鸡蛋疑似感染大肠杆菌的诊断和综合防治动物科学大学论文.docx
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鸡蛋疑似感染大肠杆菌的诊断和综合防治动物科学大学论文
xx农业大学科学技术学院
本科毕业论文
题目:
蛋鸡疑似感染大肠杆菌
的诊断及综合防治
学院:
生命工程学院
专业:
动物科学
学号:
1101064011
学生姓名:
xx
指导教师:
xx
2015年05月10日
摘要
禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠埃希氏杆菌引起各种禽类的局部或全身性感染的慢性或急性传染病,是以引起卵黄性腹膜炎、关节炎、纤维性心包炎、纤维素性腹膜炎以及肉芽肿和输卵管炎等主要特征的疾病。
随着养禽业的发展,禽大肠杆菌病已成为危害养禽业的一种常见的、多发的细菌性传染病,环境因素、应激反应等均可导致发病,由于其血清型复杂,细菌的耐药性不断增强,造成污染环境,禽产品质量下降,使世界各国养禽业遭受很严重的经济损失。
2014年8月,沈阳法库县某蛋鸡养殖场爆发一场疑似鸡大肠杆菌病的疫病,从而导致的呼吸道疾病,肠炎、卵黄囊炎、腹泻、卵黄性腹膜炎等,导致死亡率升高,产蛋率降低,蛋品质减退。
本试验通过检测发病鸡的烟腔拭子、饮水及患病鸡只的肠内容物和粪便,为了对该病进行准确的诊断,对患病鸡只需要进行细菌学检验。
试验结果表明,在发病鸡的烟腔拭子、饮水及病死鸡只的粪便和肠内容物中,大肠杆菌数比标准值高于很多,说明其含有大量的大肠杆菌。
在对发病鸡只进行的细菌学检验结果表明,其送检样本感染大肠杆菌。
根据其流行病学特点、临床症状和病理化特点,进行针对性治疗和支持治疗,有效地控制疾病的传播,减少经济损失。
同时,根据该场发病情况,将鸡场划分为非疫区和疫区,分别对针对性的综合防制进行了讨论分析。
本研究具有重要的临床意义,为诊断和防治大肠杆菌病提供了重要的理论依据。
关键词:
禽大肠杆菌病;蛋鸡;诊断;综合防制
Abstract
Aviancolibacillosisiscausedbyavianpathogenicescherichiacoliinfectiousdiseaseofavarietyofacuteorchronic,iscausedbyhepaticfiberpericarditis,celluloseperitonitisandyolkperitonitisandofthediseaseofsalpingitisasmaincharacteristic.Aviancolibacillosishasbecomeitwhichcauseseriousdamagetothepoultryindustryanimportantkindofbacterialinfectiousdiseases,duetothecomplexityofitsserotype,drugresistantstrainscontinuetoincrease,hasmadethenationsoftheworldPoultryfarmingindustrysufferedgreateconomiclosses.
InJuly2014,Shenyangfakularge-scalepoultyhouseLayerchickenproductionpeakofbroilerbreederinfectioncolibacillosis,whichisleadtorespiratorydisease,diarrhea,vitellineperitonitis,leadingtoincreasedmortality,layingratedecline.Thisexperimentbydetectingtheonsetofhenhouseofdrinkingwater,padding,andsickchickenfecesandintestinalContents,atthesametime,inordertomakeadefinitediagnosisofthediseaseondiseasedchickenbacteriologyinspection.Experimentalresultsshowthat,theonsetofhenhouseofdrinkingwater,padding,andsickchickenfecesandintestinalContents,itcontainsthenumberofe.coliismuchhigherthanstandardvalue.Itshowedthatitcontainsalotofe.coli.Thesickchickenbacteriologyinspection,accordingtotheresultsoftheinspectionsamplesinfectedwithe.coli.
