浙食药检业272号.docx
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浙食药检业272号
浙食药检业〔2009〕272号
浙江省食品药品检验所关于2010年版药典
品种苄达赖氨酸及其滴眼液质量标准起草结果的报告
国家药典委员会:
根据贵会国药典化发[2008]28号“关于发送中国药典2010年版(二部)生化药品科研项目会议纪要的通知”的任务分工安排及要求,我所已完成2010年版药典品种苄达赖氨酸及其滴眼液药品质量标准的起草修订工作,并经上海市食品药品检验所复核,我所根据复核单位的复核意见,进行了再审,现将该品种质量标准及起草说明等上报贵会,请审核。
附件:
1、苄达赖氨酸及其滴眼液药品质量标准中英文版
2、苄达赖氨酸及其滴眼液药品质量标准起草说明
3、上海市食品药品检验所关于苄达赖氨酸及其滴眼液质量标准复核说明各1份(复印件)
4、电子文档(附件1~2)
二OO九年五月六日
抄送:
上海市食品药品检验所(无附件)
苄达赖氨酸
BiandaLai’ansuan
BendazacLysine
书页号:
2005年版二部-227
[修订]
【检查】有关物质取本品,加水溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液,作为供试品溶液,精密量取1ml,置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。
照高效液相色谱法(附录ⅤD)测定,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-0.1mol/L醋酸(47:
53)为流动相,检测波长为307nm。
理论板数按苄达赖氨酸峰计算不低于3000,苄达赖氨酸峰与各杂质峰的分离度应符合要求。
精密量取对照溶液20μl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%;精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的5倍。
供试品溶液的色谱图中,如有杂质峰,各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(1.0%)。
苄达赖氨酸滴眼液
BiandaLai’ansuanDiyanye
BendazacLysineEyeDrops
本品为苄达赖氨酸与适量的抑菌剂制成的水溶液。
含苄达赖氨酸(C6H14N2O2•C16H14N2O3)应为标示量的90.0%~110.0%。
【性状】本品为无色或几乎无色的澄明液体。
【鉴别】
(1)取本品作为供试品溶液;另取苄达赖氨酸对照品适量,加水制成每1ml中含5mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法(附录VB)试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-冰醋酸(15:
1)为展开剂,展开后,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。
供试品溶液所显主斑点的荧光和位置应与对照品溶液的主斑点相同。
(2)取含量测定项下的溶液,照紫外-可见分光光度法(附录ⅣA)测定,在307nm的波长处有最大吸收,在272nm的波长处有最小吸收。
【检查】pH值应为6.8~7.8(附录ⅥH)。
渗透压比取本品,依法检查(附录ⅨG),渗透压比应为0.90~1.10。
硫柳汞(以Hg计)对照品溶液的制备将1000µg/ml汞标准溶液用0.05%K2Cr2O7-5%HNO3溶液稀释至10µg/L的标准溶液,低温保存。
临用时用5%HCl溶液配制成系列浓度标准溶液,用0.4%NaOH-0.5%NaBH4溶液作为还原剂,测定荧光强度。
以荧光值为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线。
样品溶液制备精密量取苄达赖氨酸滴眼液1.0~5.0ml,加入硝酸5~10ml,消解至溶液澄清;消解完全后,置电热板上加热赶去硝酸至近干,用5%HCl溶液清洗,合并洗液至100ml量瓶中,定容至刻度,再用5%HCl稀释至相应浓度。
同时制备样品空白。
测定荧光值,从标准曲线计算求得浓度,即得。
含硫柳汞以Hg计,不得过50ug/ml。
其他应符合眼用制剂项下有关的各项规定(附录IG)。
【含量测定】精密量取本品适量,用水定量稀释制成每1ml中含苄达赖氨酸40μg的溶液,照紫外-可见分光光度法(附录ⅣA),在307nm的波长处测定吸光度,按C6H14N2O2•C16H14N2O3的吸收系数(E
