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在腐生菌孢脱水素类似蛋白甘蓝在植物发病机制中的作用和应激反应
高级植物保护学
在腐生菌孢脱水素类似蛋白甘蓝在植物发病机制中的作用和应激反应
摘要:
在这项研究中,在致病性和防止环境胁迫真菌脱水素样蛋白的作用进行了调查,对死体营养种子传播的真菌孢甘蓝。
三种蛋白质(称为AbDhn1,AbDhn2和AbDhn3),窝藏天冬酰胺-脯氨酸-精氨酸(DPR)的签名模式和共享的真菌脱水样蛋白的特征,被确定在A.甘蓝基因组。
这些基因的表达被诱导响应于各种应力,并发现由AbHog1促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径来调节。
出局的方式表明,脱水素样蛋白主要有氧化应激耐受性和对暴露于高和低温孢子生存的影响。
亚细胞定位表明AbDhn1和AbDhn2
均与过氧化物酶体,它是用保护性机制,以抵消氧化应激和保持在AbDhn突变体的氧化还原平衡的可能扰动一致。
最后,我们证明了双缺失突变体δδabdhn1-abdhn2的高度破坏其致病性。
通过比较野生型,该突变表现出对甘蓝叶子下部侵略性和通过长角果要被发送到的拟南芥种子的能力降低。
双突变体也受到影响相对于产孢,在该疾病的流行病学另一个关键步骤。
全文文献:
在这项研究中,在致病性和防止环境胁迫真菌脱水素样蛋白的作用进行了调查,对死体营养种子传播的真菌孢甘蓝。
三种蛋白质(称为AbDhn1,AbDhn2和AbDhn3),窝藏天冬酰胺-脯氨酸-精氨酸(DPR)的签名模式和共享的真菌脱水样蛋白的特征,被确定在A.甘蓝基因组。
这些基因的表达被诱导响应于各种应力,并发现由AbHog1促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径来调节。
出局的方式表明,脱水素样蛋白主要有氧化应激耐受性和对暴露于高和低温孢子生存的影响。
亚细胞定位表明AbDhn1和AbDhn2分别与过氧化物酶,它与保护机制,以抵消氧化应激和保持在AbDhn突变体的氧化还原平衡的可能扰动一致性相关联。
最后,我们证明了双缺失突变体ΔΔabdhn1-abdhn2的高度破坏其致病性。
通过比较野生型,该突变表现出对甘蓝叶子下部侵略性和通过长角果要被发送到的拟南芥种子的能力降低。
双突变体也受到影响相对于产孢,在该疾病的流行病学另一个关键步骤。
引用:
PochonS,西莫努P,PignéS,BalidasS,巴塔耶-西莫努N,等。
(2013)中的腐生菌孢脱水素样蛋白甘蓝在植物发病机理和应激反应一个角色。
PLoSONE的8(10):
e75143。
DOI:
10.1371/journal.pone.0075143编辑:
罗伯特·克拉默,医学盖泽尔学院达特茅斯,美国收稿日期:
2013年5月27日;接受:
2013年8月9日,发布时间:
2013年10月2日版权所有:
©2013Pochon等。
这是根据知识共享署名许可,允许无限制地使用,分发,并在任何媒介的复制的条款分发开放式访问的文章,提供的原始作者和出处,则计入。
资金:
这项工作是由法国地区区卢瓦尔河地区(QUALISEM研究计划)。
Thefunders曾在研究设计,数据收集和分析,发布的决定,或准备稿子没有任何作用。
相互竞争的利益:
作者声明,不存在利益竞争。
介绍
脱水蛋白属于大型胚胎发育晚期丰富(LEA)的蛋白家族[1]的2a和2b组,[2],它最初被描述为后期积累在植物种子发育。
他们还发现,在营养植物组织以下的环境压力,被认为在保护中发挥作用抵御寒冷和脱水有关的应力[3],[4],[5]。
该脱水家庭似乎是广泛分布的同源序列被发现在无脊椎动物和微生物的基因组序列[6]。
除了序列相似性,脱水蛋白共享典型的物理化学特性。
其氨基酸组成是这样其特征在于,甘氨酸,苏氨酸和丝氨酸的高百分比和半胱氨酸和色氨酸水平低残留物。