Accordingtoitscharacteristicsandtheepidemiologicalcharacteristicsandtakethecorrespondingtreatmentandsupport,toeffectivelycontrolthespreadofdisease,reduceeconomicloss.Atthesametime,divideachickenfarmtopayfortheepidemicareaandthenon-epizooticarea,respectivelyanalyzedthecorrespondingcomprehensivepreventionandcontrolmeasures.Thisstudyhasimportantclinicalsignificance,todiagnosisandtreatmentforescherichiacolidiseaseprovidesanimportanttheoreticalbasis.
Keywords:
Aviancolibacillosis;Layerchicken;Diagnosis;Comprehensiveprevention
目录
摘要I
AbstractII
1前言3
1.1病原学3
1.2流行病学4
1.3病理变化4
1.4诊断5
1.4.1病原学的诊断5
1.4.2血清学的诊断5
1.4.3分子生物学方法5
1.5选题依据5
1.5.1养殖概况6
1.5.2发病情况6
1.5.3临床症状6
1.5.4主要解剖变化6
2材料与方法7
2.1材料7
2.1.1病料来源7
2.1.2培养基和血清7
2.1.3实验仪器7
2.2方法7
2.2.1病死鸡细菌学检测7
2.2.2饮用水细菌学检测7
2.2.3细菌的分离培养7
2.2.4细菌形态学镜检8
2.2.5生化试验8
3结果与分析9
3.1病死鸡的细菌学检验结果9
3.2饮用水检测结果10
3.3鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定结果11
3.3.1细菌分离11
3.3.2细菌鉴定11
3.3.2.1染色镜检结果11
3.3.2.2生化鉴定结果11
3.4鸡群处理12
3.4.1对病鸡和病死鸡的处理12
3.4.2患病鸡群的治疗12
3.4.3整体鸡群的治疗12
4讨论14
4.1病原的特点14
4.2防制措施14
4.2.1非疫区的综合防制14
4.2.1.1疫苗免疫14
4.2.1.2环境控制14
4.2.1.3定期检测15
4.2.2疫区内的综合防制15
4.2.2.1疫苗免疫15
4.2.2.2种源控制15
4.2.2.3环境控制16
4.2.2.4对病死鸡的处理16
4.3加强管理16
4.3.1合理控制饲养密度16
4.3.2净化水源16
4.3.3实行全进全出制并增加空舍期17
4.3.4减少应激17
5结论18
致谢19
参考文献20
1前言
禽大肠杆菌病(Aviancolibacillosis)是一种常见的、多发性、全身性疾病的总称,由大肠埃希菌的某些血清引起的禽传染病。
该病的临床病型主要有严重腹泻、急性败血症、纤维素性肝周炎、纤维性心包炎、纤维素性腹膜炎以及卵黄性腹膜炎和输卵管炎[1],此病可通过饮用被污染的水和食物传播,该病是Chichester在1885年发现的,在很长的一段时期内,一直被当作正常肠道菌群的组成部分,认为是非致病菌。
