甲功SOP.docx
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甲功SOP
徐州市东方人民医院检验科免疫室作业指导书
文件编号:
XZDF-3-MY-02
版本/修订号:
A/0
主题内容
三碘甲腺原氨酸定量测定
生效日期:
20150928
第1页共17页
三碘甲腺原氨酸标准操作流程
1目的
明确三碘甲腺原氨酸检测的操作规程,指导检验人员正确进行三碘甲腺原氨酸的检测。
2.适用范围:
2.1适用于T3检测的检验人员。
2.2适合仪器:
RocheModularE170/E601ECL2010/e411
2.3适用试剂:
RocheT3e411/ECL2010/E170/E601
3方法原理:
采用竞争法原理
·第1步:
30μl标本、钌标记的抗T3抗体和ANS,后者释放结合的T3。
·第2步:
加入链霉亲和素包被的微粒和生物素化的T3。
后者占据标记抗体上仍然游离的结合位点,形成抗体-半抗原复合物。
形成的免疫复合物通过生物素、链酶亲和素之间的反应结合到微粒上。
·第3步:
反应混和液吸到测量池中,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。
·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。
此曲线由仪器通过2点定标校正,由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
4临床应用
T3是甲状腺激素对各种靶器官作用的主要激素。
T3(3、5、3'-三碘酪氨酸)主要在甲状腺以外,尤其是在肝脏由T4经酶解脱去5‘位碘生成。
因此,血清T3浓度反映出甲状腺对周边组织的功能甚于反映甲状腺分泌状态。
T4转变成T3的减少会导致T3浓度的下降。
见于药物的影响,如丙醇、糖皮质类固醇、胺碘酮以及严重的非甲状腺疾病(NTI),称为"T3低下综合征"。
与T4一样,99%以上的T3与运输蛋白质结合,但T3的亲和力要低10倍左右。
T3测定可用于T3-甲亢的诊断,早期甲亢的查明和假性甲状腺毒症的诊断。
5样品要求:
血清:
按标准常规方法采集。
血浆:
肝素锂、钠、铵;EDTA-K3;柠檬酸钠;氟化钠/草酸钾抗凝均可。
标本在2-8度可稳定7天,-20度至少可稳定1个月。
只能冻融一次。
含沉淀的标本使用前需离心。
不要加热灭活标本。
6定标
每批T3试剂有一条形码标签,含有该批试剂定标所需的特殊信息。
应用ElecsysT3定标液定标。
定标频率:
每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器注册24小时以内)标定一次,如再次标定即根据下列要求:
E170/E601/Elecsys2010/e411:
·一个月(同一批号试剂)
徐州市东方人民医院检验科免疫室作业指导书
文件编号:
XZDF-3-MY-02
版本/修订号:
A/0
主题内容
三碘甲腺原氨酸定量测定
生效日期:
20150928
第2页共17页
·7天(放置仪器上的同一试剂盒)
7质控
Elecsys通用质控品1(罗氏正常值质控)
Elecsys通用质控品2(罗氏病理值质控)
质控1和质控2至少每24小时或每一次定标后测定一次。
质控间隔期应适用于实验室的具体要求。
检测值应落在确定的范围内,如出现质控值落在范围以外,应采取校正措施。
8试剂准备及稳定期
M:
链霉亲和素包被的微粒(透明瓶盖),1瓶,12ml。
粒子浓度0.72mg/ml,生物素结合能力:
470ng生物素/mg粒子。
含防腐剂。
R1:
钌标记的羊抗T3多克隆抗体(灰盖),1瓶,16ml。
浓度75ng/ml,ANS0.08mg/ml,磷酸缓冲液0.1mol/l,pH7.4。
含防腐剂。
R2:
生物素化的T3(黑盖),1瓶,16ml。
生物素化的T3浓度3ng/ml,ANS0.8mg/ml,磷酸缓冲液0.1mol/l,pH7.4。
含防腐剂。
未打开的试剂盒:
2-8℃至效期末。
