农产品有害物质分析实验项目文档格式.docx
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8、10g/L磺酸溶液(称取1g磺胺溶于10%盐酸溶液中,最后定容至100mL);
9、1g/L盐酸萘乙二胺溶液;
10、环己基氨基磺酸钠溶液(精确称取0.1000g环己基氨基磺酸钠,加水溶解,最后定容至100mL。
此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠1mg。
临用时将环己基氨基磺酸钠标准溶液稀释10倍。
此液每毫升含环己基氨基磺酸钠0.1mg)。
三、仪器:
1、分光光度计;
2、漩涡混合器;
3、离心机;
4、透析纸。
四、试样处理:
1、液体样品:
摇匀后直接称取。
含二氧化碳的样品先加热除去,含酒精的样品加40g/L氢氧化钠溶液调至减刑,于沸水浴中加热除去,制成试样。
2、固体样品:
凉果、蜜饯类样品将其剪碎制成试样。
五、操作方法:
1、提取:
a、液体试样:
称取10.0g试样于透析纸中,加10mL透析剂,将透析纸口扎紧,放入盛有100mL水的200mL广口瓶中,加盖,透析20-24h得透析液。
b、固体试样:
称取2.0g已剪碎的试样于研钵中,加少许层析硅胶(或海沙)研磨成干粉状,经漏斗倒入100mL容量瓶中,加水冲洗演播,并将洗液一并转移至容量瓶中,加水至刻度,不时摇动,准确1h后过滤,即得试样。
准确吸取20mL于带塞比色管中,置于冰浴中。
准确吸取10.0mL试样提取液,置于透析纸中,以下操作按液体试样制备法进行。
2、测定:
a、取两支50mL带塞比色管,分别加入10mL透析液和10mL标准液,置于0-3℃冰浴中,加入1mL10g/L亚硝酸钠溶液,1mL100g/L硫酸溶液,摇匀后放入冰水中不时摇动,放置1h。
取出后加15mL三氯甲烷,置于漩涡混合器上振动1min,静置后吸去上清液。
再加15mL水,振动1min,静置后吸去上清液。
分别准确吸取5mL三氯甲烷置于2支25mL比色管中。
另取一支25mL比色管,加入5mL三氯甲烷作参比管。
于各管中加入15mL甲醇,1mL10g/L磺酸溶液,置冰水中15min,取出回复常温后加入1mL1g/L盐酸萘乙二胺溶液,加甲醇至刻度,在15-30℃下放置20-30min,用1cm比色杯于波长550nm处测定吸光度,测得细光度A及As。
B、另取2支50mL带塞比色管,分别加入10mL水和10mL透析液,除不加10g/L亚硝酸钠外,其他如上,测得吸光度Aso及Ao。
六、结果计算:
第二讲防腐剂山梨酸(钾)的测定
山梨酸俗名花楸酸,化学名称为2,4-己二烯酸。
山梨酸及其钾盐作为酸性防腐剂,在酸性介质中对霉菌、酵母菌、好气性细菌有良好的抑制作用,可与这些微生物酶系统中的基结合使之失活。
但对厌氧的芽孢杆菌、乳酸菌无效。
山梨酸是一种不饱和脂肪酸,在肌体中可参与正常的新陈代谢,是目前被认为最安全的一类食品防腐剂。
一、测定原理:
提取样品中山梨酸及其盐类,经硫酸-重铬酸钾氧化成丙二醛,再与硫代巴比妥酸形成红色化合物,其颜色深浅与丙二醛含量成正比,可于530nm处比色定量。
二、试剂:
1、重铬酸钾-硫酸溶液(1/60mL/L重铬酸钾于0.15mol/L硫酸以1︰1混合备用;
2、硫代巴比妥酸溶液[准确称取0.5g硫代巴比妥酸于100mL容量瓶中,加20mL水,加10mL1mol/L氢氧化钠溶液,摇匀溶解后再加1mol/L盐酸,以水定容(临用时配制,6h内使用)];
3、山梨酸钾标准溶液[准确称取250mL山梨酸钾于250mL容量瓶中,用蒸馏水溶解并定容(本溶液山梨酸含量为1mg/mL,使用时再稀释为0.1mg/mL)]。
分光光度计;
组织捣碎机;
10mL比色管。
四、操作方法:
1、样品处理:
称取100g样品,加200mL水于组织捣碎机中捣成匀浆。
称取匀浆100g,加税200mL继续捣1min,称取10g于250mL容量瓶中定容,摇匀,过滤备用。
2、标准曲线绘制:
吸取0.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL山梨酸钾标准溶液于250mL容量瓶中,用水定容。
