高三一轮复习系列课件微生物的培养与应用PPT资料.ppt
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在选择培养基的配方中,把尿素作为培养基中的唯一氮源,原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。
2.统计菌落数目的方法
(1)显微镜直接计数法原理:
利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。
方法:
用计数板计数。
缺点:
不能区分死菌与活菌。
(2)间接计数法(活菌计数法)原理:
当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
操作a.设置重复组,增强实验的说服力与准确性。
b.为了保证结果准确,一般选择菌落数在30300的平板进行计数。
计算公式:
每克样品中的菌株数=(CV)M,其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数。
3.细菌分离与计数的实验流程土壤取样样品稀释取样涂布微生物的培养观察并记录结果细菌计数4.课题延伸菌种的进一步鉴定
(1)原因:
由于分离分解尿素的细菌的选择培养基上可能生长着以分解尿素的细菌的代射产物为氮源的其它微生物。
(2)原理:
CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3;
由于NH3的产生,培养基碱性增强,pH升高,因此可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。
(3)方法:
以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细菌,若指示剂变红,则pH升高,说明该种细菌能分解尿素。
脲酶,5.该实验中的注意事项
(1)设立重复组:
统计某一稀释度下平板上的菌落数时,要至少涂布3个平板作重复组,增强实验结果的说服力与准确性。
(2)对照原则判断培养基中是否有杂菌污染,需将未接种的培养基同时进行培养。
判断选择培养基是否具有筛选作用,需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养,观察两种培养基上菌落数目,进行对比得出结论。
牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基应各有一个空白对照,即不涂布菌液,目的是验证培养基中是否含杂菌。
样品稀释度将直接影响平板上生长的菌落数。
误区警示,对位训练3.分离土壤中分解尿素的细菌,对培养基的要求是()加尿素不加尿素加琼脂不加琼脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐不加硝酸盐A.B.C.D.,C,4.在做分离分解尿素的细菌实验时,A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落,而其他同学只选择出大约50个菌落。
产生A同学结果的原因可能有()由于土样不同由于培养基污染由于操作失误没有设置对照A.B.C.D.,A,考点三分解纤维素的微生物的分离1.纤维素酶纤维素酶是一种复合酶,它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶,具有催化分解纤维素的作用,其作用过程如下:
纤维素纤维二糖葡萄糖,C1酶CX酶,葡萄糖苷酶,2.纤维素分解菌的筛选原理刚果红纤维素红色消失,出现透明圈即:
可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
3.土壤中纤维素分解菌的筛选流程土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落。
红色复合物,提醒纤维素分解菌的选择培养基为液体培养基,因培养基中无凝固剂,利用液体培养基以增加纤维素分解菌的浓度。
选择培养基以纤维素做碳源和能源,其它绝大多数微生物不能正常生长;
鉴别培养基因含琼脂,故为固体培养基,刚果红染色法就是应用的此培养基。
为确定得到的菌是否是纤维素分解菌,还需进行发酵产纤维素酶的实验。
纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。
纤维素酶的测定方法,一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定。
流程中的“选择培养”是否需要,应根据样品中目的菌株数量的多少来确定。
对位训练5.某研究性学习小组同学,为了从土壤中筛选纤维素分解菌,利用下列材料和用具进行了实验,请完善下列实验步骤。
提示:
刚果红能与纤维素形成红色复合物,纤维素分解菌在含有刚果红和纤维素的培养基上形成有透明圈的菌落。
材料用具:
采集的土样,研钵,配制纤维素分解菌培养基的各种原料,琼脂,纤维素粉,刚果红溶液,培养箱,无菌水。
实验步骤:
