制药工程专业微生物实验讲义.docx
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制药工程专业微生物实验讲义
微生物学实验
(怀化学院微生物学课程组)
微生物学实验室学生要求
为了营造一个安全有效、秩序良好的实验室环境,达到“科学、规范、安全、高效”的目的,特对进入微生物学实验室进行实验的学生作如下要求。
1.按已分好的班级组次,按时参加实验,并完成实验项目。
2.进入实验室前,要求穿戴整齐,需穿好实验服,不能穿人字拖类拖鞋进入实验室。
3.上课前要求上交当堂课程的实验预习报告。
4.要求独立或以小组为单位完成实验项目,实验期间保持实验室安静,不能大声喧哗,并及时记录好实验数据。
5.实验完成后及时对实验结果进行分析并完成实验报告。
6.实验完成后需及时清洗实验器皿,清洁和整理实验台,做好卫生,保持实验室干净整洁。
授课教师:
刘卫今、黎晓英
微生物学实验
序号
实验项目名称
1
实验一、培养基的制备及灭菌
2
实验二、从土壤中分离和纯化微生物
3
实验三、细菌革兰氏染色法及芽孢染色法
4
实验四、油镜的使用和细菌形态的观察
5
实验五、放线菌、酵母菌和霉菌形态观察
6
实验六、微生物的显微计数
(以下实验内容仅供参考,具体内容以相应教材为准)
实验一培养基的制备与灭菌
一、实验目的
1.掌握培养基配制的原理。
2.通过对牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马铃薯培养基的配制,掌握配制培养基的一般方法和步骤。
3.解高压蒸汽灭菌的基本原理及操作方法。
二、实验原理
1.什么是培养基,一般培养基应具备哪些营养要素?
2.培养基有哪些类型,为什么培养不同的微生物需要的培养基不同,培养基为什么要调节pH值,配制好的培养基为什么要立即灭菌?
3.高压蒸汽灭菌的原理是什么?
三、实验材料和用具
牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖(或蔗糖)、链霉素、1mol/LNaOH、1mol/LHCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布和玻璃漏斗等。
四、操作步骤
(一)牛肉膏蛋白胨培养基的配制
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
其配方如下:
牛肉膏3g,蛋白胨l0g,NaCl5g,琼脂15-20g,水1000mL,pH7.4~7.6
1.称量:
按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放人热水中,牛肉膏便与称量纸分离,立即取出纸片。
蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。
2.加热溶解:
在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入已溶解的药品中,再加热融化,在此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分。
3.调pH:
检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加1mol/LNaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围。
若偏碱,则用1mol/LHCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
4.过滤:
液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利结果的观察。
但是供一般使用的培养基,此步可省略。
5.分装:
披实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上面造成污染。
分装量:
固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面。
分装入三角瓶内以不超过其容积内一半为宜。
半固体培养基以试管高度的1/4为宜.灭菌后垂直待凝。
6.加棉塞:
试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞,棉塞制作方法则图1-1。
棉塞的形状、大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利透气的作用。
要使棉塞总长约3/5塞人试管口或瓶口内,以防棉塞脱落。
有些微生物需要更好的透气,则可用8层纱布制成通气塞。
有时也可用试管帽或塑料盖代替棉塞。
7.包扎:
