微生物除去实验方法1015文档格式.docx
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2.3白色葡萄球菌菌悬液菌悬液的制备:
按照《消毒技术规》(2002)2.1.1.2进行制备。
2.4试验的大致所需时间:
见附表二
3.试验的设备
撞击式空气微生物采样器:
对空气中细菌的捕获率大于95%
喷雾染菌装置(气溶胶喷雾器):
喷出的气溶胶微粒的直径90%以上应小于10um
高压蒸汽灭菌器
恒温培养箱
干热灭菌器
高效滤器
颗粒计数器(稀释器)
温湿计
空气压力计
冷藏箱
气雾舱(试验舱)
抽风机
紫光灯
小吊扇
硅橡胶条
玻璃密封胶
钢化玻璃
菌落计数器
4.实验材料
牛肉膏10.0g
蛋白胨20.0g
氯化钠10.0g
琼脂15.0g
蒸馏水2000ml
白色葡萄球菌菌悬液
5.试验步骤
5.1灭菌:
用高压蒸汽灭菌器对试验中要用到的试验器皿进行灭菌,时间大约1h。
(采样器、冷藏箱、小吊扇、空气压力计、抽风机等)
5.2通过高效过滤器对气雾舱空气进行净化除菌,约0.5h,使其洁净度不低于7级(万级)
【1】
5.3调节气雾舱的温度和相对湿度,约20min,维持稳定一段时间后,10min,(以保证整个实验过程中温度和相对湿度相对恒定)气雾舱密闭,整个试验中不得再次打开。
5.4打开操作间的送风装置,约0.5h,送入经过高效过滤器的循环风以维持操作间的空气压力为正压(15Pa-30Pa),防止试验舱中的微生物气溶胶外泄。
5.5取试验菌悬液,用营养肉汤培养基【2】稀释成所需浓度(需验证)。
按照喷雾染菌装置设定的压力、气体流量及喷雾时间喷雾染菌,约5min,要求边喷雾,边用空气搅拌设备(如小吊扇)搅拌。
喷雾染菌完毕,要求继续搅拌10min,然后静置15min。
5.6同时对试验组和对照组气雾室分别进行运行前细菌浓度采样,采样时间为1min-5min,采样时采样头应向上方。
要求气雾室空气中各阳性对照菌数应为5.0×
104CFU/m3-5.0×
105CFU/m3,(此处需要实验验证来确定菌落数的多少和步骤5中喷雾时间的长短)否则试验无效。
5.7运转被测样机至厂家规定的最高除菌条件状态(如厂家没有规定,以最高风速、最大出风状态为准)。
对于空调器产品,根据送风状态进行测试。
5.8测试时间计算:
T=2500V/(15×
2.7N)T-测试时间(h),N-空气净化器功率(W)V-气雾室容积(m3)
测试时间最少不短于15min,最长不超过2h。
根据测试时间长短,设置2-3个采样时间点。
5.9被测样机运行到规定测试时间后,对试验组和对照组气雾室同时进行采样,采样时间为1min-5min,采样时采样头应向上方。
采样过程中被测样机应停止运行。
5.10在室温状态下,采样营养琼脂【3】平板必须于采样后尽快放入36℃士1℃培养箱中培养24h-48h,然后计数生长菌落数(换算成CFU/m3,单位),换算公式如式:
空气含菌量(CFU/m3)=采样平板上总菌落数(CFU)/[采样流量(L/min)×
采样时间(min)]×
1000
注:
未用的同批培养基应各取1份-2份,与试验采样的样本同时进行培养,作为阴性对照。
阴性对照组不得出现细菌生长,否则说明培养基有污染,试验无效,应取无污染的培养基重新进行测试。
5.11试验完毕后,对气雾舱空气做最终消毒。
打开紫外灯,消毒lh-2h后,开启抽风机,过滤除菌。
5.12试验应重复进行测试3次(每次试验间隔至少ld),分别计算除菌率(取3次试验结果的算术平均值为最后的试验结果)。
5.13试验数据处理,得出试验结论
自然消亡率=(对照组初始时菌落数-对照组结束时菌落数)/对照组初始时菌落数×
100%
抗菌(除菌率)=[实验组初始时菌落数(1-自然消亡率)-实验组结束时菌落数]/实验组初始时菌落数(1-自然消亡率)×
6.试验结论
除菌率大于自然消亡率,则说明空气净化器有除菌作用,除菌率与自然消亡率差距越大,表示该空气净化器除菌效果明显;
若除菌率几乎等于自然消亡率,则说明该空气净化器除菌效果不明显。
【1】7级(万级)表示空气中悬浮粒子粒径的最大上限为:
0.5um粒径粒子数为352000pc/m3,1um粒径粒子数为83200pc/m3,5um粒径粒子数为2930pc/m3。
【2】营养肉汤培养基:
取牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g,氯化钠5.0g,蒸馏水1000ml,将所有溶于蒸馏水中,调PH为7.2-7.4,分装,于121度蒸汽灭菌20min备用。
【3】琼脂培养基:
取牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g,氯化钠5.0g,琼脂15.0g,蒸馏水1000ml,除琼脂外其他都溶于蒸馏水中,调PH为7.2-7.4,加入琼脂,加热溶解,分装,于121度蒸汽灭菌20min备用。
附件一
