浅论2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠海马组织iNOS的表达及原花青素的干预.docx
- 文档编号:14794139
- 上传时间:2023-06-27
- 格式:DOCX
- 页数:5
- 大小:18.92KB
浅论2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠海马组织iNOS的表达及原花青素的干预.docx
《浅论2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠海马组织iNOS的表达及原花青素的干预.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《浅论2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠海马组织iNOS的表达及原花青素的干预.docx(5页珍藏版)》请在冰点文库上搜索。
浅论2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠海马组织iNOS的表达及原花青素的干预
浅论2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠海马组织iNOS的表达及原花青素的干预
【摘要】 目的探讨2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶含量的变化及原花青素对其表达的影响。
方法将30例大鼠随机分为假手术组、2型糖尿病单纯脑缺血组及PC低剂量组、中剂量组及高剂量组,于脑缺血后24h进行HE染色,免疫组化法测定海马组织iNOS含量。
结果2型糖尿病局灶性缺血组大鼠海马组织iNOS活性明显降低();PC低、中、高剂量组均不同程度降低iNOS活性(),改善神经细胞的受损程度:
其中以中、高剂量组明显(),但中、高剂量组间无明显差异()。
结论PC对2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠能够降低海马组织iNOS的活性。
【关键词】糖尿病脑缺血原花青素诱导型一氧化氮合酶
Abstract:
ObjectiveToinvestigatethecontentofinducednitricoxidesynthaseinhippocampustissueoftype2diabetesmellitusratswithfocalcerebralischemiaandeffectsofprocyanidin(PC)onit.MethodsThirtySDratsweredividedintosham-operation,model,low-dosePC,mid-dosePCandhigh-dosePCgroup.Afterischemiafor24h,weperformedhematoxylinandeosin(HE)staining;theexpressionofiNOSwasexaminedbyimmunohistochemicalSABCmethod.ResultsComparedwithsham-operationgroup,theincreasednumberofthepositiveiNOScellsincerebralhippocampusofmodelgroup,thedifferencebetweenthetwogroupswasofsignificant().Comparedwithmodelgroup,thePCgroupspossessedlowerthepositivecellsofiNOS.Themedium-doseandhigh-dosegroups‘effectsweremoreobviouscomparedwiththelow-dosegroups(),buttherewasnodifferencebetweenthetwogroups().ConclusionsPCcanreducetheactivityofprocyanidinonexpressionofiNOSintype2diabetesmellitusratswithfocalcerebralischemia.
Keywords:
procyanidin;diabetesmellitus;cerebralischemia;iNOS
原花青素是一类植物和食品中广泛存在的多酚化合物的总称,由不同数量的儿茶素和表儿茶素缩和而成,其含大量活性酚羟基使其具有很强的抗氧化及清除各种活性氧自由基的能力[1]。
本文进一步探讨了其对2型糖尿病SD大鼠局灶性脑缺血模型海马组织中诱导型一氧化氮合酶高表达的抑制作用,为其临床应用提供理论依据。