直到20世纪中叶,随着一些特殊血清型的致病性带来的危害,同时,由于其血清型众多,抗原结构复杂[2],变异菌株的不断出现,防治工作变的更加困难,才真正认识到其严重的危害性。
目前,中国蛋鸡养殖居全球第一,但近年来受疾病的影响,产蛋水平参差不齐,鸡蛋价格不稳定。
近些年来,随着养禽业的发展,该病给我国的养禽业,特别是集约化、标准化、规模化养鸡场带来了严重的危害,受到了养殖业人士的极大关注,为了防止该病的进一步恶化,对该病加大程度的治理当务之急。
1.1病原学
大肠杆菌学是肠道杆菌(Enterobacteriaceae)埃希氏菌属(Escherichia)的大肠埃希氏菌(E.coli)简称大肠杆菌[3]。
大肠杆菌为革兰氏阴性、两端钝圆无芽孢的短小杆菌,一般大小为1-3umX0.4-0.7μm,多单独或成双存在;大多数数菌株全身长有鞭毛,并依靠其活动;多数菌株还长有菌毛,有的有荚膜或微荚膜,通常我们看不到荚膜。
本菌为需氧和兼性厌氧的肠道杆菌,最适生长温度为37℃,最适生长PH值为7.2-7.437℃恒温下在普通营养琼脂上培养24小时,形成直径约2.0mm-3.0mm的圆形、湿润、光滑、凸起、半透明或不透明的灰白色菌落;在肉汤培养基上培养19-23小时,肉汤即变浑浊,管底有粘性沉淀,液面管壁有菌环。
在伊红美蓝琼脂培养基上出现带金属光泽的黑色菌落,在麦康凯琼脂上则形成红色菌落。
大肠杆菌对外界环境的抵抗力中等[4],一般可被巴氏消毒法和普通消毒液杀死;大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强。
在畜禽生活环境中,灰尘、土壤、粪便、水中的大肠杆菌可在干燥条件下可长期存活。
1.2流行病学
鸡大肠杆菌病作为家禽的常见病,不同日龄的鸡一年四季均可感染此病,一般以冬末春初,气温多变季的霉雨节最为常见。
普遍存在于世界各地,其流行范围大,且发病率和致死率较高,饲料转化率低,生长缓慢。
大肠杆菌可通过消化道和呼吸道发生水平传播,也可通过污染的种蛋垂直传播。
在恶劣的环境条件下或者其他病原感染后,易继发致病[5],大肠杆菌的血清型有很多种,抗原复杂,易产生耐药性,已知其菌体(O)抗原有173种,表面(K)抗原有103种,鞭毛抗原60种。
其中菌体(O)抗原中约有一半对禽有致病性,以O1、O2、O78、O35四个血清型最为常见[6]。
因此,往往抗菌药物的滥用,导致产生极大的耐药性[7],使治疗效果不显著。
随着抗生素临床应用的时间变长,其菌体耐药性也在逐渐增强。
根据临床的药敏结果,在进行对症治疗时,应经常更换抗生素品种,防止产生新的耐药菌株。
1.3病理变化
鸡大肠杆菌病是家禽的极为常见的肠道传染病,其临床特征不太明显,与发病家禽的日龄、发病的年龄、病程长短、受侵害的组织或混合感染有关,由于其血清型极多,耐药性强,导致其病型也很多。
大肠杆菌病主要表现为:
急性败血症、卵黄性腹膜炎型、脐炎、关节炎或足垫肿型、内脏型、大肠杆菌型肉芽肿、神经型(脑炎型)[8]。
其中以急性败血症的危害最为严重。
1.4诊断
由于禽大肠杆菌病缺乏特征性的临床表现,可根据其剖检变化、流行病学特点进行综合分析,得出初步的诊断结果。
为了避免与其他剖检变化类似的病原微生物感染及混合感染的混淆,应注意鉴别诊断。
应该通过病原的分离培养,生化试验、致病性试验、染色镜检及血清鉴定等方法对该病进行诊断。
1.4.1病原学的诊断