附件二FA-1型六级筛孔撞击式空气微生物采样器
∙温湿度/风速/风压
技术参数原理:
撞击法
捕获率:
>
98%
采样流量:
28.3L/min
电源:
AC220V35W
尺寸:
撞击器φ108×
192mm
主机200×
150×
125mm
重量:
4kg
附件三喷雾染菌装置(气溶胶喷雾器)
主要参数
粒谱直径1号喷嘴:
10±
5um,用于吸入治疗和免疫给药
2号喷嘴:
20±
10um,用于空气消毒
3号喷嘴:
50±
10um,用于表面消毒
4号喷嘴:
100±
喷雾时间:
1号喷嘴约30min/L
2号喷嘴约20min/L
3号喷嘴约10min/L
4号喷嘴约5min/L
药液容量A型1.5L
B、C型2.0L
A型制冷最低温度10℃
静风喷雾射程>
6m
工作温度(0~40)℃
主机尺寸W×
D×
H(520×
142×
230)mm
仪器噪声<
80dB(A)
整机重量约3.5kg
工作电源AC220V±
10%,50Hz
功 耗<
1000W
附件四高压蒸汽灭菌器
高压灭菌的原理是:
在密闭的蒸锅,其中的蒸汽不能外溢,压力不断上升,使水的沸点不断提高,从而锅温度也随之增加。
在0.1MPa的压力下,锅温度达121℃。
在此蒸汽温度下,可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的原理。
步骤:
1.首先将层灭菌桶取出,再向外层锅加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。
2.放回灭菌桶,并装入待灭菌物品。
注意不要装得太挤,以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。
三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触,以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
3.加盖,并将盖上的排气软管插入层灭菌桶的排气槽。
再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓,使螺栓松紧一致,勿使漏气。
4.用电炉或煤气加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除锅的冷空气。
待冷空气完全排尽后,关上排气阀,让锅的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。
当锅压力升到所需压力时,控制热源,维持压力至所需时间。
5.灭菌所需时间到后,切断电源或关闭煤气,让灭菌锅温度自然下降,当压力表的压力降至0时,打开排气阀,旋松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品。
如果压力未降到0时,打开排气阀,就会因锅压力突然下降,使容器的培养基由于外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口,造成棉塞沾染培养基而发生污染。
6.将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时,经检查若无杂菌生长,即可待用。
附表一试验器材一览表
序号
产品图片
产品名称/型号
产品简单介绍
1
MOV-211S三洋干热灭菌器
/
2
温控围:
室温5~60℃
温度波动:
大不于±
0.5℃
温度均匀性:
≤±
1℃
工作电源:
交流220V,50HZ
3
高效过滤器主要用于捕集0.5um以下的颗粒灰尘及各种悬浮物。
采用超细玻璃纤维纸作滤料,胶版纸、铝膜等材料作分割板,与木框铝合金胶合而成。
4
温度围0-50℃
湿度围0%-100%
5
密封性好
可以进行消毒、杀菌
6
7
用来消毒、杀菌
8
9
10
将计数笔连接到计数器主机上,把培养皿放在白光板上,打开白光灯和显示屏电源,用计数笔触动(力量大小以显示屏能计数为准)培养皿中的菌落,LED显示屏显示所点过的细菌数量;
计数完成可用计数笔在稿纸上暂记总数,重新快关显示屏电源,LED显示屏自动归零,二次计数与稿纸上一次总数比较,数量相同可得较准确的结果。
本仪器配有减数系统,若不慎误点菌落,计数多出,可利用减数按键向下减数以恢复正常的计数值
11
LZJ-01D-02型激光大屏幕液晶显示型尘埃粒子计数器
12
13
附表二试验时间统计
试验步骤
大致时间
灭菌
1h
通过高效过滤器对气雾舱空气进行净化除菌
0.5h
调节气雾舱的温度和相对湿度
打开操作间的送风装置,维持正压
喷雾染菌
细菌浓度采样
0.1h
测试时间间隔
1.5h
试验后采样
培养箱中培养
36h
消毒除菌
3重复试验,每次间隔至少24h
134.4h
总计:
174.6h
- 配套讲稿:
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