Waters600型高效液相色谱仪操作多份好资料的整理版.docx
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Waters600型高效液相色谱仪操作多份好资料的整理版
Waters600型高效液相色谱仪
Waters600型高效液相色谱仪标准操作规程
1、仪器组成及电源
1.1仪器组成本仪器由Waters600泵、Waters486紫外检测器和WatersPC800工作站组成,三个部件均有电源插头。
1.2接通电源将电源插头分别插入插座后,依次打开泵、检测器、PC800工作站的电源开关。
2、Waters600泵操作
2.1常规准备工作包括:
开通电源,溶剂脱气,泵头及溶剂管路除空气泡及泵的起动。
2.1.1接通系统电源,控制器开通后进行自检,数秒后通过,接受操作指令。
2.1.2溶剂瓶脱气检查氦气瓶压力调节器,设定压力在50~90psi之间。
按[SETUPI调节后,按ISOCRATIC或DIRECT,在需通气区打入初始值100ml/min,用ENTER输入,通气满15分钟,再按流动相情况分别将氦气流量设定在10~30ml/min。
2.1.3系统中气泡排除泵启动时,调节所需通道流速为lml/min,该通道如A调节为100%。
开启溶剂排放阀用针筒抽取10ml溶剂,关闭排放阀。
柱前气泡如不能排除,则管路在不与色谱柱连接情况下,提高流速至9ml/min,数分钟后将流速减至lml/min。
2.2等度(1socratic)操作用梯度控制器上ISOCRATIC调出等度操作屏幕。
该屏幕可以控制:
(1)溶剂流量设定;送入流动相溶剂组成;设定脱气时氦流量;设定柱加热单元的温度,控制外接继电器开关及控制泵操作。
等度操作时需设定溶剂流量及流动相溶剂组成。
后者通过光标选择在每个流动相中打入其百分比组成,各组成之和应为100%,设定后用ENTER输入。
2.3梯度洗脱操作梯度洗脱需要编制梯度表和程序事件(Programevent)表后,在OPERATEGRADIENT屏幕时运行。
2.3.1梯度表的编制步骤包括:
(1)梯度表的设立;
(2)梯度表的输入/编辑;(3)梯度表的贮存;(4)自动启始操作的指定及(5)删除以前的梯度表。
2.3.1.1梯度表的设立在复印的梯度表中填入每梯度小段的流速、溶剂组成及速率改变曲线(见表1)。
共可设包括开始条件在内的14个小段。
表1梯度表(GRADIENTTABLE)示例
时间(TIME)流速(FLOW)%A%B%C%D曲线(CURVE)
开始(1NITIAL)1.00100000*
30.001.000100006
35.001.001000006
50.000.0010000011
2.3.1.2梯度表的输入/编辑按照(2.3.1.1)梯度表的内容用光标调节位置,将表号(Table#)及各项内容送入相应位置。
流速改变曲线分凹,凸及线性,可借助HELP键调出有关资料参考。
编辑梯度表时删除行方法:
将光标移至准备删去的行,按CLEARLINE。
插入行时进将光标移至表末,打入时间及内容,表格即按本身时间重排。
2.3.1.3梯度表的贮存可以贮存的梯度表共15个,编号为1~15。
欲贮存时按SAVE键、屏幕要求输入表号(1~15),输入表号后按ENTER键。
以前存入的程序号将被要求是否用新表取代。
回答,1=Yes,0=No后即按要求处理。
2.3.1.4自动启始操作的指定用PUMPSETUP屏幕设定延迟执行梯度时间。
2.3.1.5删除以前的梯度表
步骤:
在Table#区打入欲取代的号码,再按ENTER。
如小量修改可直接在现有表上进行,再予以贮存。
如改变甚大必须将旧表删除则按CLEARTABLE删除全表。
永久存贮区删除时:
按SAVE,打入欲删除的表号,按ENTER。
在“REPLACEWITHNEWTABLE?