(1)利用培养纤维素分解菌培养基的各种原料、琼脂及配制固体培养基,灭菌。
(2)将采集的土壤样品在研钵中研碎后,制成土壤匀浆。
(3)利用无菌操作方法把土壤匀浆到培养基上,放在培养箱内培养一段时间。
(4)用显微镜观察纤维素分解菌时,要从挑取材料制成临时装片。
纤维素粉和刚果红溶液,加入无菌水,点接或接种,周围有透,明圈的菌落,思维误区警示易错分析1.将消毒和灭菌混为一谈,解题思路探究,提醒酒精消毒时,体积分数为70%的酒精杀菌效果最好。
原因是:
浓度过高,使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜,乙醇分子不能渗入其中;
浓度过低,杀菌力减弱。
2.对题目中给出的信息、材料不会推断分析
(1)例如选择培养基特定条件或特定C、N源只有该种或该类微生物能存活或利用。
如纤维素粉做碳源时选择分离出分解纤维素的微生物;
无任何氮源的培养基选择固氮微生物;
高盐、强酸、无氧等特定条件选择耐盐、耐酸、厌氧的微生物;
加抗生素的培养基选择真菌;
根据是否含有机碳选择自养、异常微生物。
(2)根据划线法得到的培养基上菌落的生成及分布情况,推断分析微生物是否产生抗生素及相互抑制现象。
1.关于灭菌和消毒的理解,不正确的是()A.灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子B.消毒和灭菌实质上是相同的C.接种环用烧灼法灭菌D.常用的灭菌方法有加热法、紫外线法、化学药品法解析灭菌和消毒的实质相同,都是破坏菌体蛋白的活性而使其失去生命力。
但二者的程度不同,灭菌是杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子,消毒不能杀死芽孢和孢子。
常用的灭菌法有干热灭菌法、高压蒸气灭菌法、灼烧灭菌法等,而消毒有加热法、紫外线法、化学药品法,所以D项不正确。
D,纠正训练,2.现有两种固体培养基,已知其配制时所加的成分如下表:
用这两种培养基分别分离土壤中的两种微生物,你认为它们适于分离()A.甲培养基适于分离自养型自生固氮菌;
乙培养基适于分离异养型自生固氮菌B.甲培养基适于分离酵母菌;
乙培养基适于分离真菌C.甲培养基适于分离异养型自生固氮菌;
乙培养基适于分离自养型自生固氮菌D.甲培养基适于分离异养型共生细菌;
乙培养基适于分离异养型共生固氮菌,解析根据所提供的甲、乙两种培养基的成分分析,两者之间的主要差别是:
甲培养基以葡萄糖和淀粉作为有机碳源和能源,也有少量的无机碳源(CaCO3);
乙培养基无有机碳源和能源。
两者之间的共同点是:
都不含氮源。
说明这两种培养基只能培养具有固氮能力的细菌。
答案C,3.抗生素可由微生物产生,具有抑菌作用,能在琼脂培养基中扩散。
在筛选产生抗生素的菌种时,先在琼脂培养基平板上划线接种一种从土壤中获得的甲菌,在27下培养3天,形成菌落。
然后接种乙、丙、丁三种致病菌(图A),继续在同样条件下培养3天,结果如图B。
分析结果,得出的结论是(),甲菌产生了抗生素丁菌的生长被丙菌产生的抗生素抑制乙菌的生长被甲菌产生的抗生素抑制丙菌产生的抗生素抑制了乙菌的生长A.B.C.D.解析乙、丙、丁三种致病菌不会产生抗生素,否则靠近乙、丙、丁的甲菌落不能生长。
从图B来看,乙菌的生长被抑制,最可能的原因是甲菌产生了抗生素,此种抗生素只能抑制乙菌的生长,而对丙、丁两种菌没有影响。
答案A,知识综合应用重点提示1.通过“选择培养基筛选特定功能的微生物相关知识”的考查,提升“综合运用所学知识解决自然界和社会生活中有关生物学问题”的能力。
典例分析1.(2009上海卷,39)氯苯化合物是重要的有机化工原料,因其不易降解,会污染环境。
某研究小组依照下列实验方案(图1)筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌。
培养基配方如表1。
图1表1培养基的组成,液体培养基蛋白胨牛肉膏氯苯氯化钠硝酸铵无机盐(无碳)蒸馏水,号10g5g5mg5g1L,号50mg5g3g适量1L,号2080mg5g3g适量1L,
(1)配制号固体培养基时,除添加号液体培养基成分外,还应添加1%的。
(2)培养基配制时,灭菌与调pH的先后顺序是。
(3)从用途上来说,号培养基和号培养基分别属于培养基和培养基。
在号培养基中,为SP1菌提供氮源的成分是。
(4)在营养缺乏或环境恶劣时,SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体,这种休眠体被称为。
(5)将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的号培养液中培养,得到生长曲线(如图2)。
从图2可知,SP1菌在培养条件下最早停止生长,其原因是。
解析配制固体培养基时应在液体培养基的成分中再加入琼脂作为凝固剂。
在配制培养基时应先调节pH,后进行灭菌,防止灭菌后在调节pH的过程中污染培养基。
据表可知,培养基为牛肉膏蛋白胨培养基,包括碳源、氮源、水、无机盐和生长因,图2,子,适用于多种微生物的培养。