此外,它们表现出高的亲水性,缺乏二级结构的,高比例的无序的氨基酸,因此可以被视为本质上的非结构化蛋白(获IUP)。
混乱的在脱水蛋白区域可能构成具有形成大分子的作用柔性接头或垫片组件。
借助这种结构的可塑性,IUPs的可以作为强有力的伴侣[7]。
此外,一个植物2组LEA蛋白的显着特点是名为K段[8]通常是保守的赖氨酸,丰富的图案在N末端的蛋白质的发现。
在K段基序预计将形成两亲α-螺旋在真菌,脱水编码基因已在块茎borchii和烟曲霉中发现的搜索基因控制子实体成熟或分生孢子休眠[6],[11]。
近日,瓦滕贝格等[12]还发现在构巢曲霉一个金合欢醇引起脱水样蛋白(DLPA)。
同系物中发现子囊菌纲真菌,但不能在其它真菌谱系。
其氨基酸序列怀有重复和保守的天冬酰胺-脯氨酸-精氨酸(DPR)的基序,对应于真菌脱水签名图案[6],而一个相对贫穷的序列同源性为DPR图案之外普遍发现。
相应的转录通常积聚在相同的条件影响植物DHNs转录,例如在响应高渗,低温和盐胁迫。
三脱水样蛋白(DPRA,DPRB和DPRC)在构巢曲霉烟曲霉和DLPA鉴定也上调后,加二硫苏糖醇(DTT),蛋白错折叠的诱导剂,并且被描述为应力保护分子[11][12],[13]。
他们尤其有助于防止高pH,冷冻,渗透和氧化应激。
根据这些特性,它们被假定充当分子伴侣或膜稳定剂。
不同的位置已被分配给它们。
虽然DPRC是与空泡,DPRA和DPRB相关
在细胞质和过氧化物酶体中积累。
作者推测DPRA的外围协会和DPRB蛋白与由于缺乏过氧化物酶体靶向信号的过氧化物酶体。
DPRA的损失和DPRB未发现与减毒的毒力相关的小鼠中,尽管突变体的分生孢子过敏性杀死肺部吞噬细胞。
类似相关的载脂蛋白中发现的脂质结合A2类两亲性α-螺旋区域结构与膜[9]。
这个观察提出的假说认为,植物脱水蛋白的作用之一可能是通过与疏水表面[10]交互胁迫过程中涉及到膜的稳定。
该腐生性真菌链格孢甘蓝导致黑点病,是一种重要的经济十字花科品种的种子传播的病原体。
在主机感染,A.甘蓝是暴露在高浓度的防御的化合物,例如植物防御素和芥子油苷的分解产物,并克服了本领这些抗微生物的代谢产物是在确定的真菌毒力的关键因素。
种子传输也是一个重要的病原体健身的组成部分,为A甘蓝强烈地依赖于这个过程中,它的传播和长期存活[14]。
在这项研究中,我们确定了三个脱水编码基因(称为AbDhn1,AbDhn2和AbDhn3)在通过它们的序列相似性和理化特性A.甘蓝基因组。
表达分析表明,脱水素基因的转录是依赖于AbHog1MAP激酶和两个AbDHN2亚型可以通过mRNA的选择性剪接产生。
然后,我们调查了他们的在防止脱水有关的应力和作用,对于第一次,我们分析了它们的影响主机营养组织感染或种子传播过程中致病性。
结果
AbDhn1,AbDhn2和AbDhn3编码三脱水素样蛋白的camalexin诱导序列P3E9(GenBank登录号DY543081)以前显示的编码一个157个残基的蛋白表现出相似性脱水素样蛋白从块茎borchii[15]。
这种蛋白质,这里被称为AbDhn1,确实包含了两个氨基酸重复序列(图1)到相应的真菌脱水蛋白的签名模式[6]最近被任命为DPR域[11]。
BLAST搜索于进行在A.甘蓝自动注释基因组数据库(http:
//genome.jgi-psf.org/Altbr1)来检查蛋白质含有类似的图案。
除了被称为AB02513.1对应AbDhn1,2的蛋白其他的打击(AB08993.1和AB05365.1)被发现并命名AbDhn2和AbDhn3(GenBank登录号JX891381和JX891382),分别为。
编码后者蛋白的核苷酸序列,位于该进行重叠群和3'RACE的端部以获得C-末端编码序列。
完整的AbDhn3蛋白含有964个氨基酸,3DPR基序(图1)。
该自动标注在轨迹编码AB08993.1预测4个内含子。