”出现时,回答1,该表即被删除。
2.3.2程序事件表(PROGRAMEVENTSTABLE)的编制程序事件表包括时间,事件及动作3个项目(见表2)。
表2程序事件表示例
时间事件动作
启始(1NITlAL)12
3.0021
3.5520
步骤:
按PROGEVENT调出PROGRAMEVENT屏幕,在Table#区打入所需号码(1~5),在Time区打入时间及ENTER。
再在"EVENT"处打入指定工作的代号,按ENTER,然后在"ACTION"填入适当值,按ENTER。
消除行时将光标移至该行,按CLEARLINE。
插入行时,光标移表末,打入时间,该表按本身时间重排。
2.3.3梯度程序的运行
2.3.3.1选择梯度/事件表按OPERGRAD,调出梯度操作(OPERATEGRADIENT)屏幕,在Table#区打入所需表号及ENTER,再按OPERGRAD。
2.3.3.2梯度/事件表的运行开始运行程序时按STARTRUN,运行至程序完成或中止运行或另一进样使程序重新开始。
运行过程中改变参数,在键盘未被锁住情况下打入新值后,按ENTER即可。
需要在运行中保持现状暂停执行程序时,可先按MORE,显示新屏幕,再按HOLD,屏幕左下角表示该功能已被保持暂停。
回复梯度时按RESUMERUN。
停止送液可按STOPFLOW,恢复可用RESUMERUN。
操作时改为另表执行,可在TABLE#区打入新表号,按ENTER。
运行时编辑表格,可在表号#区打入欲取出的数字,按ENTER。
修改表格后用其他表格号存入,再重新开始分析。
废弃梯度操作时,按ISOCRATIC,用DPERGRAD回至程序,如再按ISOCRATIC,则原梯度程序即被停止。
3、Waters486紫外检测器参数设定
按“λ”键,输入所需波长,按Enter键即可。
4、PC800工作站参数设定
4.1启动工作站
在DOS提示符下键入“800”并按Enter,进入主屏幕。
4.2数据采集参数:
确定数据采集的通道数,采集数据的带率和运行时间。
4.3积分参数:
在各参数项中填适当数值,积分参数(A)和(B)分别对应通道(A)和通道(B)。
4.4组分表的建立:
可输入组分各、保存时间、作用通道以及组分是否将被定量等基本信息。
4.5样品序列:
将要分析的标样和未知样的数目,使用“填写”下拉菜单中的“填写样品序列”选择项,将数据填入序列表中;选“设置菜单元运行流程”命令,指定本序列要完成的操作,按“确认”退出设置运行流程,最后在编辑样品序列画面按“确认”退到主画面。
4.6存入方法:
从主屏幕选择框选“存储”,并输入一个文件名称,再选择“确认”选择框,则把方法存入磁盘。
4.7运行单一或序列样品:
从“运行”下拉菜单选择“序列样品”或“单一样品”,此时可进样触发或按Alt—S键来触发开始进行数据采集。
5、测定操作
5.1按检测器Autozero键置零,进样阀手柄置“LOAD”位置,将供试液注入进样阀。
5.2进样阀手柄迅速转到“INJECT”位置,注入样品,开始采集色谱数据。
5.3出峰完毕,如果不到设定时间,可使用“退出”菜单中“结束实验”选择框停止数据采集,屏幕上显示确认结束对话窗,选中“是”选择框,则中止数据采集。
6、关机操作
6.1全部实验完成后,按规定用适当溶剂冲洗泵、进样器、柱和检测器。
6.2按工作站、检测器、泵顺序依次关闭备部件电源开关,作好使用登记。
Waters600E-2487 高效液相色谱系统操作规程
1.目的
规范Waters高效液相色谱系统的使用和维护。
2.范围
本规程适用于Waters高效液相色谱系统的使用和维护。
3.职责
质检室仪器分析员负责Waters高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4.系统组成
本系统由Waters600E多溶剂输送系统(有梯度控制器的高压输液泵)、Waters在线脱气机、Rheodyne7725i手动进样阀、Waters2487双通道紫外检测器、Millennium32色谱工作站/电脑等组成,另外还包括打印机、UPS和通风柜等辅助设备。
5.程序
5.1.准备
5.1.1.使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相(应足够;流动相必须用0.45μm滤膜过滤)、样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制),更换合适的色谱柱(柱进出口位置应与流动相流向一致)和定量环。
5.1.2.通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
5.2.开机和泵操作