培养基不加牛肉膏和蛋白胨,以硝酸铵为氮源,可以选择出以硝酸铵为氮源的微生物,是选择培养基。
在营养缺乏、环境恶劣时,微生物可以形成休眠体芽孢,来度过不良环境。
据图2可知,SP1菌在20mg/L氯苯培养条件下菌体数最早达到最大值,即最早停止生长,原因是在培养基中,氯苯是唯一碳源,由于20mg/L氯苯培养条件碳源最少,因此也最早被耗尽,使SP1菌停止生长。
答案
(1)琼脂
(2)先调pH,后灭菌(3)通用选择硝酸铵(4)芽孢(5)20mg/L氯苯碳源最早耗尽,重点提示2.通过“探究土壤微生物对尿素是否有分解作用”的考查,提升“对一些生物学问题进行初步探究”的能力。
典例分析2.同学们为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用,设计了以下实验,并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。
培养基成分如下表所示,实验步骤如下图所示。
请分析回答问题:
(1)简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理:
。
(2)培养基中加入尿素的目的是筛选,这种培养基属于培养基。
(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的和,实验中需要振荡培养,原因是。
(4)转为固体培养基时,常采用接种,获得单菌落后继续筛选。
(5)实验结束后,使用过的培养基应该进行处理后,才能倒掉。
解析尿素是培养基中的唯一氮源,因此原则上只有能够利用尿素的微生物才能够在此培养基上生长。
由于细菌合成的脲酶将尿素分解为氨,pH升高,故在以尿素为唯一氮源的培养基中加入的酚红指示剂将变成红色;
这种培养基属于选择培养基,可筛选目的菌;
其生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的尿素和葡萄糖;
振荡培养的目的是提供氧气;
固体培养基培养时的接种方法常用稀释涂布平板法或平板划线法;
最后,别忘记如果倒掉培养基,之前应灭菌处理。
答案
(1)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,细菌合成的脲酶将尿素分解为氨,pH升高,使酚红指示剂变为红色
(2)目的菌选择(3)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(4)稀释涂布平板法(或平板划线法)(5)灭菌,定时检测组题说明特别推荐热点与实验探究题6;
知识迁移应用题4、5、8。
1.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基,据表回答下列问题:
(1)该培养基中含有的最主要碳源是。
(2)该培养基按物理性质划分,属于培养基,该培养基具有选择作用的原因是。
(3)在该培养基中,可以通过检测pH的变化来判断尿素是否被分解,所依据的原理是,所用方法是在培养基中加入,若尿素被分解,则培养基变成色。
(4)如果将此培养基改为用来分离分解纤维素的微生物的培养基,则主要提供碳元素的物质应改为。
解析培养基中葡萄糖、尿素和琼脂都含有碳元素,其中葡萄糖是最主要的碳源,尿素主要提供氮元素,琼脂是凝固剂。
由于琼脂的存在,该培养基属于固体培养基;
由于尿素是该培养基的唯一氮源,只有能分解尿素的微生物才能在上面生存,因此该培养基具有选择作用。
尿素分解会产生氨,氨能使酚红指示剂变红色,据此可以推测培养基中的尿素是否被分解。
若该培养基改为用来分离分解纤维素的微生物的培养基,纤维素应作为唯一碳源,因为只有这样才具有选择作用。
答案
(1)葡萄糖
(2)固体该培养基中唯一的氮源是尿素,只有能分解尿素的微生物才能在此培养基上生长繁殖(3)微生物产生的脲酶能将尿素分解成氨,氨会使培养基的pH升高酚红指示剂红(4)纤维素,2.(2009宁夏卷,40)
(1)在大肠杆菌培养过程中,除考虑营养条件外,还要考虑、和渗透压等条件。
由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、等优点,因此常作为遗传学研究的实验材料。
(2)在微生物培养操作过程中,为防止杂菌污染,需对培养基和培养器皿进行(消毒、灭菌);
操作者的双手需要进行清洗和;
静止空气中的细菌可用紫外线杀灭,其原因是紫外线能使蛋白质变性,还能。
(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数,要想使所得估计值更接近实际值,除应严格操作、多次重复外,还应保证待测样品稀释的。
(4)通常,对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的。
(5)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。
对于固体培养基应采用的检测方法是。
(6)若用大肠杆菌进行实验,使用过的培养基及其培养物必须经过处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。