)为130计算。
【类别】同苄达赖氨酸。
【规格】
(1)5ml:
25mg
(2)8ml:
40mg
【贮藏】遮光,密封保存。
附件2:
苄达赖氨酸质量标准起草说明
一、概况:
本品收载在中国药典2005年版二部,国外药典中均未见收载。
原药典标准中,有关物质采用薄层色谱法测定,现根据实验结果,修订为HPLC法。
经查,本品国内有宁夏康亚药业有限公司、山东鑫齐药业有限公司、武汉武药制药有限公司、河北医科大学制药厂、宁波唯森制药有限公司、安徽省双科药业有限公司、浙江莎普爱思制药有限公司7家企业生产。
本次起草工作收集到2个企业生产的样品共5批,为浙江莎普爱思制药有限公司生产的三批样品(批号:
051213、061218、070113)及宁波唯森制药有限公司生产的两批样品(批号:
20060901、071001)。
本标准经上海市食品药品检验所复核并提出复核意见。
二、质量标准相关项目修订情况说明:
(一)有关物质
1、中国药典2005年版二部的苄达赖氨酸质量标准中有关物质检查是以3-羟基-1-苄基吲哒唑为杂质对照品,采用薄层色谱后紫外检视。
现采用HPLC法测定该杂质及其他杂质,以增加灵敏度及专属性。
2、有关物质测定方法:
取本品,加水溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液,作为供试品溶液,精密量取1ml,置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。
照高效液相色谱法(附录ⅤD)测定,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-0.1mol/L醋酸(47:
53)为流动相,检测波长为307nm。
理论板数按苄达赖氨酸峰计算不低于3000,苄达赖氨酸峰与各杂质峰的分离度应符合要求。
精密量取对照溶液20μl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%;精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。
供试品溶液的色谱图中,如有杂质峰,各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(1.0%)。
3.仪器:
Agilent1200高效液相色谱仪
Waters2690高效液相色谱仪
UV检测器(307nm)
色谱柱:
KromasilC18柱(4.6×250mm,5μm)
DimonsilC18柱(4.6×150mm,5μm)
AlltimaC18柱(4.6×250mm,5μm)
流动相:
乙腈-0.1mol/L醋酸(47:
53)
4.色谱柱的选择:
分别选用3根不同型号、规格的色谱柱,用有关物质测定项下的方法试验,苄达赖氨酸及杂质A(3-羟基-1-苄基吲哒唑)的保留时间见表1,色谱图见图1~2。
结果杂质A与苄达赖氨酸峰之间的分离度符合规定。
还考察了30℃、35℃、40℃不同柱温条件下,分离度均符合规定。
表1各成分的HPLC保留时间
色谱柱
苄达赖氨酸
3-羟基-1-苄基吲哒唑
KromasilC18柱
8.64
6.14
DimonsilC18柱
10.15
7.06
AlltimaC18柱
11.58
7.67
图1苄达赖氨酸HPLC定位图
图23-羟基-1-苄基吲哒唑HPLC定位图
5.检测波长的选择:
分别以水、0.1mol/ml醋酸溶液及流动相溶解苄达赖氨酸对照品和杂质A(3-羟基-1-苄基吲哒唑)对照品,用紫外分光光度计扫描,结果苄达赖氨酸在306~308nm处有最大吸收,3-羟基-1-苄基吲哒唑在315nm波长处有最大吸收,原中国药典2005年版二部苄达赖氨酸质量标准中,苄达赖氨酸的紫外鉴别项下其最大吸收波长307nm,故本试验采用307nm作为测定波长。
紫外扫描图谱见图3~6:
图33-羟基-1-苄基吲哒唑紫外扫描图谱(水溶解)
图43-羟基-1-苄基吲哒唑紫外扫描图谱(流动相溶解)
图5苄达赖氨酸紫外扫描图谱(水溶解)
图6苄达赖氨酸紫外扫描图谱(流动相溶解)
6.破坏试验:
取本品(批号为20060901样品)约100mg,置100ml量瓶中,作以下试验:
①加30%过氧化氢溶液5ml,振摇,24小时候后加水稀释至刻度,摇匀,滤过,取滤液作为氧化破坏供试品溶液;
②105℃烘箱加热4小时,放冷,加水稀释至刻度,滤过,取滤液作为热破坏供试品溶液;
③置4500Lx下放置72小时,加水稀释至刻度,滤过,取滤液作为光破坏供试品溶液;