5.2.1.开机
5.2.1.1.接通UPS的电源,依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器,待检测器自检结束显示测量状态时,打开打印机、电脑显示器、主机。
5.2.1.2.打开Millennium32软件,按「Login...」,输入用户名和密码,按「OK」注册进入系统主界面。
在Project档内选择所需的项目,右击『RunSamples』图标,选择色谱系统“600_2487”后打开QuickSet窗口。
5.2.2.更换溶剂
5.2.2.1.打开600E泵后,转动进口集合管阀手柄(以下简称手柄)至RUN位置;
5.2.2.2.将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂,向右打开参照阀(断开柱和进样器);
5.2.2.3.按[Direct]键使其显示直接控制屏幕,设流速为1ml/min(梯度配比阀在0ml/min时不工作);
5.2.2.4.选择欲使用的某一溶剂通道,设其比例为100%,其它为0%;
5.2.2.5.将输液管从原有溶剂瓶中取出,放入一干净的空瓶中;
5.2.2.6.逆时钟转动手柄至DRAW位置,用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂;
5.2.2.7.再将输液管放入新溶剂瓶内,继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止;
5.2.2.8.转动手柄至RUN位置,将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。
5.2.2.9.重复5.2.2.4.~5.2.2.8.直至所有即将使用的溶剂更换完毕。
5.2.3.排气泡
5.2.3.1.打开参照阀,换流动相为100%超纯水,设流速为10ml/min(注意:
确认参照阀是打开的,否则可能损坏安装好的柱);
5.2.3.2.转动进口集合管阀手柄至DRAW位置,用启动注射器抽出约10ml水;
5.2.3.3.顺时钟转动手柄至INJ位置,缓慢用力使水通过泵头从参照阀出口管排出(注意不要将气泡注入泵中);
5.2.3.4.按[Stopflow]屏幕键停泵,关上参照阀。
5.2.3.5.如按以上方法不能排尽气泡,从柱入口处拆下泵出口管,用塑料管连接至塑料烧杯中,设流速为10ml/min,冲洗2~5min(或更长时间)后停泵,重新接上柱。
5.3.平衡系统(分两种情况进行)
5.3.1.等度模式
5.3.1.1.每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min,以超纯水冲洗系统10min。
5.3.1.2.检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液,如漏液应予以排除。
5.3.1.3.观察泵控制屏幕上的压力值,压力波动应在平均值的5~10%以内。
如超出此范围,可初步判断为柱前管路仍有气泡,重复5.2.3.下的步骤。
5.3.1.4.压力波动平稳后,换检验方法规定的流动相比例冲洗系统。
在检查基线稳定性前,让最少5~6倍柱体积的流动相通过系统。
5.3.1.5.在QuickSet窗口下的InstrumentMethod档内选择所需的仪器方法,按「Monitor」(此后泵由软件控制),观察基线和压力变化。
如果冲洗至基线漂移<10-3Au/min,噪声为10-4Au数量级,且压力平稳时,可认为系统已达到平衡状态,可以进样。
5.3.1.6.按「Abort」图标(左上第五个),停止监视基线。
5.3.2.梯度模式
5.3.2.1.按检验方法规定的条件冲洗平衡系统,并注意压力波动变化和排气泡。
5.3.2.2.在进样前运行1~2次空白梯度。
5.4.进样
5.4.1.在QuickSet窗口内左下部选〈Single〉标签,在SampleName档内填写试样名称;在Function档内选择试样类型(标准选“InjectStandards”;样品选“InjectSamples”);在MethodSet档内选择所需的方法组;在InjectionVolume档内输入进样体积;在RunTime档内输入记录时间。
5.4.2.用针头滤器过滤试样溶液(注射液可不必过滤),用试样溶液清洗注射器,并排除气泡后抽取适量。
5.4.2.1.如按部分装液法,用微量注射器定容进样时,进样量应不大于定量环体积的50%,并要求每次进样体积准确、相同;
5.4.2.2.如按完全装液法,用定量环定容进样时,进样量应不小于定量环体积的3倍(5~10倍准确性更佳)。