开封后,2-8度12周;放在E170/E601Elecsys2010/e411上,8周;
9实验程序
按RocheModularE170/E601ECL2010/e411标准操作流程严格进行。
10抗干扰能力
该方法不受黄疸(胆红素<35mg/dl)、溶血(血红蛋白<2.0g/dl)、脂血(脂质<1800mg/dl)生物素<20ng/ml等干扰。
接受高剂量生物素(>5mg/天)治疗的病人,至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。
不受类风湿因子干扰(1500U/ml),来自透析病人的标本也无干扰。
26种常用药物经试验对本测定无干扰。
Amiodarone治疗可降低T3含量。
苯妥英、保泰松和水杨酸盐可使T3从结合蛋白质中释放出来,从而导致总T3水平下降而游离T3水平正常。
本试验受甲状腺激素自身抗体的干扰。
结合蛋白质(TBG、白蛋白)浓度异常(如NTI病人、怀孕、口服避孕药等)可使总T3水平不正常,尽管甲状腺功能正常。
在患病非常严重的一般病人中,偶尔会出现与T3不同的检测结果。
对这样的病例,建议做游离T3或游离T4检测。
11检测范围
0.300─10.00nmol/l或O.195-6.51ng/ml
12正常参考值:
1.3-3.1nmol/l或0.8-2.0ng/ml(范围:
第2.5百分位-第97.5百分位,n=514)
如有必要,实验室应自己测定一个正常值范围。
13分析灵敏度
<0.300nmol/l或O.195ng/ml。
徐州市东方人民医院检验科免疫室作业指导书
文件编号:
XZDF-3-MY-02
版本/修订号:
A/0
主题内容
游离三碘甲腺原氨酸定量测定
生效日期:
20150928
第3页共17页
游离三碘甲腺原氨酸标准操作流程
1目的
明确游离三碘甲腺原氨酸检测的操作规程,指导检验人员正确进行游离三碘甲腺原氨酸的检测。
2.适用范围:
2.1适用于FT3检测的检验人员。
2.2适合仪器:
RocheModularE170/e601ECL2010/e411
2.3适用试剂:
RocheFT3e411/ECL2010/E170/e601
3方法原理:
采用竞争法原理,整个过程18分钟完成。
·第1步:
30µl标本和钌标记的抗T3抗体混匀。
·第2步:
加入链霉亲和素包被的微粒和生物素化的T3。
后者占据标记抗体上仍然游离的结合位点,形成抗体-半抗原复合物。
形成的免疫复合物通过生物素、链酶亲和素之间的反应结合到微粒上。
·第3步:
反应混和液吸到测量池中,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。
·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。
此曲线由仪器通过2点定标校正,由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
4临床应用
三碘甲腺原氨酸(T3)是血清中的甲状腺激素之一,起调节代谢作用。
测定该激素的含量对鉴别诊断甲状腺功能是否正常、亢进或低下有重要意义。
绝大多数的T3与其转运蛋白质(TBG、前白蛋白、白蛋白)结合,fT3是T3的生理活性形式。
fT3测定的优点是不受其结合蛋白质浓度和结合特性变化的影响。
5样品要求:
血清:
按标准常规方法采集。
血浆:
肝素锂、钠、铵;EDTA-K3;柠檬酸钠;氟化钠/草酸钾抗凝均可。
标本在2-8度可稳定7天,-20度至少可稳定1个月。
只能冻融一次。
含沉淀的标本使用前需离心。
不要加热灭活标本。
6定标
每批fT3试剂有一条形码标签,含有该批试剂定标所需的特殊信息。
应用ElecsysfT3定标液定标。
定标频率:
每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器注册24小时以内)标定一次,如再次标定即根据下列要求:
E170/e601/Elecsys2010/e411:
·一个月(同一批号试剂)
·7天(放置仪器上的同一试剂盒)
7质控
徐州市东方人民医院检验科免疫室作业指导书
