实验诊断学实验报告牡丹江医学院Word格式.docx
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一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后,充入血细胞计数池中显微镜下
计数一定容积内的细胞,再换算成每升标本的细胞数报告。
操作步骤:
1、取红细胞稀释液2.0ml毫升,放入一小试管内。
2、用血红蛋白吸管吸血至l0ul处。
3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内,
上清液嗽洗吸管2-3次,立即摇匀。
4、将计数池与盖玻片用软布料擦净,将盖玻片覆盖于计数池上。
5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液,充入计数池中。
6、待2—3分钟,让红细胞完全下沉后,将计数板平放在显微镜台上,用低倍镜观察,如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。
红细胞计数的区域:
中心大方格中的5个中方格(正中一个和四角各一个)。
计数原则:
数上不数下,数左不数右的计数原则即凡压在中方格边线(双线)上的红细胞,
只计上侧与左侧线上的细胞,而压在下侧与右侧线上者不计入。
计算:
答案不唯一,言之有理即可
红细胞数/L=5个中方格内红细胞数X5X10X201X106
或
红细胞数/L=5个中方格内红细胞数十100X1012
式中X5
X10
X201
X106
5个中方格换算成1个大方格
1个大方格容积为0.1ul,换算成1.0uL。
血液的稀释倍数
由u1换算成L
数据处理:
参考值
12
RBC:
Xl0/L
男:
(4〜5.5)X10/L女:
(3.5〜5)X1012/L
新生儿:
(6〜7)X1012/L
注意事项:
1、吸管、试管要注意清洁、干燥以防溶血,操作迅速避免血液凝固,如有血凝块应重新米血。
2充液前,红细胞复液要充分摇匀,红细胞悬液注入计数池内要求分布均匀,不可有气泡,亦不可有多余液体外溢。
3、中方格内红细胞分布应均匀,健康成人每中方格红细胞数约为80—100个,
各中方格内之红细胞相近,如悬殊过大(超过10个细胞以上的)应重混匀再充填。
通过血红蛋白测定
1、氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。
2、掌握红血红蛋白测定的原理、方法及注意事项。
试验仪器:
试管、微量吸管、分光光度计
实验原理:
血红蛋白中的亚铁离子(Fe2+)被咼铁氰化钾氧化成咼离子(Fe3+),血红蛋
白转化成咼铁血红蛋白,咼铁血红蛋白与氰离子(CN-)结合,生成稳定的氰化咼铁血
红蛋白。
用光电比色计在540nm波长比色。
从HicN参考液制作的标准曲线上读取血红蛋白克数。
1、取试剂5毫升加入血液20ul混匀置5分钟
2、用721光电比色仪,540nm波长,试剂为空白调0点比色,读取光密度,查标准曲线得结果。
血红蛋白(g/L)=测定管吸光度X367.7
答案不唯一,言之有理即可
Hb:
g/l
参考值男0.40〜0.54L/L
女:
0.37〜0.48L/L
儿童:
0.35〜0.49L/L
0.50〜0.60L/L
1、做血红蛋白测定,白细胞计数和分类计数,在米血时应先做血膜再做红细
胞,然后做白细胞,血红蛋白检验,避免红细胞破坏。
掌握白细胞计数显微镜计数法原理及技术。
实验器材:
显微镜、微量吸管、计数板、盖玻片、白细胞稀释液。
数-
用稀醋酸液将血液稀释并破坏红细胞,混匀后充入计数池中,于显微镜下计定体积内的白细胞数,经过换算求得每升血液内的白细胞数。
1、取试管1支,加白细胞稀释液0.38ml。
2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血20微升或抗凝血20微升。
3、擦去管尖外部余血、轻轻注入稀释液底部,再吸取上清液清洗3次,摇匀。