5.4.3.按〈Single〉标签内右边的进样(Inject)按钮,等待窗口底部状态档内显示“Waiting”后,方可进样。
5.4.4.将进样阀手柄转动至Load位置,将注射器针完全插入进样阀入口中,平稳地注入试样溶液,除另有规定外,让注射器留在进样阀上,将进样阀手柄快速转动至Inject位置,系统将自动运行,采集数据并记录图谱。
5.4.5.让进样阀手柄保持在Inject位置,到下次进样前1~2min切换回Load位置,将注射器从进样阀中拔出。
5.4.6.先用水再用试样溶液清洗注射器后,按以上程序继续进样,直至完成。
5.5.数据处理(外标法)和打印
5.5.1.右击系统主界面下的『BrowseProject』图标,选择相应的项目,按「OK」进入Project窗口,选〈Channels〉标签。
5.5.2.建立处理方法 选择一个待积分的标准,右击后选“Review”进入Review窗口。
按「ProcessingMethodWizard」图标(左边第一个)进入NewProcessingMethod向导窗口,按「OK」。
5.5.2.1.划入一个感兴趣的最窄的峰,按「Next>」;
5.5.2.2.划入一段包含噪声的基线,按「Next>」;
5.5.2.3.划入一段要积分的区间,按「Next>」;
5.5.2.4.根据情况选择最小峰面积和最小峰高,按「Next>」、「Next>」;
5.5.2.5.在Name档内输入各组分峰的名称,按「Next>」、「Next>」;
5.5.2.6.在MethodName档内填写方法名称,按「Finish」。
退出Review窗口。
5.5.3.修改标准 选中所有标准,右击后选“AlterSample”进入AlterSample窗口。
5.5.3.1.在SampleType档内将Unknown改成Standard;
5.5.3.2.按「Amount」图标(左上第六个)进入ComponentEditor窗口;
5.5.3.3.按「CopyfromProcessMethod」图标(左上第五个),选择刚建立的处理方法,按「Open」,在Value和Units档内分别输入标准所含各组分的数值和单位,完成后按「OK」回到AlterSample窗口;
5.5.3.4.按「Save」图标存盘,退出AlterSample窗口。
5.5.4.积分 先选中所有标准,再选中所有未知样品,右击后选“Process”进入BackgroundProcessing&Reporting窗口,选Usespecifiedprocessingmethods,在右边档内选择刚建立的处理方法,按「OK」。
5.5.5.打印 在Project窗口下选〈Results〉标签。
5.5.5.1.选中要打印的标准/样品,右击后选“Preview”进入OpenReportMethod窗口,选合适的打印方法,按「OK」进入ReportPublisher(Preview)窗口,预览打印的结果。
按打印(Print)图标(左上第二个)即可打印结果。
5.5.5.2.按「Close」可进入ReportPublisher窗口对报告方法进行修改,完成后按「Print」图标(右数第二个)即可打印结果。
5.5.6.数据处理完成后,关闭所有窗口,在主界面下按「Logout」退出系统,关闭Millennium32软件,再依次关闭电脑主机、显示器、打印机。
5.6.清洗系统和关机
5.6.1.数据采集完毕后,关闭检测器,继续以工作流动相冲洗10min后,换水冲洗。
5.6.2.清洗进样阀
5.6.2.1.用启动注射器吸10ml超纯水;
5.6.2.2.将注射针导入口冲洗头(Rheodyne部件号7125-054)连接到注射器出口上(不要针),并将它们一起接到进样口上;
5.6.2.3.使进样阀保持在Inject位置,慢慢将水推入,水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈,由样品溢出管排出。
5.6.3.清洗柱
5.6.3.1.C18柱先用超纯水以1ml/min冲洗40min以上,再用甲醇或乙腈冲洗20min。
5.6.3.2.ProteinPAK60柱先用超纯水冲洗90min以上,再用甲醇或乙腈冲洗40min。
5.6.4.用水冲洗柱后,分别用20ml超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔。
5.6.5.清洗完成后,先将流速降到0,再依次关闭泵、脱气机、UPS,断开电源。
5.6.6.填写使用记录。
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