胶回收试剂盒说明书生工.pdf
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胶回收试剂盒说明书生工.pdf
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SanPrep柱式DNA胶回收试剂盒产品编号:
SK8131/SK8132包装规格:
50次/100次试剂盒组成试剂盒组成组分SK8131,50次SK8132,100次纯化套件(吸附柱+收集管)50套100套BufferB230ml60mlWashSolution12ml24mlElutionBuffer5ml10ml操作手册1份1份保存方法及注意事项保存方法及注意事项本试剂盒在室温(1525C)干燥保存,有效期见包装。
BufferB2中含有刺激性的化合物,操作过程中应穿上实验服,戴好乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,防止吸入口鼻。
沾染皮肤或眼睛后,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
产品介绍产品介绍本试剂盒适用于从TAE和TBE琼脂糖凝胶中回收100bp10kb的DNA片段,回收效率可达80%。
该试剂盒采用特殊的吸附膜,能够有选择性地吸附核酸分子,去除其他杂质,得到高质量的DNA回收产物。
本试剂盒采用的膜结合液中不含有干扰酶活性的碘化钠,所得到的DNA可直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学试验。
本试剂盒具有以下特点:
1.适用范围广,回收效率高,对于100bp10kb之间的DNA片段回收效率在80%以上。
2.操作简单快速,整个回收过程仅须15分钟左右。
3.洗脱效率高,洗脱体积最小可低至15l。
快速操作流程(胶回收)快速操作流程(胶回收)1.准备工作。
a.检查WashSolution中是否已经加入乙醇。
b.检查BufferB2是否出现沉淀。
c.将水浴锅调至55C。
2.从琼脂糖凝胶中割下含目标片段的胶块,称重。
3.加入胶块重量3-6倍的BufferB2,50C水浴5-10分钟溶胶。
4.(选做)对于1%,1.5%,每100mg凝胶加入400lBufferB2;凝胶浓度1.5%,2%,每100mg凝胶加入500lBufferB2;凝胶浓度2%,每100mg凝胶加入600lBufferB2。
3.将离心管置于50C水浴510min,间或混匀,直至胶块完全溶化。
胶块完全溶化即可,过长时间的处理可能导致DNA损伤。
4.(可选步骤)当目的片段7.0)代替。
将ElutionBuffer预热至60C可以进一步提高得率。
如果片段4kb,在3760C温浴2分钟可以显著提高得率。
请勿使用小于15l的洗脱液进行洗脱。
常见问题解答常见问题解答1.DNA回收效率较低或者未回收到目的片段a.胶块溶解不完全。
可适当延长水浴的时间,并增加颠倒混匀的频率辅助溶解。
b.胶块体积太大,溶胶困难。
可先将胶块切碎,溶胶后分多次上柱离心,回收DNA片段。
c.漂洗液中未加入正确量的无水乙醇。
d.Agarose抑制DNA与吸附材料的结合。
应尽量切除不含目的DNA片段的Agarose胶。
e.提高BufferB2的相对浓度,增加DNA与吸附膜的作用时间(静置时间),在一定程度上可以提高回收率。
f.如果纯化的片段长度大于4kb或者目的片段含量较少,可以将洗脱液再次加入至吸附柱中进行洗脱,以提高回收效率。
g.洗脱液加入位置不正确。
洗脱液应加在硅胶膜的中心部位,以完全覆盖硅胶膜的表面,达到最大的洗脱效率。
h.洗脱液不合适。
洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响,如果使用水进行洗脱,请确保其pH值7.0,pH值过低可能导致低洗脱效率。
i.洗脱时间过短。
洗脱时放置1分钟可达到较好的洗脱效果。
洗脱时将洗脱液预热至60C后使用,有利于提高洗脱效率。
2.回收DNA进行后续酶切反应效率低a.洗脱产物中含有残留的乙醇。
可将离心后的吸附柱开盖室温干燥2-5分钟,有助于残留的酒精挥发完全。
b.盐份的残留。
请确保使用WashSolution洗涤两次,每次500l沿管壁加入,有助于彻底去除管壁上的盐份。
c.琼脂糖质量差。
请选用高质量的琼脂糖。
3.琼脂糖凝胶胶块不溶a.琼脂糖质量差。
请选用高质量的琼脂糖。
b.含目的片段的胶块在空气中放置时间过长,使胶块失水、干燥。
建议切胶后立即进行胶回收,或将胶块保存在4C或-20C备用。
c.配制琼脂糖凝胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
应重新配制缓冲液。
4.洗脱液的选择洗脱液可以根据后续实验的需要来确定。
一般情况下,若需要进行测序反应,请用双蒸水洗。
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