文件编号:
XZDF-3-MY-02
版本/修订号:
A/0
主题内容
游离三碘甲腺原氨酸定量测定
生效日期:
20150928
第4页共17页
Elecsys通用质控品1(罗氏正常值质控)
Elecsys通用质控品2(罗氏病理值质控)
质控1和质控2至少每24小时或每一次定标后测定一次。
质控间隔期应适用于实验室的具体要求。
检测值应落在确定的范围内,如出现质控值落在范围以外,应采取校正措施。
8试剂准备及稳定期
M:
链霉亲和素包被的微粒(透明瓶盖),1瓶,12ml。
粒子浓度0.72mg/ml,生物素结合能力:
470ng生物素/mg粒子。
含防腐剂。
R1:
钌标记的羊抗T3多克隆抗体(灰盖),1瓶,14ml。
浓度75ng/ml,磷酸缓冲液0.1mol/l,pH7.4。
含防腐剂。
R2:
生物素化的T3(黑盖),1瓶,14ml。
浓度5ng/ml,磷酸缓冲液0.1mol/l,pH7.4。
含防腐剂。
未打开的试剂盒:
2-8℃至效期末。
开封后,2-8度12周;放在E170/e601上,5周;放在Elecsys2010/e411上,8周;
9实验程序
按RocheModularE170/e601ECL2010/e411标准操作流程严格进行。
10抗干扰能力
该方法不受黄疸(胆红素<37mg/dl)、溶血(血红蛋白<2g/dl)、脂血(脂质<1500mg/dl)生物素<20ng/ml等干扰。
接受高剂量生物素(>5mg/天)治疗的病人,至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。
24种常用药物经试验对本测定无干扰。
但治疗浓度的乙酰水杨酸和呋塞米可升高fT3水平。
11检测范围
0.400─50.00pmol/l或O.260-32.55pg/ml
12正常参考值:
2.8-7.1pmol/l或1.8-4.6pg/ml(范围:
第2.5百分位-第97.5百分位,n=962)。
如有必要,各实验室应自己测定一个正常值范围。
13分析灵敏度
<0.400pmol/l或O.260pg/ml。
徐州市东方人民医院检验科免疫室作业指导书
文件编号:
XZDF-3-MY-02
版本/修订号:
A/0
主题内容
甲状腺素定量测定
生效日期:
20150928
第5页共17页
甲状腺素标准操作流程
1目的
明确甲状腺素检测的操作规程,指导检验人员正确进行游离甲状腺素的检测。
2.适用范围:
2.1适用于T4检测的检验人员。
2.2适合仪器:
RocheModularE170/e601ECL2010/e411
2.3适用试剂:
RocheT4e411/ECL2010/E170/e601
3方法原理:
采用竞争法原理
·第1步:
15µl标本、钌标记的抗T4抗体和ANS,后者使标本中的T4从结合蛋白质上释放出来.。
·第2步:
加入链霉亲和素包被的微粒和生物素化的T4。
后者占据标记抗体上仍然游离的结合位点,形成抗体-半抗原复合物。
形成的免疫复合物通过生物素、链酶亲和素之间的反应结合到微粒上。
·第3步:
反应混和液吸到测量池中,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。
·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。
此曲线由仪器通过2点定标校正,由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
4临床应用
T4是甲状腺分泌的主要产物,也是构成下丘脑-垂体前叶-甲状腺调节系统完整性不可缺少的成份。
对合成代谢有影响作用。
T4由二分子的二碘酪氨酸(DIT)在甲状腺内偶联生成。
T4与甲状腺球蛋白结合贮存在甲状腺滤泡的残腔中,在TSH的调节下分泌释放。
血清中99%以上的T4以与其它蛋白质结合的形式存在。
由于血清中运输蛋白质的浓度易受外源性和内源性作用的影响,因此,在检测血清T4浓度的过程中需考虑到结合蛋白质的状况。
如果忽略这一点,结合蛋白质浓度的变化(如怀孕期、服用雌激素或者患肾病综合征等),会导致反映甲状腺代谢状况检测的错误结果。