第一链cDNA,用引物跨越整个扩增
编码序列产生的两个不同的产品约150bp的尺寸(图2A)。
核苷酸分析两个扩增子,并与相应的基因组序列比较的序列的建议AbDhn2基因包含两个常规54BP-57和BP-内含子附近的5'和3'端分别都即不存在于扩增的cDNA序列,以及第三长159bp的内含子只存在于较大的扩增产物(图2B)。
在A.甘蓝基因组组装的数据库和南部Blast搜索杂交(图S1)并没有透露任何额外AbDhn2编码序列,强烈暗示,这两个转录皆由AbDhn2mRNA前体的选择性剪接产生的。
这两个推测AbDhn2蛋白同种型含有453个氨基酸(α异构体)和400个氨基酸(β异构体)和5DPR基序(图1)。
一伸展的11氨基酸重复7次,也观察到在它们的序列的N-末端部分(图S2)。
[图略,见PDF]图1。
从A甘蓝三种脱水素样蛋白的无序分布。
病症的概率是根据残基位置绘制。
超出了红色阈值线残留这些地块预计将是无序。
DPR域(黑盒)的位置和预测TRG_PEX动机(阴影框)表示。
预测结合区域如下图由横条阴影根据预测得分。
在AbDhn2情节垂直虚线之间残留中缺少该ßisoform。
[图略,见PDF]图2。
该AbDhn2成绩单选择性剪接。
答:
PCR产物用电泳凝胶AbDhn2编码序列的扩增后获得基因组DNA(泳道g)或第一链cDNA(泳道RT)为模板,巷长:
DNA梯状条带。
B:
原理图拼接事件导致α和成熟的转录β形式表示。
外显子被表示为黑色或孵化箱。
从3A.甘蓝脱水素样蛋白的DPR结构域的比对显示于图3。
隔开从保守的结构域,这些蛋白的序列比较发现同源性非常差,并且产生显著路线(>50%的同一性和覆盖)序列只在基因组中检测到的密切相关的Pleosporales种(A.藜,小麦核腔菌,repentis,体育大圆肌,叶枯病nodorum病)。
然而他们都共享脱水蛋白,如高甘氨酸,苏氨酸和丝氨酸的典型特征含量,低半胱氨酸和色氨酸含量,高亲水性,即负GRAVY值(表1)。
此外,他们缺乏明确定义的三级结构所揭示的氨基酸比例高预测为被无序和潜在的结合区域(图1)。
在AbDhn1,这些潜在的结合区域中的一个包含在参与过氧化物酶体基质导入到过氧化物酶体蛋白质中发现一个WXXX[YF]主题。
[图略,见PDF]
图3。
对齐AbDhn1,AbDhn2和AbDhn3的反复DPR域。
保守的氨基酸盒装黑色(相同)或灰色(类似)。
DHN1.1-DHN1.2指定两个从AbDhn1,DHN2.1-DHN2.5AbDhn2的五个范畴,并DHN3.1-DHN3.3三个域的域从AbDhn3。
数字表示氨基酸位置。
保守DPR主题是盒装的红色。
表1中。
A中甘蓝中发现的脱水样蛋白的特性。
AbDhn基因的应激调控表达
先前的实验表明,该AbDhn1基因A.甘蓝暴露于期间上调吲哚植物抗毒素camalexin[16]。
因此,我们研究了三个脱水素样基因的表达分生孢子萌发暴露camalexin也给其他十字花科防御代谢产物,即吲哚植保素brassinin和烯丙基异硫氰酸酯(铝国贸中心),脂肪族glucosinate的分解产物sinigrin。
如该图所示。
4,AbDhn1和AbDhn2转录后水平向右曝光0.5小时增加至camalexin和brassinin和最高水平的成绩单治疗与两个2小时后观察植物抗毒素。
增加AbDhn1和AbDhn2表达也观察到分生孢子萌发以下暴露于铝国贸2-4小时。
[图略,见PDF]
图4。
AbDhn1,AbDhn2和AdDhn3序列的A.甘蓝表达水平暴露在各种应力。
第一链cDNA进行从萌发孢子中提取的RNA样品准备外露至125微米camalexin(CAM),125微米brassinin(BRA),2.5mM的烯丙基异硫氰酸酯(铝国贸中心),5mM的甲萘醌(MEN),5毫过氧化氢(H2O2),1M山梨醇(SORB),350mM的氯化钠(NaCl),20mM的二硫苏糖醇醇(DTT)或所指示的时间孵育在4℃下(COLD)和作为模板进行实时PCR。