解析
(1)影响微生物培养的因素除了营养条件外,外界条件主要包括温度、酸碱度和渗透压等。
由于大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点,所以常作为遗传学研究的实验材料。
(2)对培养基和培养器皿要进行灭菌,对操作者的双手需要进行清洗和用酒精消毒,静止空气中的细菌在用紫外线照射后能够使蛋白质变性,并损伤DNA结构,使细菌死亡。
(3)样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落的数目,实际操作中,通常选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证获得的菌落数在30300之间。
(4)菌落的特征是判断微生物的种类的重要依据,对获得的纯菌种可以依据菌落的特征对细菌进行初步检测。
(5)要判断固体培养基是否被污染,可将未接种的培养基在适宜的温度下培养一段时间,若发现有菌落说明培养基已被污染。
(6)进行微生物培养时,使用过的培养基及培养物必须经灭菌后才能丢弃,防止培养的微生物扩散到环境中,造成危害。
答案
(1)温度酸碱度易培养生活周期短
(2)灭菌消毒损伤DNA的结构(3)比例合适(4)鉴别(或分类)(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生(6)灭菌,3.(2008山东理综,34)科学家发现蝇体内存在一种抗菌活性蛋白。
这种蛋白质具有极强的抗菌能力,受到研究者重视。
(1)分离该抗菌蛋白可用电泳法,其原理是根据蛋白质分子的、大小及形状不同,在电场中的不同而实现分离。
(2)可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的体外抗菌特性。
抗菌实验所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供和。
(3)分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。
培养一定时间后,比较两种培养基中菌落的,确定该蛋白质的抗菌效果。
(4)细菌培养常用的接种方法有和。
实验结束后,对使用过的培养基应进行处理。
解析电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。
牛肉膏主要为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素,蛋白胨主要为微生物提供氮源和维生素。
细菌培养中常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。
实验结束后,对使用过的培养基应进行灭菌处理,以防造成细菌扩散,带来危害。
答案
(1)电荷(带电情况)迁移速度
(2)碳源氮源(3)数量(4)平板划线法稀释涂布平板法(稀释混合平板法)灭菌,4.生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。
我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇,其技术流程为:
纤维素酶解酵母发酵蒸馏成品。
(1)纤维素酶的成本能否下降,是能否实现乙醇工业化生产的关键因素。
纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。
某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程:
土壤取样选择培养梯度稀释鉴别培养。
最好选择怎样的环境采集土样?
以下是一种培养基配方:
纤维素粉5g、NaNO31g、Na2HPO47H2O1.2g、KH2PO40.9g、MgSO47H2O0.5g、KCl0.5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g(蒸馏水定容到1000mL)。
该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度,其原理是。
为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种,可以在鉴别培养基上加入染液,将筛选获得的菌液稀释后用接种到鉴别培养基上,然后挑选产生的菌落作为菌种进行扩大培养。
纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量如何呢?
请设计实验进行检测。
(2)进行工业化酶解时,为了使纤维素酶能反复使用,可以采用技术。
(3)乙醇是酵母菌的发酵产物,发酵时酵母菌直接利用的物质是。
(4)发酵时乙醇浓度升高会对酵母菌产生毒性,从而影响进一步的发酵。
科学家利用基因工程方法创造出一种对乙醇浓度有高耐受力的酵母菌新菌种,该过程需要采用PCR技术扩增目的基因。
与体内DNA复制相比,PCR反应体系需加入哪两种特别的物质?