从大肠杆菌病的典型病变和症状的分离和鉴定可诊断此病。
无菌条件下采取病死禽不同部位的病料,直接涂片,用革兰氏染色法或碱性美蓝染色法染色后镜检,作为初步诊断;取病料接种于普通肉汤、普通琼脂、麦康凯培养基上于37℃培养24h进行分离培养形成纯化菌落,用于生化试验鉴定。
进行细菌的分离培养或鉴定试验。
1.4.2血清学的诊断
间接血凝试验(IHA)是检测大肠杆菌抗体的较为敏感的一种方法[9],对测定鸡Eoch抗体有很高的应用价值,比常规的细菌直接凝集反应更快速、敏感、稳定、简便,更易于观察。
直接免疫荧光抗体染色(IAF)可用于直接检测粪便悬液中的大肠杆菌,但特异性欠佳。
双抗体夹心ELISA染色法可用于大肠杆菌DH5a菌体蛋白检测。
1.4.3分子生物学方法
随着科学技术的快速发展,分子生物学的应用越来越广泛,其高效准确的检验方式,为细菌学的诊断提供了方便。
其中,PCR-RFLP(限制性片段多态性分析)有助于O157:
H7和其他大肠杆菌的鉴别。
流式细胞术(FCM)检测临床分离的大肠杆菌结果具有时间短、分析速度快的优点。
质粒DNA指纹图谱分析可用于检测细菌毒力的基因构成[10]。
1.5选题依据
2014年8月,作者到沈阳法库某蛋鸡养殖场进行短期实践,根据该场技术人员介绍,该批蛋鸡感染大肠杆菌病,从而导致的消化道和呼吸道疾病,死亡率增加,产蛋率下降。
本人在暑假期间,曾参与过该批蛋鸡的饲养管理和诊断,并结合当代对大肠杆禽菌病的研究概况和自己所学知识,提出关于规模化蛋鸡养殖场大肠杆菌病感染的综合防治措施,以供参考。
1.5.1养殖概况
该厂为一万只蛋鸡的饲养规模,年满产蛋量几百万枚。
鸡舍是有窗户的砖瓦结构的开放型鸡舍,白天利用自然光,靠开关窗户来调节通风换气和控制温度。
舍内采用两高一低式平养,为人工捡蛋。
自鸡苗到场已先后按蛋鸡免疫程序进行过鸡新城疫、传染性法氏囊病、传染性支气管炎等的防疫。
1.5.2发病情况
据该场技术员介绍,2014年1月份,沈阳法库某蛋鸡养殖场笼养的220日龄的4000只海兰褐壳蛋鸡发生以“腹泻、产蛋率下降”为主要特征的传染病,并伴有轻微的呼吸道症状,个别鸡拉白色稀粪。
发病后产蛋率由正常的95%下降到71%,每天都有鸡死亡,发病率高达25%以上,死亡率为3%。
用清热解毒的中药加到料中,效果不佳,呼吸道疾病加重,产蛋继续下降,死亡率增加。
1.5.3临床症状
鸡群临床症状主要表现为鸡群食欲下降、饮欲快速增加的现象;大群精神良好,个别鸡只精神萎靡,消瘦无力,羽毛蓬乱,肛门周围羽毛污浊,且头脸有肿胀;鸡只鸡冠、肉髯发绀,张口伸颈呼吸;夜里有呼噜,咳嗽等呼吸道疾病病状;患病鸡只腹部肿胀,重坠,脚鳞片发红;此期间鸡群病死率增高,产蛋量下降,并且鸡蛋品质低劣,产软壳蛋,沙皮蛋及畸形蛋数量明显增加。
1.5.4主要解剖变化
发病期间连续每天对病死蛋鸡进行剖检,剖检可见:
气囊浑浊,气管内有大量的粘液,部分鸡只有环形出血;心包积液,心包壁增厚,心包内有黄白色纤维素性渗出物;肌胃及腺胃粘膜、肺脏、肝脏、胰腺边缘等多处器官充血、出血,肝脏肿大,肝质脆;肾脏肿大,有很多的尿酸盐沉积,并且有的花白并伴有花斑;个别鸡只盲肠肿大,有恶臭味;特殊病例输卵管糜烂,腹腔内充满大量卵黄样腥臭液体,卵泡肿胀、充血、发红,甚至有严重的变形;多呈现卵泡性腹膜炎等症状。
2材料与方法
2.1材料
2.1.1病料来源
病料来源于沈阳法库某蛋鸡养殖场送检的病、死鸡,临床剖检有典型的心包炎,肝周炎,卵黄性腹膜炎,疑似为大肠杆菌病。