④加1mol/L盐酸溶液5ml,放置24小时,用1mol/L氢氧化钠溶液中和,加水稀释至刻度,摇匀,滤过,取滤液作为酸破坏供试品溶液;
⑤加1mol/L氢氧化钠溶液5ml,放置24小时,用1mol/L盐酸溶液中和,加水稀释至刻度,摇匀,滤过,取滤液作为碱破坏供试品溶液。
取上述供试品溶液,进样,结果见图7~11。
图7光破坏HPLC图
图8热破坏HPLC图
图9酸破坏HPLC图
图10碱破坏HPLC图
图11氧化破坏HPLC图
实验结果表明苄达赖氨酸在高温,强光下较稳定,在酸、碱、氧化环境下有不同程度的分解,降解产物与主峰能明显分离。
(7)最低检出量(LOD)测定:
在307nm波长处,苄达赖氨酸和杂质A(3-羟基-1-苄基吲哒唑)的最低检出量为0.57ng和0.35ng。
见图12~13。
图12苄达赖氨酸最低检出量HPLC图
图13杂质A最低检出量HPLC图
(8)外标法与自身对照结果比较:
见表2。
表2外标法与自身对照结果比较
批号
杂质A
(外标法)
杂质A
(自身对照法)
总杂质
051213
0.06%
0.08%
0.12%
061218
0.13%
0.17%
0.45%
20060901
未检出
未检出
未检出
070113
0.06%
0.08%
0.08%
071001
未检出
未检出
未检出
两种方法计算杂质A的含量差别不大,且在五批样品中,杂质A的含量很低或未检出。
故在起草的质量标准中,直接以自身对照法测定,而舍弃杂质A对照品的使用。
(9)样品测定结果,见表3,图14~18。
表3苄达赖氨酸有关物质测定结果
批号
051213
061218
20060901
070113
071001
有关物质(%)
0.12
0.45
未检出
0.08
未检出
图14样品(批号051213)有关物质HPLC图
图15样品(批号061218)有关物质HPLC图
图16样品(批号20060901)有关物质HPLC图
图17样品(批号070113)有关物质HPLC图
图18样品(批号071001)有关物质HPLC图
根据以上五批样品的测定数据,同时考虑到HPLC比TLC灵敏度高,故采用自身对照法,控制总杂质,将限度订为0.5%,便能达到既控制特定杂质3-羟基-1-苄基吲哒唑的量,又能省去该特定杂质对照品的使用目的。
三、复核单位意见
上述修订项目经上海市食品药品检验所复核,根据复核结果,在保留时间30分钟前后检出了几个杂质峰,故建议将色谱图记录时间由主成分峰保留时间的2倍延长至5倍,再根据我所的扫描图谱显示苄达赖氨酸的最大吸收波长在306~308nm,杂质3-羟基-1-苄基吲哒唑的最大吸收波长在315nm,因此在测定波长选择上建议是否应选择315nm以更好地控制有关物质。
我所对五批样品又重新进行了复核检验,以307nm和315nm为检测波长,记录色谱图至主成分峰保留时间的5倍,色谱图及测定结果如下:
图19样品(批号071001)有关物质HPLC图(上为307nm,下为315nm)
表4苄达赖氨酸有关物质测定结果(%)
批号
检测波长
051213
20060901
061218
071001
070113
307nm
0.37
0.15
0.81
0.17
0.28
315nm
0.46
0.16
0.91
0.18
0.40
上海所结果(307nm)
0.44
0.17
0.88
0.16
0.27
检测结果表明,在307nm和315nm波长下记录的图谱中峰面积结果相近,有关物质测定结果也相近,由于苄达赖氨酸的紫外鉴别项下其最大吸收波长307nm,故本标准中还是将测定波长订为307nm;在约主峰三倍保留时间处,有杂质峰,而在上海所的复核的图谱中,此杂质峰出现在约主峰四倍保留时间处,说明在不同的色谱系统中,保留时间会有一定差异,为了获得准确的数据,在拟定的质量标准中,暂将图谱记录时间设为主峰的五倍。
根据以上五批样品的测定结果,同时考虑到HPLC比TLC灵敏度高,故采用自身对照法控制总杂质,将限度订为1.0%,既控制特定杂质3-羟基-1-苄基吲哒唑的量,也省去了该特定杂质对照品的使用。
其他项目未作修订。
苄达赖氨酸滴眼液质量标准起草说明
一、概况
本品收载在中国药典2005年版二部,国外药典中均未见收载。
我所除了对国家药典会建议增订抑菌剂硫柳汞的检查方法进行研究外,对本品的有关物质也进行了考察。
经查,本品国内有宁夏康亚药业有限公司、武汉远大制药集团股份有限公司、河北医科大学制药厂、宁波唯森制药有限公司、安徽省双科药业有限公司、浙江莎普爱思制药有限公司。
本次起草工作收集到2个企业生产的样品共6批,为浙江莎普爱思制药有限公司生产的四批样品(批号:
050607,070810,080319,080115)及宁波唯森制药有限公司生产的两批样品(批号070601,071101)。
本标准经上海市食品药品检验所复核并提出复核意见。
二、质量标准相关项目修订情况说明
(一)硫柳汞:
在苄达赖氨酸滴眼液中,常用的抑菌剂为硫柳汞钠。
目前测定硫柳汞含量的方法很多,有双硫腙滴定法、分光光度法、高效液相色谱法、冷原子吸收法。
原子荧光光谱法与上述方法相比具有灵敏度高、干扰少、线性范围宽等优点。
1仪器与试剂
双道原子荧光分光光度计:
AFS3100型,断续流动氢化物发生系统,北京科创海光仪器有限公司
微波消解样品制备系统:
Multiwave3000型,配16孔高温聚四氟乙烯消解罐,奥地利Antonpaar公司;
超纯水仪:
NANOpureDlamondTM型,美国Barnstead公司;
控温电热板:
EH20B型,美国LabTech公司;
空心阴极灯:
汞,北京有色金属研究总院;
标准物质:
汞标准液【GBW(E)080617】,国家标准物质研究中心;
试剂:
硝酸、盐酸,(BVⅢ级,北京化学试剂研究所),氢氧化钠、硼氢化钠、重铬酸钾(分析纯,国药集团化学试剂有限公司)
实验用水为去离子水(电阻率为18MΩ·CM)。
2方法和结果
2.1样品制备方法
精密量取苄达赖氨酸滴眼液1.0ml,置于聚四氟乙烯消解罐中,加入硝酸5ml,放入微波消解仪中消解,至溶液澄清;消解完全后,置电热板上加热赶去硝酸至近干,用5%HCl溶液清洗,合并洗液至100ml容量瓶中,定容至刻度。
再吸取2.0ml上述溶液至100ml容量瓶,用5%HCl溶液定容至刻度,即得。
同时制备样品空白。
2.2仪器条件
表1测定汞的工作参数
参数
指标
参数
指标
负高压PMT
300V
加热温度
200℃
灯电流
30mA
氩气压力
0.60MPa
测定高度
10mm
测定方式
标准曲线法
载气流量
400ml/min
积分方式
峰面积
屏蔽气流量
900ml/min
进样体积
2ml
读数时间
10S
读数延迟时间
1S
2.3工作曲线的绘制
将1000µg·ml-1汞标准液用0.05%K2Cr2O7-5%HNO3溶液稀释至10µg·L-1的标准溶液,再用5%HCl溶液配制成0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0µg·L-1的系列浓度标准溶液,用0.4%NaOH-0.5%NaBH4溶液作为还原剂,测定荧光强度。
以荧光值(If)为纵坐标、浓度(C)为横坐标绘制工作曲线。
一次回归方程If=a*C+b,a=605.917,b=-6.980,相关系数R为0.9993,检出限为0.0134μg·L-1,定量限以3倍检出限计为0.0402μg·L-1,浓度与荧光值见下表2:
表2汞标准溶液浓度与荧光值
浓度(C)
荧光值(If)
0.4µg/L
221.431
0.8µg/L
482.526
1.2µg/L
737.339
1.6µg/L
934.656
2.0µg/L
1217.669
2.4仪器精密度试验
测定汞标准溶液(1.2µg·L-1)的荧光值,重复进样11次,RSD为1.3%。
2.5重复性试验
取浙江莎普爱思制药有限公司生产,批号为070810的苄达赖氨酸滴眼液做重复性试验。
精密量取1.0ml,5份,加样品分析共6份,按前述供试品溶液制备方法及荧光测定条件进行测定,RSD为3.14%。
结果见表3
表3重复性试验结果(n=6)
编号
1
2
3
4
5
6
荧光强度
582.075
610.347
600.725
595.712
628.452
577.260
浓度(µg/L)
0.9721
1.0188
1.0029
0.9946
1.0487
0.9642
稀释体积(ml)
5000
5000
5000
5000
5000
5000
平均浓度(µg/ml)
5.0011
RSD(%)
3.10
2.6回收率试验
取浙江莎普爱思制药有限公司生产,批号为070810的苄达赖氨酸滴眼液做回收率试验。
精密吸取本品0.5ml,共9份,分成3组,置聚四氟乙烯消解罐中,每组分别精密加入浓度为5µg·ml-1的汞标准溶液0.3ml、0.5ml、0.7ml,加入硝酸5ml,放入微波消解仪中进行消解,至溶液澄清;消解完全后,置电热板上加热赶去硝酸至近干,用5%HCl溶液清洗并过滤,合并滤液至100ml容量瓶中,定容至刻度。
再吸取2.0ml上述溶液至100ml容量瓶,用5%HCl溶液定容至刻度,即得。
同时制备样品空白。
按前述方法进行测定,测得平均回收率结果见表4。
表4回收率试验结果(n=3)
测定浓度
(concentration)/µg/L
加入量
(added)/µg
回收率
(recovery)/%