加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。
若培养基分装于试管中,则应先把试管扎成捆后,再于棉塞外包—层牛皮纸。
然后用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
8.灭菌:
将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min。
如因特殊情况没能及时灭菌,则应放人冰箱内暂时保存。
9.摆斜面:
灭菌后,如制斜面,则需趁热将试管口端搁在一根长木条上,并调整斜度,使斜面长度不超过试管总长的一半。
10.无菌检查。
将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24-48h,无菌生长时可以使用,或放置在冰箱或清洁的橱内,备用。
图1-1棉塞的制作过程
(二)高氏1号培养基的配制
高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。
其配方如下:
可溶性淀粉20g,KNO31g,NaCl0.5g,K2HPO4·3H2O0.5g,MgS04·7H2O0.5g,FeSO4·7H2O0.01g,琼脂15—20g,水1000mI,pH7.2-7.4。
1.称量和溶解:
经计算后称量,按用量先称取可溶性淀粉,放人小烧杯中,并用少量冷水将其调成糊状,再加入少于所需水量的沸水中,继续加热,边加热边搅拌,至其完全溶解,再加入其他成分依次溶解。
对微量成分FeSO4.7H2O可先配成高浓度的贮备液后再加入,方法是先在100mL水中加入1g的FeSO4.7H2O,配成浓度为0.01g/mL的贮备液,再在1000ml培养基中加入以上贮备液1mL即可。
待所有药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。
如要配制固体培养基,其琼脂溶解过程同牛肉膏蛋白脏培养基配制。
2.pH调节、分装、包扎、灭菌及无菌检查,与牛肉膏蛋白胨培养基配制方法同。
(三)马铃薯蔗糖培养基的配制
马铃薯培养基是用于分离真菌的选择培养基。
其配方如下:
马铃薯200g,葡萄糖(或蔗糖)10g,琼脂15-20g,水1000mI,自然pH。
1.称量和溶解。
马铃薯去皮,切成块加水,煮沸30min(注意火力的控制,可适当补水),用纱布过滤,滤液加糖,加入琼脂加热融化,方法同牛肉膏蛋白胨培养基配制,补足水至所需的总体积。
2.分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋自胨培养基配制。
3.链霉素的加入。
链霉素受热容易分解,所以临用时,将培养基融化后待温度降全45℃左右时才能加入。
可先将链霉素配成1%的溶液(配好的链霉素溶液保存于-20℃),在1000mL培养基中加1%链霉素0.3mL,使每毫升培养基中含链霉素30ug。
注意事项:
称药品用的牛角匙不要混用;称完药品应及时盖紧瓶盖:
调pH时要小心操作,避免回调。
(四)高压蒸汽灭菌法
高压蒸汽灭菌法适用于培养基、无菌水、工作服等物品的灭菌。
1.加水。
将内层灭菌桶取出,再向外层锅内加入适量的水,以水面与三角架相平为宜。
2.装料。
将装料桶放回锅内,装入待灭菌的物品。
装有培养基的容器放置时要防止液体溢出,瓶塞不要紧贴桶壁,以免冷凝水沾湿棉塞。
3.加压。
将盖上与排气孔相连接的排气软管插人内层灭菌桶的排气槽内,摆正锅盖,对齐螺口,然后以同时旋紧相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓,并打开排气阀。
4.排气。
用电炉或煤气加热,待水煮沸后,水蒸汽和空气一起从排气孔排出.一般排出的气流很强并有嘘声时,表明锅内空气已排净(沸后约5min)。
5.升压。
当锅内空气排净时,即可关闭排气阀,压力开始上升。
本实验用121℃,20min灭菌。
7.降压。
达到所需灭菌时间后,关闭热源,让压力自然下降到零后,打开排气阀,放净余下的蒸汽后,再打开锅盖,取出灭菌物品,倒掉锅内剩水。
8.无菌检查将已灭菌培养基于37℃培养24h,无杂菌生长,即可待用。
。
五、问题和思考
1.配制培养基有哪几个步骤?
在操作过程中应注意些什么问题?
为什么?
2.培养基配制完成后,为什么必须立即灭菌?
若不能及时灭菌应如何处理?
如何进行无菌检查?
3.试设计实验对饮料进行无菌检查。
实验二从土壤中分离和纯化微生物
一、实验目的
1.学习从土壤中分离微生物的方法,学习无菌操作技术;
2.掌握微生物样品稀释法和涂布平板法分离微生物的操作技术;
3.初步掌握无菌操作技术和平板菌落计数法。
二、实验原理
1.什么是微生物的纯培养,从固体培养基中分离微生物的方法有哪些?
2.为什么可以根据菌落数目来计算样品中微生物的数量?