对于每一个基因表达的诱导被表示为它的相对表达(基因研究的比率(倍诱导)转录丰度/β-微管蛋白转录丰度)在每个诱导条件下在其相对表达相应的控制。
每个值是两个独立的实验,每个三次重复的平均值。
为结果更容易可视化,数字数据使用,转化色网声明在JColorGrid软件[45]其中折叠基因表达的诱导(LOG2值)是由一个灰色的代表缩放(在右侧)。
转录水平进行了测定的条件中三个脱水-like基因以前报告诱发真菌DHN转录,即低温度,盐度,渗透和氧化应激[6],[11],[12],[13]。
AbDhn1和AbDhn2转录水平显着提高对NaCl紧随转让含有中等0.5小时,长达2小时,而这个上调不再经过长时间的观察(4小时)治疗。
类似的强烈的上调反应,观察对AbDhn2后暴露在寒冷的2-4小时温度。
增加的表达是在过氧化氢的存在下与对AbDhn2也观察AbDhn1和AbDhn3在山梨糖醇的存在下,但在低得多的水平。
A中甘蓝的Hog1MAPK级联中起着重要的作用,以camalexin曝光的响应,氧化应激[16]和盐胁迫(未发表的结果)。
要检查脱水素样基因是否构成这个信号级联潜在的目标,他们的表达进行了评估在Δabhog1突变。
如所示图。
5A,显著下降,观察MAPK信号缺陷的AbDhn成绩单积累菌株相比野生型诱导条件下(盐胁迫)。
如camalexin也被证明对激活解折叠蛋白应答(UPR)途径在A.甘蓝[17],并且由于潜在的分子本质非结构化蛋白(获IUP),三个脱水-like基因表达的分子伴侣功能是研究,无论是在野生型菌株暴露于化学UPR诱导剂二硫苏糖醇(DTT),或在普遍定期审议缺陷ΔabhacA突变体在没有外源施加应力。
时用DTT处理0.5小时,观察到野生型菌株(图4)AbDhn1和AbDhn2表达的显著上调。
这些并没有观察到更长的数码地面电视的曝光时间归纳。
在没有外源性压力,一个戏剧性的增加AbDhn1转录物中观察到ΔabhacA突变体,缺失的转录因子AbHacA,相比于野生型(图5B)。
[图略,见PDF]
图5。
AbDhn基因通过实时PCR估计不同的遗传背景中的表达。
甘蓝野生型(WT)和Δabhog1株暴露于350毫米氯化钠30分钟前的RNA提取。
对于这三个AbDhn基因表达诱导被表示为一个LOG2比率(倍感应)他们的压力条件,在没有压力的控制他们的相对表达下相对表达。
B:
基础AbDhn基因的ΔabhacA突变体相对于在基准野生型其表达水平在转录水平应变阿布拉43(LOG2值)。
每个值是两个独立的实验中,每个具有三个平均值
复制。
星号表示有显著比野生型的不同的值(P<0.01)。
脱水素类似蛋白AbDhn1和AbDhn2累加盐胁迫下过氧化物酶体要检查是否脱水成绩单水平的提高是通过脱水般的积累并联蛋白质,表达菌株蛋白质AbDhn,自己的启动子控制之下,融合在他们的羧基末端到sGFP,被设计。
作为对照,根据对照的表达仅sGFP的菌株该TOXA子[18]也被修建。
蛋白质从各菌株提取生长在液体培养基中存在的NaCl的存在与否,通过Western印迹用抗GFP抗体进行分析。
如该图所示。
6,基底下生长条件没有信号,观察,除了与蛋白质从控制菌株提取组成型表达GFP。
后盐胁迫曝光,绿色荧光蛋白抗体识别的一种蛋白质在约40kDa的从表达AbDhn1-GFP和两种蛋白质在约65-70kDa的菌株提取物,也就是说,可以对应
到AbDhn2的α和β同种型,在从表达AbDhn2-GFP菌株的提取物。
无信号是从表达AbDhn3-GFP菌株提取物观察,表明这种蛋白不表达或在非常低的水平至少在盐胁迫的条件。
[图略,见PDF]
图6。
盐胁迫下AbDhn-GFP蛋白的表达。
分生孢子萌发(24小时岁)从菌株表达自己的控制之下AbDhn-GFP融合发起人或从一个菌株组成型表达绿色荧光蛋白(cGFP)要么被暴露在350毫米氯化钠2小时或左无压力。
