龙等.药用
其根,藤茎和叶.南蛇藤属普遍含有三萜,倍半萜,
生物碱和黄酮类等化合物,这些成分具有抗氧化活
性,抗炎,抗生育活性,抗肿瘤以及抗艾滋病毒等作
用,南蛇藤属是寻找天然活性成分的重要来源之
[收稿日期]20064)2-10
[基金项目]浙江省中医药科研基金项目(2004C094)
[通讯作者]邵树,Tel:
(0571)87784501,Fax:
(0571)
87074866,E-mail:
zhengshu@u.edu.CB
?
1450?
一
.笔者从粉背南蛇藤Celastrushypoleucus藤茎的
甲醇浸膏中分离到1个新的三萜齐墩果.12.烯一3,
6a.二醇(12一oleanene.3,6a.dio1),该化合物是首
次从南蛇藤属植物中分得,经CA检索确认是新的
化合物.本研究旨在研究这个新的三萜化合物对人
结肠癌细胞系RKO细胞的体外抗增殖作用和诱导
凋亡作用,为南蛇藤的临床抗肿瘤应用提供依据和
资料.
1材料与方法
1.1药材三萜化合物为齐墩果一12一烯一3B,6a一二
醇(12一oleanene一3B,6a—dio1),系从粉背南蛇藤(经
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