三、实验材料和用具
土壤样品:
有目的地取某一类型的土壤。
培养基:
已灭菌的牛肉膏、高氏1号、土豆蔗糖固体培养基,90mL无菌水(带玻璃珠)1瓶、100无菌水、无菌试管、10%酚液、1%链霉素。
无菌培养皿12套、5mL和1mL的无菌移液、天平、称量纸、药勺、试管架、涂布器。
四、操作步骤
(一)土壤稀释分离
1.取土壤。
取表层以下5—10cm处的土样,放入灭菌的袋中备用,或放在4℃冰箱中暂存。
2.制备稀释液
(1)制备土壤悬液:
称土样10g,迅速倒入带玻璃珠的无菌水瓶中(90mL),振荡20min使土样充分打散,即成为10-1的土壤悬液。
(2)稀释:
用无菌移液管吸10-1的土壤悬液0.5mL.放入4.5mL无菌水中即为10-2稀释液,如此重复,可依次制成10-3一10-8的稀释液(图2-1)。
注意:
操作时管尖不能接触液面,每一个稀释度换用1支移液管,每次吸入土液后,要将移液管插入液面,吹吸3次,每次吸上的液面要高于一次,以减少稀释中的误差。
图2-1稀释法分离土壤微生物操作过程图解
3.稀释倒平板法测定菌落数的方法
(1)将培养基加热熔化,冷至55-60℃,在高氏1号培养基中加入10%酚数滴,在马铃薯培养基中加入链霉素溶液至终浓度为30ug/mL,混匀后倒入平板。
倒平板时要注意无菌操作,见图3-2。
图2-1倒平板的方法
(2)取土壤稀释液
高氏一号培养平板:
取10-3、10-4两管稀释液各0.1mL分别接人相应标号的含该种培养表面的中央;
PDA培养平板:
取10-3、10-4两管稀释液各0.1mL,分别接人相应标号的平皿中;
牛肉膏蛋白胨培养平板:
取10-6、10-7、10-8三管稀释液各0.1mL,分别接人相应标号的平皿中;
(3)涂布:
玻璃涂棒灭菌后,十字涂布(演示),静置5-10min。
4.培养:
将接种好的细菌、放线菌、霉菌平板倒置,即皿盖朝下放置,细菌于237℃恒温培养,培养1—2d;放线菌和霉菌28℃培养,分别培养5—7d或3—5d,可用于观察菌落,用于进一步分离纯化或直接转接斜面。
五、注意事项
1.一般土壤中,细菌最多,放线菌及霉菌次之.而酵母菌主要见于果园及菜园土壤中,故从土壤个分离细菌时,要取较高的稀释度,否则菌落达成一片不能计数。
2.在土壤稀释分离操作中,每稀释10倍,最好更换一次移液管,使计数准确。
3.放线菌的培养时间较长,故制平板的培养基用量可适当增多。
六、实验报告
1.记录土壤稀释分离结果,并计算出每克土壤中的细菌、放线菌和霉菌的数量。
计算方法:
选择长出菌落数30一300之间的培养皿进行计数,按以下公式:
总菌数/g=同一稀释度几次重复的菌落平均数×稀释倍数
七、问题和思考
1.试设计实验,从土壤中分离出酵母菌.并进行计数。
实验三细菌革兰氏染色法及芽孢染色法
一、实验目的
1.初步掌握细菌涂片方法及革兰氏染色的步骤;
2.掌握细菌芽孢染色的方法。
二、实验原理
1.观察微生物细胞时,为什么要对微生物进行染色?
2.革兰氏染色的机理是什么?
3.芽胞染色的机理是什么?