分别吸取2.0mL于相应的10mL比色管中,加2mL重铬酸钾-硫酸溶液,置于100℃水浴中加热7min,立即加入2.0mL硫代巴比妥酸溶液,继续加热10min,立即用冷水冷却。
于530nm处测吸光度,绘制标准曲线。
3、试样测定:
吸取试样处理液2mL于10mL比色管中,按标准曲线绘制操作,于530nm处,以标准曲线定量。
五、结果计算:
第三讲护色剂亚硝酸盐的测定—盐酸萘乙二胺法
一、测定原理:
样品经沉淀蛋白质,除去脂肪后,在弱酸条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后,再与N-1-萘基乙二胺耦合成紫红色染料,在550nm处有最大吸收,测定吸光度以定量(或与标准比较定量)
二、仪器与试剂:
1、仪器:
小型绞碎机;
10mL比色管。
2、试剂:
a、亚铁氰化钾溶液:
称取106.0g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·
3H2O],用水溶解,并稀释至1000mL。
b、乙酸锌溶液:
称取220.0g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·
2H2O]加30mL冰乙酸溶于水,并稀释至1000mL。
c、饱和硼砂溶液:
称取5.0g硼酸钠溶于热水中,冷却后备用。
d、对氨基苯磺酸溶液(4g/L):
称取0.4g对氨基苯磺酸,溶于100mL20%的盐酸中,置于棕色试剂瓶中混匀,避光储存。
e、2g/L盐酸萘乙二胺溶液(N-1-萘基乙二胺):
称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100mL水中,置于棕色试剂瓶中,避光保存。
f、亚硝酸钠标准储备溶液:
精确称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠,加水移入500mL容量瓶中,稀释至刻度,混匀,在4℃下避光储存,此溶液每毫升相当于200μg亚硝酸钠。
g、亚硝酸钠标准使用液:
准确吸取亚硝酸钠标准储备溶液5.00mL,置于200mL容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀,临用现配,此溶液每毫升相当于5μg亚硝酸钠。
四、操作步骤:
1、样品处理:
称取5.0g经绞碎混匀的样品,置于50mL烧杯中,加12.5mL报和硼砂溶液,搅拌均匀。
以70℃左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中,于沸水浴中加热15min,取出,冷至室温,然后一面转动,一面加入5mL乙酸锌溶液,以沉淀蛋白质。
加水至刻度,混匀,放置30min,除去上层脂肪,用滤纸过滤,弃去初滤液30mL,收集滤液待测。
3、测定:
吸取40mL上述滤液于50mL带塞比色管中,另吸取亚硝酸钠标准使用液(5μg/mL)0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL(相当于0.0μg、1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、7.5μg、10μg、12.5μg),分别置于50mL带塞比色管中,于标准管于试样管中分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液(4g/L),混匀,静置3-5min后各加入1盐酸乙二胺溶液,加水至刻度,混匀,静置15min。
用2cm比色杯,比零管调节零点,于波长538nm测吸光度,绘制标准曲线比较,同时做试剂空白试验。
五、结果计算:
第四讲香肠中亚硝酸盐测定
a、氯化铵缓冲液(PH9.6-PH9.7):
在1L容量瓶中加入500mL水,准确加入20.0mL盐酸,振摇混匀。
准确加入50mL氨水,用水稀释至刻度,必要时用稀盐酸和稀氨水调试PH至所需范围。
b、0.42mol/L(1/2ZnSO4)溶液:
称取120g硫酸锌(ZnSO4·
7H2O),用水溶解并稀释至1L。