蛋白提取物进行免疫印迹用针对GFP的HRP-偶联的抗体。
编号对应于kDa的分子量。
两个AbDhn2异构体表示。
使用相同的菌株AbDHN蛋白的亚细胞定位被检查。
将GFP-DHN1信号在分生孢子细胞形成点状绿点(图7A)和年轻的营养菌丝(图7B)的往往是在老菌丝较大。
类似的表达模式,观察与表达AbDhn2-GFP的应变,而在对照菌株GFP的表达导致弥漫绿色荧光(图三)。
基于来自烟曲霉,AbDhn1的过氧化物酶体定位脱水样蛋白以前的发布结果和AbDhn2蛋白质人们假设。
为了实现过氧化物酶体的标签,红色荧光蛋白红色荧光蛋白被稠合到一个丝氨酸-赖氨酸-亮氨酸典型的1型过氧化物酶体靶向序列PTS1的标签(SKL)。
红色荧光蛋白新光人寿于A.甘蓝表达导致红色荧光蛋白的导入到过氧化物酶体和结果的检测荧光信号的激发后。
在这种共表达转化AbDhn1或AbDhn2-GFP和DsRed-SKL,共定位sGFP和DsRed的观察分生孢子和菌丝(图7),确认两个脱水状蛋白与过氧化物酶有关。
对于Dhn3,只是淡淡的荧光信号,观察在菌丝的前端,但该细胞定位不能准确确定(未示出)。
[图略,见PDF]
图7。
该AbDhn1-GFP融合蛋白的亚细胞定位。
双标记菌株表达AbDhn1-GFP和DsRed-SKL暴露于350毫米氯化钠2小时。
共定位在分生孢子(A)和菌丝(B)进行分析,利用共聚焦显微镜观察。
酒吧=10微米。
脱水般的缺失突变体很容易受到氧化应激探讨脱水样蛋白A中甘蓝中的作用,敲除突变体缺陷的AbDhn1,AbDhn2或AbDhn3通过用潮霉素B抗性替换相应的ORF构建盒式磁带(图中一甲)。
由此产生的置换突变体(称为Δabdhn1,Δabdhn2和Δabdhn3)分别为其中使用PCR屏幕(未示出),潮霉素抗性的转化体中选择。
对于每个基因型,DHN基因的破坏是由DNA凝胶印迹分析(图一乙)在两到三个随机选择的确认转化。
除了预期的信号,DNA凝胶印迹分析没有检测到任何额外的片段,这意味着有AbDhn1,AbDhn2或AbDhn3在A.甘蓝没有结构同源物。
监控生长在固体PDA培养基上(图S4A)和液体PDB培养基(图S4B)没有透露单个任何影响突变相比于菌丝生长速率,孢子萌发和初始野生型亲本菌株菌丝生长。
在补充了甲萘醌的液体介质的生长曲线分析(一代的O2-),过氧化氢,烯丙基异硫氰酸酯(铝ITC)和brassinin被用来评估的脱水般的易感性突变体对氧化应激和植物防御代谢物。
对于一个给定的基因型,所有测试的转化体具有与所施加的应力类似的反应和平均被如此构造的生长曲线。
滞后时间和最大生长速率变量是从生长曲线通过使用描述的计算方法来计算茹贝尔等人[19]。
对于每个参数,学生T-检验用于评估之间的显著差异
处理和未处理的样品或突变体和亲本菌株之间。
如该图8所示,所有的脱水状突变体的特征在于高易感性的氧化应激。
的几乎完全生长抑制突变菌株中观察到的10毫甲萘醌和5mMH2O2的存在,而在同一条件下,野生型的生长没有显著影响(图8)。
同样,铝国贸引起的延迟进入对数生长期(约7小时)及brassinin引起了显著减少的最大斜率(从23%为Δabdhn3为Δabdhn142%)为相对于野生型(图3的脱水状缺陷型突变体8)。
[图略,见PDF]
图8。
易感性的AbDhn缺陷突变体的氧化应激。
比浊法监测野生型菌株(黑色符号)和AbDhn缺陷型突变体(公开的生长符号;Δabdhn1:
三角形,Δabdhn2:
圆,Δabdh3:
钻石)是在自动记录33H24°C。
Y轴的单位对应于相对浊度单位(RNU)。
分生孢子用于
接种含有被补充或者10毫米标准PDB培养基微孔板甲萘醌,5mM的H2O2,5毫米铝国贸中心或100微米brassinin。
误差线表示标准偏差。
每基因型一式三份进行分析和实验重复两次每次生长条件。
落后时间和最大生长速率变量是从生长曲线用计算方法来计算通过茹贝尔等人描述。