三、实验材料和用具
Escherichiacoli、Staphylococcusaureus培养24h菌落平板,Bacillusthuringiensis培养24h的斜面菌种。
革兰氏染色液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、复红液和5%孔雀绿水溶液。
显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯和烧杯。
四、操作步骤
(一)革兰氏染色
1.涂菌:
用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环,用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而匀、直径约1cm的菌膜。
涂菌后将接种环火焰灭菌。
2.干燥:
于空气中自然干燥。
亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥(温度不宜过高)。
3.固定:
目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上,便于染料着色,常用加热法.即将细菌涂片向上,通过火焰3次,以热而不烫为宜,防止茵体烧焦、变形。
此制片可用于染色。
4.初染:
于制片上滴加结晶紫染液,染1min后,用水洗去剩余染料。
5.媒染:
滴加卢戈氏碘液,1min后水洗。
6.脱色:
滴加95%乙醇脱色,摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止(根据涂片之厚薄需时30s至1min水洗。
7.复染:
滴加复红液复染1min,水洗。
8.用滤纸吸干,油镜镜检。
(二)芽孢染色法
1.方法1
(1)取37℃培养18-24h的枯草芽孢杆菌作涂片,并干燥,固定(参见“细胞单染色法”)。
(2)于载片上滴人3—5滴5%孔雀绿水溶液。
(3)用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热,自载玻片上出现蒸汽时开始计算时间约4-5min。
加热过程中切勿使染料蒸干,必要时可添加少许染料。
(4)倾去染液,待玻片冷却后,用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。
(5)用碱性复红复染1min,水洗。
(6)制片干燥后用油镜观察。
芽孢呈绿色,菌体红色。
2.方法2
(1)加1-2滴自来水于小试管中,用接种环从斜面上挑取2—3环培养18—24h的枯草芽孢杆菌菌苔于试管中,并充分期匀打散,制成浓稠的菌液。
(2)加5%孔雀绿水溶液2—3滴于小试管中.用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。
(3)将此试管浸干沸水浴(烧杯)中,加热15—20min。
(4)用接种环从试管底部挑数环菌于洁净的载玻片上,并涂成薄膜,将涂片通过微火3次固定。
(5)水洗,至流出的水中无孔雀绿颜色为比。
(6)加沙黄水溶液,染2—3min后,倾去染液,不用水洗。
(7)干燥后用油镜观察。
芽孢绿色,菌体红色。
(三)结果
革兰氏阳性菌染成蓝紫色,革兰氏阳性菌染成淡红色。
五、注意事项
1.涂片务求均匀.切忌过厚。
2.在染色过程中,不可使染液干涸。
3.脱色时间十分重要,过长,则脱色过度,会使阳性菌被染成阴性菌。
4.老龄菌因体内核酸减少,会使阳性菌被染成阴性菌,故不能选用。
5.供芽孢染色用的菌种应控制菌龄,使大部分芽泡仍保留在菌体上为宜。
六、问题和思考
1.涂片后为什么要进行固定,固定时应注意什么?
2.什么是革兰氏染色法?
染色过程应注意什么?
3.试分析革兰氏染色法在细菌分类中的意义。
4.为什么芽孢染色要加热?
为什么芽孢及营养体能染成不同的颜色?
实验四油镜的使用和细菌形态的观察
一、实验目的
1.掌握显微镜油镜使用的方法。
2.初步掌握微生物学绘图方法。
二、实验原理
1.显微镜油镜为什么能增加照明亮度?
2.为什么能增加分辨率?