平均回收率
(meanrecovery)/%
RSD/%
0.8131
1.5
105.78
102.39
4.70
0.7864
1.5
96.88
0.8093
1.5
104.52
1.0185
2.5
104.55
96.15
9.24
0.9300
2.5
86.85
0.9810
2.5
97.05
1.1743
3.5
96.94
97.24
4.89
1.1442
3.5
92.64
1.2107
3.5
102.14
2.7样品分析
用本法对浙江莎普爱思制药有限公司生产的4批苄达赖氨酸滴眼液和宁波唯森制药有限公司的2批苄达赖氨酸滴眼液进行了测定,每批测定2份,测定结果见下表5。
硫柳汞分子量为404.81,其中Hg分子量200.59,质量比为49.55%。
表5样品分析结果
莎普爱思批号
050607
050607
070810
070810
080319
080319
080115
080115
测得值(µg/L)
0.9476
0.9543
0.9721
1.0203
0.9459
0.9597
1.0725
0.9856
稀释体积(ml)
5000
5000
5000
5000
5000
5000
5000
5000
含量(µg/ml)
4.7380
4.7715
4.8605
5.1015
4.7295
4.7985
5.3625
4.9280
平均含量(µg/ml)
4.75475
4.9810
4.7640
5.14525
硫柳汞含量(µg/ml)
9.60
10.05
9.61
10.38
唯森批号
070601
070601
071101
071101
测得值(µg/L)
1.4217
1.4959
1.4187
1.4527
稀释体积(ml)
100000
100000
100000
100000
含量(µg/ml)
142.17
149.59
141.87
154.27
平均含量(µg/ml)
145.88
148.07
硫柳汞含量(µg/ml)
294.41
298.83
2.8根据企业提供的处方投料量,浙江莎普爱思制药有限公司样品中硫柳汞钠的投料浓度为10ug/ml,宁波唯森制药有限公司现提供样品中硫柳汞钠的投料浓度为300ug/ml,但该公司已提出对苄达赖氨酸滴眼液的补充申请,将硫柳汞钠的投料浓度调整为10ug/ml。
故参考药剂学等文献,一般硫柳汞的常用浓度为0.01%—0.02%,结合企业投料情况,现将硫柳汞钠的限度定为以Hg计不得过50ug/ml。
(二)有关物质参照苄达赖氨酸修订的质量标准中的方法测定苄达赖氨酸滴眼液中的有关物质,结果除了与辅料相应位置有出峰外,未见明显杂质峰。
考虑到本品原料中已对有关物质进行了控制,且比较稳定,故该项目不列入质量标准中,色谱图见图1~8:
图1辅料(莎普爱思)有关物质HPLC图
图2样品(批号050607)有关物质HPLC图
图3样品(批号070810)有关物质HPLC图
图4样品(批号080319)有关物质HPLC图
图5样品(批号080115)有关物质HPLC图
图6辅料(宁波唯森)有关物质HPLC图
图7样品(批号070601)有关物质HPLC图
图8样品(批号071101)有关物质HPLC图
根据以上测定数据,所起草的2010年版二部该品种的质量标准中增订硫柳汞检查项目。
其他项目未作修订。
三、复核单位意见
上述修订项目经上海市食品药品检验所的复核,根据硫柳汞的复核结果,上海所建议对苄达赖氨酸滴眼液中硫柳汞的量制定一个合理的控制范围,而不是仅限定上限,建议将苄达赖氨酸滴眼液中硫柳汞的量控制在“8~12μg/ml”。
我所认为,硫柳汞作为一种抑菌剂,不应该制定下限,其最低量可以由微生物限度项目控制,即必须达到足够的抑菌效果。
而现在生产厂家的处方中硫柳汞的量还没有完全统一,无法根据我们现在的几批样品测定结果,制定下限,故现还是参考药剂学等文献将硫柳汞钠的限度定为以Hg计不得过50μg/ml。
其他同意我所拟定的标准内容。
苄达赖氨酸复核说明
根据国家药典委员会国药典化发[2008]28号文中国药典2010年版(二部)生化药品标准科研项目会议纪要的要求,我所对贵所拟定的苄达赖氨酸质量标准中有关物质进行了复核检验,我所共收到两家企业五批样品,现将复核检验结果及意见汇总如下。
我所采用的复核条件为:
采用Agilent1200高效液相色谱仪,色谱柱为Synergi4uHydro-RP80A(4.6×150mm,4μm),流动相为乙腈-0.1mol/L醋酸溶液(47:
53),流速1.0ml/min,供试品配制溶液为流动相。
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