2.1.2培养基和血清
在沈阳立信生物技术有限公司购买了营养琼脂、营养肉汤、麦康凯琼脂。
在沈阳立信生物技术有限公司购买了微量生化发酵管。
染色液按常规方法配制。
2.1.3实验仪器
超净工作台、电热恒温培养箱、高压蒸汽灭菌机、光学显微镜、电子天平、冰箱、平皿、接种环、接种针、平板、酒精灯、无菌牙签
2.2方法
2.2.1病死鸡细菌学检测
取发病鸡的烟腔拭子、粪便及送检的病、死鸡的肠内容物,进行细菌总数,大肠菌群和沙门氏菌的检测。
2.2.2饮用水细菌学检测
分别取工作间,第1间,第15间,第30间水样进行细菌总数,大肠菌群,沙门氏菌检测。
2.2.3细菌的分离培养
无菌采取上述病死鸡只的心血、肝、气囊等病料,接种于普通营养琼脂平板上,37℃培养18h,观察其菌落变化,选取单个典型菌落,划线接种于麦康凯琼脂和伊红美蓝琼脂平板上,37℃培养18h,保存在4℃的环境中备用。
2.2.4细菌形态学镜检
选取在麦康凯琼脂平板上培养24h的菌落,对其菌落抹片进行革兰氏染色,镜检。
2.2.5生化试验
选取在麦康凯琼脂上长出的砖红色菌落和伊红美蓝琼脂上生长出的带金属光泽的黑色菌落分别作吲哚试验、MR、V-P、尿素酶试验、各种糖发酵试验。
3结果与分析
3.1病死鸡的细菌学检验结果
对发病鸡的烟腔拭子,粪便及送检的病、死鸡的肠内容物,进行细菌总数,大肠菌群,沙门氏菌检测。
结果(表3.1)显示,所检样本中细菌总数和大肠杆菌均超标,证明其样本中含有大量的大肠杆菌。
表3.1细菌学鉴定报告
检查
项目
采样
部位
实测
数
细菌总数
大肠菌群
沙门氏菌检测
备注
单位:
CFU/mL
单位:
CFU/mL
阳性(Pos)/阴性(Neg)
≤1.0×103
0
阴性(Neg)
3
H1粪便
1
5.35×107
342
阴性
3
H1肠内容物
1
4.82×108
473
阴性
3
H1烟腔拭子
1
2.16×106
277
阴性
3
H2粪便
1
9.26×107
402
阴性
3
H2肠内容物
1
4.24×108
459
阴性
3
H2烟腔拭子
1
1.18×107
369
阴性
结论及建议:
所取粪便、肠内容物及烟腔拭子的样本的细菌总数,大肠菌群超标,不合格。
3.2饮用水检测结果
分别对发病鸡舍工作间,第1间,第15间,第30间水样进行细菌总数,大肠菌群,沙门氏菌检测。
结果发现:
工作间水样3项均达标,合格;其他水样细菌总数,大肠菌群超标,不合格。
(表3.2)由此证明,其水源并未受到大肠杆菌的污染,而鸡舍水线内存在大量的大肠杆菌。
表3.2水样细菌学检验报告
项目
采样
部位
实测
数
细菌总数
大肠菌群
沙门氏菌检测
备注
单位:
CFU/mL
单位:
CFU/mL
阳性(Pos)/阴性(Neg)
≤1.0×103
0
阴性(Neg)
3
H1工作间
1
2
0
阴性
3
H1第1间
1
2.04×105
277
阴性
3
H1第15间
1
3.06×104
209
阴性
3
H1第30间
1
1.03×104
179
阴性
3
H2工作间
1
3
0
阴性
3
H2第1间
1
9.17×104
129
阴性
3
H2第15间
1
2.5×103
0
阴性
3
H2第30间
1
3.06×104
65
阴性
结论及建议:
工作间水样3项均达标,合格;其它水样细菌总数,大肠菌群均超标,不合格。
3.3鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定结果