三、实验材料和用具
乙醚和乙醇混合液(7:
3)、Escherichiacoli涂片、Staphylococcusaureus涂片,Bacillusthuringiensis染色装片、香柏油、显微镜、擦镜纸。
四、操作步骤
(一)观察前的准备
1.将显微镜置于平稳的实验台上,镜座距实验台边沿约为4cm。
坐正,练习用左眼观察。
2.调节光源:
将低倍物镜转到工作位置,把光圈完全打开,聚光器升至与载物台相距约1mm左右。
转动反光镜采集光源,光线较强的天然光源宜用平面镜,光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜,对光至视野内均匀明亮为止。
观察染色装片时,光线宜强;观察未染色装片时,光线不宜太强。
3.低倍镜观察染色装片
首先下降载物台,将染色装片置于载物台上,用标本夹夹住,将观察位置移至低倍镜的物镜正下方。
从侧面观察,转动粗调节器上升载物台,适当缩小光圈,然后两眼从目镜观察,转动粗调节器使镜台缓慢下降至发现物像时,改用细调节器调节到物像清楚为止。
移动装片,把合适的观察部分移至视野中心。
4.高倍镜观察
旋转转换器,将高倍镜转至正下方,注意避免镜头与破片相撞。
再用目镜观察,仔细调节光圈,使光线的明亮度适宜。
用细调节器校正焦距使物镜清晰为止。
将最适宜观察部分移至视野中心。
不要移动装片位置,准备用油镜观察。
5.油镜观察
从侧面注视,旋转转换器,使高倍镜和油镜位于光源上方两侧,八字岔开。
在玻片标本的镜检部位滴香柏油。
旋转转换器,使油镜转至正下方,浸在油中。
将光线调亮,左眼从目镜观察,用细调节器校正焦距使物镜清晰为止。
(二)细菌形态的观察
1.观察细菌的基本形态
用低倍镜、高倍镜和油镜观察革兰氏染色的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,芽胞染色的苏云金杆菌,并分别在油镜下绘图。
五、注意事项
1.注意擦镜头时,只能用擦镜纸。
2.观察完毕,必须将下降载物台,才能取下装片.放入另一装片后,要按使用油镜要求,重新操作.不能在油镜下直接取下和替换装片,切记。
3.无菌操作过程中,接种环灭菌后不能触及其他物品,挑菌不能过多。
六、实验报告
(一)绘图
给出你所观察到的几种细菌的个体形态视野图。
绘出你所观察到的细菌细胞结构视野图,并注明各部分。
(二)试指出在制备活菌装片时,应注意什么问题?
七、问题和思考
1.用明视野显微镜观察细菌的形态时,你认为用染色装片好还是用非染色装片好?
观察活体装片与染色装片,光线调节各有什么不同?
2.无菌操作过程中,可否将棉塞放在桌面上?
为什么?
3.试设一个准备该实验的工作方案。
实验五放线菌、酵母菌和霉菌形态观察
一、实验目的
1.了解放线菌、酵母菌、霉菌的培养方法。
2.掌握放线菌、酵母菌、霉菌的制片技术和染色方法。
3.掌握观察放线菌、酵母菌、霉菌的形态特征的方法。
二、实验原理
1.放线菌、霉菌和酵母菌在形态特征和生殖方式上有什么异同?
2.如何鉴别酵母菌细胞的活性?
3.用乳酸石碳酸棉兰染色液对霉菌制片有哪些优点?
三、实验材料和用具
Streptomycessp.(链霉菌),Saccharomycescerevisiae(酿酒酵母),Penicillumcitrinum(桔青霉),Rhizopusoryzae(米根霉),Aspergillusniger(黑曲霉)。
酵母菌染色液:
吕氏碱性美蓝染液。
霉菌染色液:
乳酸石碳酸棉兰染色液
显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环、镊子、酒精等。
四、操作步骤
放线菌制片与观察。
1.插片法培养放线菌。
按无菌操作要求,取链霉菌培养物在高氏一号培养基上密集划线接种。
用镊子取无菌载片以45。
角插入培养基平板上。
将平板倒置,于28℃培养3-5天。
2.用镊子小心取出用插片法培养的放线菌培养皿中的一张盖玻片,将其背面附着的菌丝体擦净。
然后将长有菌的一面向上放在洁净的载玻片上,用低倍镜、高倍镜观察。
找出3类菌丝及其分生孢子,并绘图。
注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和色泽差异。
霉菌的形态观察