解析分离土壤中的纤维素分解菌应从纤维素丰富的土壤环境中取土样,这样的土壤中纤维素分解菌较多。
在所给培养基中,纤维素是碳源,只有能利用纤维素的微生物能生长,其他微生物不能生长。
鉴别纤维素分解菌可在培养基中加入刚果红染料,将筛选获得的菌液稀释后用涂布平板法接种到鉴别培养基上,纤维素分解菌产生的纤维素酶能分解纤维素,产生透明圈。
检测纤维素酶产量可根据葡萄糖产量确定。
工业化酶解时,为了使纤维素酶能反复使用,可以采用固定化酶技术。
酵母菌利用葡萄糖(或纤维素酶解产物)发酵产生酒精。
PCR技术扩增目的基因时需加入两种引物、耐热的DNA聚合酶。
答案
(1)选择纤维素丰富的土壤环境培养基中纤维素是主要碳源,有利于纤维素分解菌生长,同时抑制其他微生物生长刚果红涂布平板法透明圈向定量纤维素分解菌培养液中加入定量纤维素,定时测定葡萄糖产量的变化
(2)固定化酶(3)葡萄糖(或纤维素酶解产物)(4)两种引物、耐热的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶),5.从自然菌样筛选较理想生产菌种的一般步骤是:
采集菌样富集培养纯种分离性能测定。
(1)不同微生物的生存环境不同,获得理想微生物的第一步是从合适的环境中采集菌样,然后再按一定的方法分离、纯化。
培养嗜盐菌的菌样应从环境采集。
(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件,使群落中其数量大大增加,从而分离出所需微生物的培养方法。
对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择的培养基,并在条件下培养。
(3)下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解,请分析接种的具体方法。
获得图A效果的接种方法是,获得图B效果的接种方法是。
(4)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行,接种前要进行,在整个微生物的分离和培养中,一定要注意在条件下进行。
解析
(1)嗜盐菌就生活在高盐环境中,如:
海滩等环境。
(2)耐高温淀粉酶应存在于以淀粉为唯一碳源且在高温环境中生存的微生物体内。
(3)从不同菌落之间的关系可以看出,A纯化微生物的接种方法是稀释涂布平板法,B纯化微生物的接种方法是平板划线法。
(4)培养基配制时应先溶化,再调整pH值,然后灭菌。
答案
(1)海滩等高盐
(2)以淀粉为唯一碳源高温(3)稀释涂布平板法平板划线法(4)pH调整高压蒸汽灭菌无菌,6.为了研究微生物的抗药性突变是自发产生的还是在环境因素的作用下产生的,1952年Lederberg夫妇利用大肠杆菌设计了一个影印培养法实验。
影印培养法的实验原理是:
把长有数百个菌落的细菌母种培养皿倒置于包有一层灭菌丝绒布的木质圆柱体(直径略小于培养皿平板)上,使其均匀地沾满来自母种培养皿平板上的菌落,然后通过这一“印章”把母板上的菌落“忠实地”一一接种到不同的其他培养基上。
下图就是利用影印培养技术证明大肠杆菌产生抗链霉素突变基因的实验。
具体方法是:
首先把大量对链霉素敏感的大肠杆菌涂布在不含链霉素的培养基的平板1的表面,待其长出密集的小菌落后,用影印法接种到不含链霉素的培养基平板2上,随即再影印到含有链霉素的培养基平板3上。
经培养后,在平板3上出现了个别抗链霉素的菌落。
对培养皿2和3进行比较,在平板2上找到与平板3上那几个抗性菌落的“孪生兄弟”。
把平板2上与平板3上菌落相应的一个部位上的菌落挑至不含链霉素的培养液4中,经培养后,再涂布在平板5上。
重复以上各步骤,最后在试管12中获得了较纯的抗性菌落。
根据以上材料回答下列问题:
(1)若要仅获得抗链霉素的大肠杆菌,则该如何操作:
(2)大肠杆菌抗链霉素基因存在于细胞的结构上,在基因工程中,该结构常作。
(3)3号、7号、11号培养皿中加入链霉素的作用是,3号培养皿中的菌落比1号、2号中的菌落少很多,这说明了。
(4)该实验最关键的设计思路是。
你认为该实验设计的巧妙之处是。
(5)你认为该实验得到的结论是。
解析
(1)若要获得抗链霉素的大肠杆菌,用含链霉素的选择培养基进行培养即可。
(2)细菌的抗药性基因一般存在于质粒上,质粒在基因工程中常用作载体。
(3)链霉素起选择作用,大部分的大肠杆菌被杀死,少数具有抗性的个体保留下来。
(4)实验中最关键的设计思路是对照
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- 一轮 复习 系列 课件 微生物 培养 应用