5样品要求:
血浆:
肝素锂、钠;EDTA-K3;枸橼酸盐抗凝。
其中用枸橼酸钠抗凝的血浆,测定结果需+10%。
如用氟化钠/草酸钾抗凝,结果较血清约低26%。
标本在2-8度可稳定7天,-20度至少可稳定1个月。
只能冻融一次。
含沉淀的标本使用前需离心。
不要加热灭活标本。
6定标
每批T4试剂有一条形码标签,含有该批试剂定标所需的特殊信息。
应用ElecsysT4定标液定标。
定标频率:
每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器注册24小时以内)标定一次,如再次标定即根据下列要求:
E170/e601/Elecsys2010/e411:
徐州市东方人民医院检验科免疫室作业指导书
文件编号:
XZDF-3-MY-02
版本/修订号:
A/0
主题内容
甲状腺素定量测定
生效日期:
20150928
第6页共17页
·一个月(同一批号试剂)
·7天(放置仪器上的同一试剂盒)
7质控
Elecsys通用质控品1(罗氏正常值质控)
Elecsys通用质控品2(罗氏病理值质控)
质控1和质控2至少每24小时或每一次定标后测定一次。
质控间隔期应适用于实验室的具体要求。
检测值应落在确定的范围内,如出现质控值落在范围以外,应采取校正措施。
8试剂准备及稳定期
M:
链霉亲和素包被的微粒(透明瓶盖),1瓶,12ml。
粒子浓度0.72mg/ml,生物素结合能力:
470ng生物素/mg粒子。
含防腐剂。
R1:
钌标记的羊抗T4多克隆抗体(灰盖),1瓶,18ml。
浓度100ng/ml,ANS1mg/ml,磷酸缓冲液0.1mol/l,pH7.4。
含防腐剂。
R2:
生物素化的T4(黑盖),1瓶,18ml。
浓度20ng/ml,磷酸缓冲液0.1mol/l,pH7.4。
含防腐剂。
未打开的试剂盒:
2-8℃至效期末。
开封后,2-8度12周;放在E170/e601Elecsys2010/e411上,8周;
9实验程序
按RocheModularE170/e601ECL2010/e411标准操作流程严格进行。
10抗干扰能力
该方法不受黄疸(胆红素<37mg/dl)、溶血(血红蛋白<2.3g/dl)、脂血(脂质<2500mg/dl)生物素<100ng/ml等干扰。
接受高剂量生物素(>5mg/天)治疗的病人,至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。
不受类风湿因子干扰(2400U/ml),来自透析病人的标本也无干扰。
15种常用药物经试验对本测定无干扰。
使用含D-T4降血脂制剂的病人不适合本试验,假如这种病人要检查甲状腺功能,须停药4-6周,等恢复生理状态后再进行测定。
11检测范围
5.40─320.0nmol/l或O.420-24.86μg/dl。
12正常参考值:
血清标本取自德国和日本的甲状腺试验正常者
66-181nmol/l或5.1-14.1μg/dl)
FT4指数(T4/TBI):
62-164nmol/l或4.8-12.7mg/dl(n=825)
II.范围:
99%百分位,n=275,血清或血浆标本取自美国的健康人群
59-154nmol/l或4.6-12.0ug/dl
FT4指数:
57-147nmol/l或4.4-11.4ug/dl
13分析灵敏度
<5.40nmol/l或O.420μg/dl。
徐州市东方人民医院检验科免疫室作业指导书
文件编号:
XZDF-3-MY-02
版本/修订号:
A/0
主题内容
游离四碘甲腺原氨酸定量测定
生效日期:
20150928
第7页共17页
游离四碘甲腺原氨酸标准操作流程
1目的
明确游离四碘甲腺原氨酸检测的操作规程,指导检验人员正确进行游离四碘甲腺原氨酸的检测。
2.适用范围:
2.1适用于FT4检测的检验人员。
2.2适合仪器:
RocheModularE170/e601ECL2010/e411
2.3适用试剂:
RocheFT4e411/ECL2010/E170/e601
3方法原理:
采用竞争法原理
·第1步:
30µl标本和钌标记的抗T3抗体混匀。
·第2步:
加入链霉亲和素包被的微粒和生物素化的T3。
后者占据标记抗体上仍然游离的结合位点,形成抗体-半抗原复合物。
形成的免疫复合物通过生物素、链酶亲和素之间的反应结合到微粒上。
·第3步:
反应混和液吸到测量池中,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。
·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。
此曲线由仪器通过2点定标校正,由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
4临床应用
四碘甲腺原氨酸(T4)是甲状腺生理调节系统的一部分。
对总代谢有作用,绝大多数的T4与其转运蛋白质(TBG、前白蛋白、白蛋白)结合,fT4测定是临床常规诊断的重要部分。
当怀疑甲状腺功能紊乱时,fT4和TSH常常一起测定。
fT4也适合用作甲状腺抑制治疗的监测手段。
fT4测定的优点是不受其结合蛋白质浓度和结合特性变化的影响。
5样品要求:
血清:
按标准常规方法采集。
血浆:
肝素锂、钠、铵;EDTA-K3;柠檬酸钠;氟化钠/草酸钾抗凝均可。
标本在2-8度可稳定7天,-20度至少可稳定1个月。
只能冻融一次。
含沉淀的标本使用前需离心。
不要加热灭活标本。
6定标
每批fT4试剂有一条形码标签,含有该批试剂定标所需的特殊信息。
应用ElecsysfT4定标液定标。
定标频率:
每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器注册24小时以内)标定一次,如再次标定即根据下列要求:
E170/e601/Elecsys2010/e411:
·一个月(同一批号试剂)
·7天(放置仪器上的同一试剂盒)
7质控
Elecsys通用质控品1(罗氏正常值质控)
徐州市东方人民医院检验科免疫室作业指导书
文件编号:
XZDF-3-MY-02
版本/修订号:
A/0
主题内容
游离四碘甲腺原氨酸定量测定
生效日期:
20150928
第8页共17页
Elecsys通用质控品2(罗氏病理值质控)
质控1和质控2至少每24小时或每一次定标后测定一次。
质控间隔期应适用于验室的具体要求。
检测值应落在确定的范围内,如出现质控值落在范围以外,应采取校正措施。
8试剂准备及稳定期
M:
链霉亲和素包被的微粒(透明瓶盖),1瓶,12ml。
粒子浓度0.72mg/ml,生物素结合能力:
470ng生物素/mg粒子。
含防腐剂。
R1:
钌标记的羊抗T4多克隆抗体(灰盖),1瓶,18ml。
浓度50ng/ml,磷酸缓冲液0.1mol/l,pH7.0。
含防腐剂。
R2:
生物素化的T4(黑盖),1瓶,18ml。
浓度2.5ng/ml,磷酸缓冲液0.1mol/l,pH7.0。
含防腐剂。
未打开的试剂盒:
2-8℃至效期末。
开封后,2-8度12周;放在E170/e601Elecsys2010/e411上,8周;
9实验程序
按RocheModularE170/e601ECL2010/e411标准操作流程严格进行。
10抗干扰能力
该方法不受黄疸(胆红素<41mg/dl)、溶血(血红蛋白<2g/dl)、脂血标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡;放入仪器后应在(脂质<2000mg/dl)生物素<100ng/ml等干扰。
接受高剂量生物素(>5mg2小时内测定以避免蒸发的影响。
/天)治疗的病人,至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。
不受类风湿因子干扰(339U/ml)透析病人的标本也不干扰。
26种常用药物经试验对本测定无干扰。
但治疗浓度的呋塞米可升高fT4水平。
使用含DT4降血脂制剂的病人不适合本试验,假如要检查甲状腺功能,须停药4-6周,等恢复生理状态后再进行fT4测定。
11检测范围
0.300─100.0pmol/l或O.023-7.77ng/dl。