c、20g/LNaOH溶液:
称取20g氢氧化钠,用水溶解,稀释至1L。
d、对氨基苯磺酸溶液:
称取10g对氨基苯磺酸,溶于700mL水和300mL冰乙酸中,置于棕色试剂瓶中混匀,室温储存。
e、1g/L盐酸萘乙二胺溶液(N-1-萘基乙二胺):
称取0.1g盐酸萘乙二胺,加100mL60%乙酸溶解混匀后,置于棕色试剂瓶中,在冰箱中保存,一周内稳定。
f、显色剂:
临用前将1g/L盐酸萘乙二胺和对氨基苯磺酸溶液等体积混合,临用现配,仅一次使用。
g、亚硝酸钠标准储备溶液:
精确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠,加水稀释至刻度,混匀,在4℃下避光储存,此溶液每毫升相当于500μg亚硝酸钠。
h、亚硝酸钠标准使用液:
准确吸取亚硝酸钠标准储备溶液1.0mL,置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀,临用现配,此溶液每毫升相当于5μg亚硝酸钠。
准确称取10.0g经绞碎混匀的香肠样品,置于绞碎机中,加70mL水和12mL20g/LNaOH溶液,混匀,测试样品溶液的值,如样品液呈酸性,用20g/LNaOH溶液调至为8,呈碱性,定量转移至200mL容量瓶中,加10mL硫酸锌溶液,混匀,如不产生白色沉淀,再补加2-5mL20g/LNaOH溶液,混匀,在60℃水浴中加热10min,取出,冷至室温,稀释至刻度,混匀。
用滤纸过滤,弃去初滤液20mL,收集滤液待测。
2、亚硝酸盐含量的测定
a、亚硝酸盐标准曲线的制备:
吸取亚硝酸钠标准使用液(5μg/mL)0.0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL(相当于0.0μg、2.5μg、5.0μg、10.0μg、15.0μg、20.0μg、25.0μg),分别置于25mL带塞比色管中,于标准管中分别加入4.5mL氯化铵缓冲液,加2.5mL60%乙酸后立即加入5.0mL显色剂,用水稀释至刻度,混匀,在暗处放置25min,用1cm比色杯,比零管调节零点,于波长550nm测吸光度,绘制标准曲线。
b、样品测定:
吸取样品滤液,置于带塞比色管中,按上述“于标准管中分别加入4.5mL氯化铵缓冲液”起依法操作。
C、绘制标准曲线:
以吸光度为纵坐标,以亚硝酸钠含量为横坐标绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查得样液中亚硝酸盐含量。
第五讲漂白剂的测定—亚硫酸盐(二氧化硫)的测定
(蒸馏法)
在密闭容器中对样品进行酸化并加热蒸馏以释放出其中的二氧化硫,释放物用乙酸铅溶液吸收。
吸收后用盐酸酸化,再以碘标准溶液滴定,根据所消耗的碘标准溶液量计算出样品中二氧化硫的含量。
全玻璃蒸馏器;
碘量瓶;
酸式滴定管。
a、盐酸(1︰1);
b、乙酸铅溶液(20g/L)(称取2g乙酸铅,溶于少量水中并稀释至100mL);
c、碘标准溶液(0.100mol/L);
d、淀粉指示液(10g/L):
称取1g可溶性淀粉,用少许水调成糊状,缓缓倾入100mL沸水中,随加随搅拌,煮沸2min,放冷,备用。
此溶液应临时配制)
三、操作方法:
固体样品用刀切或剪刀剪成碎末后混匀,称取约5.00g均匀样品(样品量可视含量高低而定)。
液体样品可直接吸取5.0-10.0mL,置于500mL圆底蒸馏烧瓶中。
2、测定:
a、蒸馏:
将称好的样品置于圆底蒸馏烧瓶中,加入250mL水,装入冷凝装置,冷凝管下端应插入碘量瓶中的25mL乙酸铅吸收液中,然后,在蒸馏烧瓶中加入10mL盐酸(1︰1),立即盖塞加热蒸馏。
当蒸馏液约200mL时,使冷凝管下端离开液面,再蒸馏1min。
用少量蒸馏水冲洗插入乙酸铅溶液中的装置部分。
在检测样品的同时要做试剂空白试验。
B、滴定:
在取下的碘量瓶中依次加入10mL浓盐酸、1mL淀粉指示液(10g/L)。
摇匀后用碘标准溶液(0.005mol/L)滴定至变蓝且在30s内不褪色为止。
四、结果计算:
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