4、将计数板与盖玻片用软布擦净,将盖玻片覆盖于计数池上,再
用微量吸管吸取悬液,充入计数池与盖玻片间的细缝隙中,静止2-3分钟,待白细胞
下沉。
5、用低倍镜计数四角的四个大方格内的白细胞数。
(四个大方格内WBC数/4)X10X20X106=WBC数/20X109/升
正常参考值:
成人:
(4-10)X109/升
(15-20)X109/升
6月-2岁:
(11-12)X109/升
显微镜、染色缸和架,载玻片、瑞氏染液、香柏油、二甲苯。
把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片,经wright染色后,显微镜下观察,根
据白细胞形态特点逐个分类计数。
得出各种白细胞的相对比值,并注意观察其形态和质量的变化。
操作步骤:
1、取末梢血1滴。
置于载玻片的一端,以边缘平滑的推片制成血涂片,空
气干燥。
2、用蜡笔在血膜两端划线,以防染液溢出,然后将血片放于染色架上。
3、先加瑞氏染液数滴,使其覆盖整个血膜,固定染色细胞0.5-1分钟。
4、按1:
1或1:
2加缓冲液与染料混匀,染色10分钟左右。
5、在血膜染10分钟后,用缓冲液或接近中性的水冲去洗液,待自然干燥或滤纸吸干后,用镜油观察。
1、先用低倍镜观察血片染色情况,白细胞多少和细胞分布情况。
2、选择血涂片的体尾交界处,染色良好的区域,在油镜下计数
100-200个白细胞,按其形态特征进行分类计数,求出各自白细胞所占数值(百分率)。
3、白细胞分类计数方法很多,常用的有,完全记录法、半记录法、分类计数器计数法。
4、每个病人应分类白细胞数,视白细胞总数多少而定。
5、各类细胞所占的百分率乘以白细胞总数/升,既得每升血液中各类白细胞的度。
数据处理:
自佃今矣针澈
比密计、比密桶
尿液比密与所含溶质成正比,溶质越多,尿比密越高,对浮标的浮力越大,
侵入尿液的比重计部分则越小,读数越大;
反之,读数越小。
1、充分混匀尿液后,沿管壁缓慢倒入小量杯中
2、比重计放入杯中使悬浮于中央,勿触及杯壁或杯底
3、比重计停稳后读取尿液凹面相切的刻度,即为被测尿液的比重
1、尿比密计必须经过校正,应用纯水在规定温度下观察比重是否标准
将结果增加0.001,每低3C则减去0.001
3、尿内含Pr和Glu时的修正:
每10g/L蛋白质将比密减0.003,10g/L葡萄糖将
比密减0.004
4、盐类沉淀的处理,将尿标本加温使盐类溶解,测定
实验操作:
1、取新鲜尿液10ml于试管内1500r/min5分钟。
0.2ml,轻轻离心使尿沉渣有形成
2、待离心机停后,取出离心管,弃去上清液。
留下分混匀。
3、取沉淀于玻片上镜检。
结果判断:
用10X10倍,观察其中有形成分管型,10X40倍观察细胞成分和计数,观察10
个视野管型计数20个视野。
参考值:
1、细胞成分:
最低-最高值/HP
RBC0-3/HPWBC0-5个/HP
2、管型(透明):
平均值/LP
3、尿结晶和盐类数量以每一高倍镜视野(+)(2+)(3+)报告
三、注意事项:
1、清晨空腹第一次尿应在1h内送检
2、准备干净,干燥尿杯,留取中段尿,尿液细胞及管型的计数。
Addis1h尿沉渣计数
四、标本收集:
患者先排尿弃去准确收集3h尿液于清洁干燥器内
(标本留取5:
30-8:
30)
五、实验操作:
准备侧量3h尿量,充分混匀取尿液10ml,1500r/min5分钟,用吸管吸取上层
尿液9ml留取1ml,吸取混匀尿液1滴注入计数盘中,cal计数10大方格,管型20个大方格。
六、计算:
1小时细胞=10个大方格细胞总数X(1000/10)X(3h尿量/3)
1小时Cost计数=(20个大方格管型数/2)X(1000/10)X(3h尿量/3)
式中1000为微升换算成毫升数,10为尿液浓缩倍数
七、实验注意事项:
1、尿液新鲜PH值应在6以下。
2、被检尿SG在1.026以下如<1.016的为低渗尿易破坏cell。
3、尿中有磷酸盐时应加少量冰乙酸,但勿加过多,使cell管型溶解。
磺基水杨酸为生物碱试剂,在酸性磺酸根阴离子上蛋白质氨基的阳离子结合成