[19]。
对于每个参数,学生T-检验用于评估显著差异经处理和未经处理的样品之间或突变体和亲本菌株之间。
类似的实验在NaCl的存在下和山梨糖醇进行评估的易感性突变株对盐和渗透胁迫,分别。
概无脱水状缺失突变体的表现易感性增加任何这些应力相比,野生型(数据未显示)。
作为表达AbDhn1和AbDhn2模式十分相似,一个可能的功能冗余被怀疑和AbDhn1-AbDhn2双缺失突变体是通过将一个Δabdhn1突变株与构建AbDhn2-替换盒包含诺尔丝菌素抗性标记(图S1A)。
双基因更换株(称为ΔΔabdhn1-abdhn2)被选定为诺尔丝菌素和潮霉素阻力。
DNA凝胶印迹分析显示,这些转化已经失去了两个AbDhn1和AbDhn2编码所取代的2破坏盒(图S1B),该序列。
在液体和固体介质,生长迟缓,观察相对于其他基因型并通过所形成的菌落的菌丝体ΔΔabdhn1-abdhn2突变体没有黑暗melanised(图S4)由于产孢弱。
没有其他双突变体和Δabdhn1和Δabdhn2单突变体之间记录的表型差异菌株时,在盐或山梨糖醇(数据未示出)的存在下生长。
暴露于高从脱水素样缺陷型分生孢子显示修改过的生存率和冰点温度
增长的比浊记录来计算滞后时间和10小时后评估萌发孢子贮存于水中悬浮在正常(20℃),低(4°C和-20°C)或高(40℃)的温度。
由于滞后时间被发现是成正比的发芽分生孢子[19]的数量,生存能力率为从之前和之后存储的滞后时间之间的比值估计。
相比于存储在20°C,增加滞后时间(在寒冷和高温下,分别7-10小时),记录与野生型。
类似的效果观察到的Δabdhn1和Δabdhn2单突变菌株(图9)。
与此相反,存储在低温(4℃),冷冻(-20℃)或高(40℃)的温度强烈下降Δabdhn3分生孢子的萌发能力。
在后两种条件下,ΔΔabdhn1-abdhn2分生孢子萌发也受到影响。
[图略,见PDF]
图9。
易感性的AbDhn缺陷突变体的温度应力。
校准分生孢子的水悬浮液从野生型(WT)菌株Abra43和AbDhn缺陷型突变体在不同温度下分别放置10小时(-20℃,4℃,20℃,40℃)。
分生孢子然后用于接种微孔板和比浊增长曲线,建立了一个33小时内。
ΔLag时间计算在测试温度和滞后时间在20℃时的延迟时间之间的差,是用作参数来估计上孢子存活率的治疗效果。
误差条表示标准偏差和星号表示有显著(P<0.01)显着高于野生型的更高的值。
每基因型一式三份进行分析和实验重复两次每次生长条件。
的脱水素样蛋白A上甘蓝毒力的影响AbDhn基因的表达的接种甘蓝叶感染期间进行了检查野生型菌株(图10)。
3天接种后(DPI),无显著差异,指出之间的在自由生活的菌丝体(控制)AbDhn转录水平和那些在病叶,而小的坏死症状已经观察到。
在6dpi时,AbDhn的相对较高的水平(尤其是AbDhn2和AbDhn3)成绩单记录。
在这个阶段,随着新兴大分生孢子典型的坏死区表现得很明显。
[图略,见PDF]
图10。
在A的感染动力学定量RT-PCR结果AbDhn基因的表达甘蓝野生型菌株对甘蓝。
对于每个基因,表达诱导是在1,3和6(研究表示为它的相对表达量的比率基因转录丰度/微管蛋白转录丰度),每个样品接种在其相对表达自由生活的真菌控制的文化。
是对生物样品独立进行两次实验有三个技术复制。
误差条表示标准偏差和星号表示的相对表达显著不同1(学生检验,P<0.01)。
脱水素样短少突变体的致病行为进行了检查在两个营养(叶子)和生殖(角果)植物的发育阶段。
当在降低接种完好甘蓝叶接种物的浓度(每毫升105至103个分生孢子),不论接种物的压力,没有差别当单缺失突变体相比,关于症状的野生型菌株被记录方面(
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- 腐生 脱水 类似 蛋白 甘蓝 植物 发病 机制 中的 作用 应激 反应