12正常参考值:
12-22pmol/l或0.93-1.7ng/dl(范围:
第2.5百分位-第97.5百分位,n=801)
如有必要,各实验室应自己测定一个正常值范围。
13分析灵敏度
<0.300pmol/l或O.023ng/dl。
徐州市东方人民医院检验科免疫室作业指导书
文件编号:
XZDF-3-MY-02
版本/修订号:
A/0
主题内容
促甲状腺激素定量测定
生效日期:
20150928
第9页共17页
促甲状腺激素标准操作流程
1目的
明确促甲状腺激素检测的操作规程,指导检验人员正确进行促甲状腺激素的检测。
2.适用范围:
2.1适用于TSH检测的检验人员。
2.2适合仪器:
RocheModularE170/e601ECL2010/e411
2.3适用试剂:
RocheTSHe411/ECL2010/E170/e601
3方法原理:
采用双抗体夹心法原理
·第1步:
50µl标本、生物素化的抗TSH单克隆抗体和钌(Ru)标记的抗TSH单克隆抗体混匀,形成夹心复合物。
·第2步:
加入链霉亲和素包被的微粒,让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
·第3步:
反应混和液吸到测量池中,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。
·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。
此曲线由仪器通过2点定标校正,由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
4临床应用
TSH检测是查明甲状腺功能的初筛试验。
游离甲状腺浓度的微小变化就会带来TSH浓度向反方向的显著调整。
因此,TSH是测试甲状腺功能的非常敏感的特异性参数,特别适合于早期检测或排除下丘脑-垂体-甲状腺中枢调节环路的功能紊乱。
5样品要求:
血清:
按标准常规方法采集。
血浆:
肝素锂、钠、铵;EDTA-K3;柠檬酸钠;氟化钠/草酸钾抗凝均可。
标本在2-8度可稳定7天,-20度至少可稳定1个月。
只能冻融一次。
含沉淀的标本使用前需离心。
不要加热灭活标本。
6定标
每批TSH试剂有一条形码标签,含有该批试剂定标所需的特殊信息。
应用ElecsysTSH定标液定标。
定标频率:
每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器注册24小时以内)标定一次,如再次标定即根据下列要求:
E170/e601/Elecsys2010/e411:
·一个月(同一批号试剂)
·7天(放置仪器上的同一试剂盒)
7质控
Elecsys通用质控品1(罗氏正常值质控)
Elecsys通用质控品2(罗氏病理值质控)
徐州市东方人民医院检验科免疫室作业指导书
文件编号:
XZDF-3-MY-02
版本/修订号:
A/0
主题内容
促甲状腺激素定量测定
生效日期:
20150928
第10页共17页
质控1和质控2至少每24小时或每一次定标后测定一次。
质控间隔期应适用于实验室的具体要求。
检测值应落在确定的范围内,如出现质控值落在范围以外,应采取校正措施。
8试剂准备及稳定期
M:
链霉亲和素包被的微粒(透明瓶盖),1瓶,12ml。
粒子浓度0.72mg/ml,生物素结合能力:
470ng生物素/mg粒子。
含防腐剂。
R1:
生物素化的抗TSH单克隆抗体(灰盖),1瓶,14ml。
浓度2.0mg/l,磷酸缓冲液0.1mol/l,pH7.2。
含防腐剂。
R2:
Ru(bpy)32+标记的抗TSH单克隆抗体(黑盖),1瓶,12ml,浓度1.2mg/l,磷酸缓冲液0.1mol/l,pH7.2。
含防腐剂。
未打开的试剂盒:
2-8℃至效期末。
开封后,2-8度12周;放E170/e601上,6周;放在Elecsys2010/e411上,8周。
9实验程序
按RocheModularE
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