1.霉菌培养:
按无菌操作方式将霉菌点接于在PDA培养基平板上,于28℃培养3-5天。
2.直接制片观察法:
滴一滴乳酸石碳酸棉兰染液于载片上,用镊子取霉菌培养物少许,先于50%乙醇中浸一下先去脱落的孢子,然后将培养物置于染液中,用大头针小心将菌丝分开。
加盖玻片。
3.霉菌观察:
先用低倍镜观察菌体的各个部位,认识霉菌各部分结构,必要时用高倍镜观察,尤其注意观察产孢子结构以及根节上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子和两个假根间的匍匐菌丝,观察时注意调节焦距以看清各种构造。
绘图并标明各部分名称。
酵母菌的形态观察
酵母菌的话体染色观察及死亡率的测定
1.以无菌水洗下PDA斜面培养的酿酒酵母菌苔,制成菌悬液。
2.取0.05%美蓝染色液1滴,置载玻片中央,并用接种环取酵母菌悬液与染色液混匀,染色2~3min,加盖玻片,在高倍镜下观察酵母菌个体形态,区分其母细胞与芽体,区分死细胞(蓝色)与活细胞(不着色)。
3.在一个视野里计数死细胞和活细胞,共计数5~6个视野。
酵母菌死亡率一般用百分数来表示,以下式来计算:
死亡率=死细胞总数/死活细胞总数×100%
五、注意事项
1.用于活化酵母菌的麦芽汁培养基要新鲜、表面湿润;在产孢培养基上加大移种量,可提高子囊形成率;通过微加热增加酵母的死亡率,易于观察死亡细胞。
2.培养放线菌中要注意,放线菌的生长速度较慢,培养期较长,在操作中应特别注意无菌操作,严防杂菌污染。
3.玻璃纸法培养接种时注意玻璃纸与平板琼脂培养基间不宜有气泡,以免影响其表面放线菌的生长,
六、实验报告
1.绘出放线菌的形态结构图;
2.计算酵母菌的死亡率;
3.根霉、曲霉和青霉形态图,示各部结构。
七、问题和思考
1.试比较细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的菌落形态的差异?
2.在高倍镜或油镜下如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝?
实验六微生物显微计数
一、实验目的
1.掌握使用血细胞计数板测定微生物的数量
2.巩固显微镜的使用方法。
二、实验原理
1.测量微生物数量的方法有哪些?
2.为什么可用血细胞计数板来测量微生物的数量?
血细胞计数板由四条平行槽构成3个平台,中间的平台较窄,其中间又被一短槽隔成两半,每边平台面各有一个含9个大格的方格网,中间大格为计数室。
计数室的长和宽各为lmm,中间平台下陷0.01mm,故盖上盖玻片后计数室的总容积为0.1mm3。
血细胞计数板的构造见图16.常见血细胞计数板的计数室有两种规格。
一种是16x25型,称为麦氏血细胞计数板.共有16个小格,每个小格分为25个小格。
另一种是25x16型,称为希里格式血细胞计数板,共有25个中格,每个中格又分成16个小格。
但是不管哪种规格的血细胞计板其计数室的小格均由400个小方格组成。
应用血细胞计数板在显微镜下直接计算微生物细胞的数量,方法是先测定若干个方格中的微生物细胞,再换算成每m1菌液(或每g样品)中微生物细胞数量。
图6-1血细胞计数板
三、实验材料和用具
Saccharomycescerevisiae(酿酒酵母)、生理盐水、美蓝染色液、显微镜、血细胞计数板、擦镜纸、盖玻片、无菌试管、电吹风机等。
四、操作步骤
酵母菌的显微镜计数
1菌悬液制备:
将5mL的生理盐水加到酿酒酵母的斜面培养物上,用接种环刮取菌苔,将菌悬液倒入盛有5mL的生理盐水和玻璃珠的三角瓶中,振荡使细胞分散。
2找计数室和检查血细胞计数板:
先在低倍镜下寻找计数板大方格网的位置,转换高倍镜后,调节光亮度至计数室线条清晰为止。
在显微镜下检查计数室,若有污物,用自来水冲洗,再用95%酒精棉球轻轻擦洗后,用电吹风机吹干。
再将计数室一角的小格移至视野中。
顺着大方格线移动计数板,使计数室位于视野中间。
3加样品:
在血细胞计数板上盖上盖玻片,用毛细滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖片边缘滴一小滴,静置5min,待细菌细胞
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