不溶性蛋白盐沉淀。
实验试剂:
磺基水杨酸溶液
三、实验方法:
取试管1只加入澄清尿液2-3ml滴加磺基水杨酸试剂0.1ml立即轻轻摇匀1分钟内观察结果。
实验结果判断:
阴性
(一):
清晰透明
微量(土):
黑色背景下仅见轻度浑浊
弱阳性(+):
明显白雾状浑浊,无颗粒
阳性(++):
明显浑浊并出现颗粒
强阳性(+++):
白雾性不明显浑浊并有小块状物
最强阳性(++++):
严重浑浊并大量凝块。
测试项目:
尿胆原、胆红素、酮体、隐血、
蛋白质、葡萄糖、酸碱度、亚硝酸盐。
1、空白(校正块):
尿在试纸块上分布的状态及尿本身的颜色,一般都会给测定结果带来误差,设空白块就是为了排除这些产生误差的因素,各项目都使用同一空白块。
2、酸碱度:
通过pH指示剂测定4.5-9的范围内的pH值,正常人的新鲜尿液pH值在5-7之间。
3、亚硝酸盐:
反应依赖于尿中革兰氏阴性细菌把硝酸盐还原成亚硝酸盐,亚硝酸盐与对氨基苯砷酸反应生成重氮化合物,重氮化合物再与萘基乙二胺二盐酸结合呈现出桃红色。
4、葡萄糖:
根据葡萄糖氧化酶法反应原理,葡糖糖氧化酶特异性氧化3-D-葡糖糖,生成葡糖糖醛酸和过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶的作用下,使指示剂氧化而呈现出蓝色。
5、蛋白质:
根据指示剂蛋白误差法原理,蛋白质与染料结合形成复合物产生变色,特别是
对白蛋白的反应比对球蛋白、血红蛋白、本-周氏蛋白和粘蛋白更为灵敏。
6、隐血:
根据血红蛋白接触活性法原理,通过血红蛋白的类过氧化物酶样作用催化分解过氧化物,使邻联甲苯胺氧化呈色。
7、胆红素:
根据偶氮偶合法的原理,2,4-二氯苯氨重氮盐与胆红素进行特异性反应,并与胆红素的浓度相对应产生不同的颜色。
8、尿胆原:
根据偶氮结合法的原理,尿胆原在强酸条件下和重氮盐偶联形成胭脂红色素。
9、酮体:
根据硝普酸钠法原理,硝普酸钠和酮体在碱性条件下相互作用而呈现紫色,特别是乙酰乙酸对此特别灵敏。
1、测试条件:
环境温度(25±
5)C,相对湿度<
8%,推荐最佳测试温度23-27C.
2、取一试纸条,拿住试纸条印有厂标的一端,把试纸条完全侵入尿样中,2秒钟后取出。
3、在卫生纸上蘸掉试纸条边缘多余的尿液后再放入仪器中进行测定。
项目
参考范围
酸碱度
5.5-7.0
亚硝酸盐
Oumol/L
葡萄糖
v2.8mmol/L
蛋白质
v0.15g/L
隐血
vlOcells/uL
胆红素
尿胆原
3.2-16umol/L
酮体
Ommol/L
实验目的:
掌握尿葡萄糖定性的班氏法。
葡萄糖或其他还原性糖的醛基在热碱性溶液中,能将班氏试剂的蓝色硫酸铜还原
为黄色的氢氧化铜,进而形成红色氧化亚铜沉淀。
实验器材:
试管架、中试管、滴管、试管夹、酒精灯、班氏试剂
1、鉴定班氏试剂质量:
取试管一支,加入班氏试剂2.0ml,摇动试管徐徐加热至沸腾,观察试剂有无颜色及性状变化,若试剂仍为透明蓝色,可进行以下实验。
2、加尿液:
向班氏试剂中加离心后的尿液0.2ml(约4滴),混匀。
3、加热沸腾:
继续煮沸1-2min,或置沸水浴5min,自然冷却。
4、判断结果:
见下表Benidict糖定性实验结果判定
蓝色不变
<
5.6
蓝色中略带绿色.但无沉淀
+
5.6-11.2
绿色,伴少许黄绿色沉淀
28
较多黄绿色沉淀’以黄为主
28-56
匕黄色洱浊,有犬呈沉淀
57-112
人量棕红色或砖红色沉淀
++
>
112
一、实验目的:
掌握ABO血型测定原理及技术。
、实验原理:
红细胞血型抗原与相应抗体特异性结合,可发生凝集反应,通过正反定
型试验来确定ABO血型。
三、实验器材:
载玻片、微量吸管、抗A抗B试剂
四、实验操作:
玻片法;
抗A试剂、抗B试剂分别与受检者全血结合,按照有无凝集判
定结果。
血型
抗A试剂
抗B试剂
A
-
B
AB
五、试验结果:
仪之飞儿
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