3.3.1细菌分离
在无菌条件下取病料,接种培养基上以37℃培养18h后,在普通琼脂平板上,为圆形隆起,表面光滑湿润,灰白色半透明菌落,中等大小;在普通肉汤中呈现出均匀浑浊,有粪臭味,轻轻摇晃,试管底部的淡白色粘稠沉淀呈云雾状散开;在伊红美蓝琼脂平板上形成紫黑色带有金属光泽的菌落;在麦康凯琼脂平板上形成粉红色、表面光滑湿润、边缘整齐、中等大小的菌落。
3.3.2细菌鉴定
3.3.2.1染色镜检结果
病死鸡心血、肝组织、气囊及培养物涂片染色镜检可观察到革兰氏阴性细菌大多为单独存在,偶尔有2~3个菌体相连,两端浓染,钝圆,无芽孢,基本符合大肠杆菌生化鉴定的特征。
3.3.2.2生化鉴定结果
经生化试验鉴定分析,14株分离菌对葡萄糖、果糖、甘露糖发酵管反应呈阳性,缓慢发酵乳糖、麦芽糖、蔗糖;对H2S、尿素发酵管反应呈阴性;其他生化试验中,13株细菌吲哚试验阳性,VP试验阴性,均符合大肠杆菌特性。
(见表3.3)
表3.314株分离菌的生化鉴定结果
项目
阳性反应
株数
阳性反应
比例(%)
项目
阳性反应
株数
阳性反应
比例(%)
葡萄糖
14
100.0
H2S
0
0
乳糖
13
92.9
吲哚
13
92.9
麦芽糖
12
85.7
MR
13
92.9
蔗糖
1
7.1
VP
0
0
果糖
14
100.0
尿素
0
0
甘露糖
14
100.0
3.4鸡群处理
3.4.1对病鸡和病死鸡的处理
据报道,我国的畜禽疫病的死亡率一直很高[11],在规模化的养殖场,为了避免病死鸡对健康鸡产生恶劣的影响,更要加强对病鸡和病死鸡的处理。
首先,每天应及时的将病死鸡从鸡舍拿出来,要做到不宰杀、不贩卖、不食用,放到指定地点,进行无害化处理。
患病鸡应该及时的隔离,由兽医人员诊断和处理。
确诊为传染病的患鸡,及时的焚烧。
剖检时应在远离鸡舍的专用地方进行,技术员解剖后全面的消毒双手和剖检器具。
3.4.2患病鸡群的治疗
本病一般发生在冬季,此时外界气温较低,为了维持鸡舍内温度,因此鸡舍环境通风量通常维持最小状态,舍内小环境流通较差。
发生此病时首先要改善鸡舍小环境,在保证舍内温度在摄氏20度的前提下,加强鸡舍通风。
日常生产中,应减少应激[12],在饮水中添加多维和电解质。
对于精神状态不好的鸡只单独隔离出来,用阿莫西林饮水(阿莫西林200g:
水400kg),连续使用7天;氟苯尼考拌料(氟苯尼考20g:
饲料200kg),连用7天;同时做好隔离观察效果。
3.4.3整体鸡群的治疗
由于大肠杆菌可长期存在于受污染的粪便、水及垫料中,所以对于未患病鸡群应采取预防治疗,避免群体发病,导致病情的扩大。
卡那霉素5万单位每只,0.3%的氯霉素拌料投服七天,饮水连续五天。
双黄连口服液饮水连用五天。
在投喂抗生素药后要在饮水中添加益牧宝等增加肠道的有益菌类,保持肠道菌类平衡。
同时饮水中添加电解质一周,在饲料中补充适量维生素A和E,增加机体的抗病力,减少继发感染。
由于鸡群精神状态不好,故应加强各方面管理,如把乳头式水线适当减低,以便鸡只更容易饮水并按时清洗水线;饲料、水和空气是本病的传染媒介,应加强对粪便处理及鸡舍的消毒,以减少细菌的滋生;每天注意鸡只的吃料时间,以便及时的对鸡群做出调整;观察鸡只的饮水状况,及时处理,检查滴头的堵塞,保证饮水的正常等工作。
另外,加
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