1材料与方法
实验动物选用健康雄性SD大鼠36只,体重180~240g(辽宁医学院实验动物中心提供)。
许可证号:
SCXK。
实验动物级别:
普通级。
实验分组36只大鼠随机分为假手术组、模型组、3个PC剂量组,每组6只大鼠。
PC组在建立2型糖尿病模型后给予灌胃,1次/24h,连续1周,于大脑中动脉闭塞术前1h再灌胃1次。
PC低剂量、中剂量、高剂量组分别以PC粉剂50、100、200mg/kg,每次蒸馏水配制成悬浮液灌胃,其他各组以相同的给药方法给予生理盐水(NS)1mL/kg。
型糖尿病大鼠局灶性脑缺血模型的制备第一步取SD大鼠每笼5只,常规饲料适应性饲养1周,然后喂饲高脂高糖饲料。
4周后,诱导出高胰岛素血症和胰岛素抵抗,按25mg/kg体重的剂量一次性尾静脉注射STZ溶液。
72h后取尾血测血糖,超过mmol/L为2型糖尿病大鼠[3]。
第二步选取2型糖尿病SD大鼠造模成功后2周后按照文献[4]进行进行大鼠局灶性脑缺血模型的制作。
栓线鼠即刻出现左侧Horner征或麻醉苏醒时出现右侧前肢内收屈曲或爬行时向右侧划圈或倾倒为造模成功。
脑组织病理形态学采用HE染色大鼠以10%水合氯醛(mL/100mg)腹腔注射麻醉,打开颈部,暴露颈右总动脉,插管,先输注生理盐水约50mL,然后输注4%多聚甲醛约50mL,断头取脑。
甲醛固定,冠状脑片制备,选择梗死中心(即最大层面),常规酒精脱水,石蜡包埋,制成4~6mm厚的切片,附片,行苏木素-伊红(HE)染色,分别观察梗死中心区、梗死周边区脑组织(海马CAl区、CA3区),前述区域神经细胞和血管内皮细胞(每个观察区选择具有代表性标本观察结果并记录)。
免疫组化法检测缺血侧大脑海马CA1区iNOS的表达造模后24h,大鼠以10%水合氯醛3mL/kg腹腔注射麻醉后固定,颈正中偏右切口,暴露右颈总动脉,用NS约50mL灌注,然后用4℃4%多聚甲醛液约50mL灌注固定,24h断头取脑,取双侧大脑冠状位距嗅球尖端6~11mm的脑组织块,放入4%多聚甲醛固定液中继续固定24h,常规梯度脱水、透明、石蜡包埋。
从冠状面中1/3层面开始留取切片,厚度5mm,连续切片,切片贴附于经APES处理的载玻片上,备用。
用免疫组化法测定。
严格按试剂盒说明书进行操作。
观察大鼠海马CA1区,每张取4个视野数用图像用分析仪计算iNOS阳性细胞数,取其平均值。
统计学处理实验数据用均数±标准差(±s)表示,采用统计软件进行单因素方差分析和q检验等统计分析。
2结果
大鼠海马CA1区脑组织病理形态学HE染色光学显微镜下观察,除假手术组(图1)外各组均可见正常神经元和损伤神经元,见正常神经元核圆形,边界及核仁清楚;损伤神经元胞核肿大,偏位,核仁消失,胞浆着色浅、苍白或核浓缩、深染,细胞呈三角形缺血性坏死变化。
损伤神经元上述特点在模型组表现得更明显;PC组能不同程度的改善神经细胞的核深染、核固缩程度,减少细胞及间质的水肿,使胞膜清楚,形态正常,核仁清晰可见的神经细胞数目增多。
大鼠海马组织CA1区iNOS表达与假手术组相比,模型组iNOS免疫阳性细胞出现高表达,iNOS阳性细胞形态呈椭圆形、三角形、胞质染色均匀,有显着性差异;与模型组相比,原花青素各组均降低iNOS免疫阳性细胞的数目,其中中、高剂量组较低剂量组效果更明显,且两组间无明显差异(),假手术组基本不表达。
结果见表1。
表1原花青素对2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠缺血侧海马CA1区iNOS平均阳性细胞数的影响
与单纯缺血组相比,a:
;与模型组相比,b:
;与低剂量组相比,c:
3讨论
糖尿病是脑梗死的的独立危险因素,血糖升高不但作为重要的危险因素参与脑梗死的发病过程,导致疾病的发病率增高,而且对脑梗死发生后病理过程又促进作用,加重脑组织缺血性损伤和病情,影响预后[5]。
高血糖加重脑缺血性损伤的机制有许多种,其中之一就是一氧化氮的毒性机制。
Ste-Marie等[6]研究发现,高血糖可以引起兴奋性递质谷氨酸增多,导致Ca2+增高有关,一氧化氮合酶表达增高导致NO的合成增多,使NO产生增多,并能提高NO的生物利用度,过量的NO产生和释放,可以通过自由基或其他途径产生神经毒性,加重神经元损害。
NOS是催化L-精氨酸生成内源性NO的限速酶,根据其存在部位及作用机制不同,分为内皮型(eNOS)、神经元型(nNOS)和诱导型(iNOS)。
NO在脑缺血性损伤的发生和发展过程中有双重作用。
在脑缺血早期,eNOS介导生成的NO通过扩张血管改善缺血区的血液供应,具有短时的保护作用,随着NO的大量产生,由nNOS和iNOS介导的神经毒性效应很快占优势,分别在脑缺血进展期和晚期介导神经毒性作用,造成神经元的损伤[7]。
PC具有抗氧化、降低毛细血管通透性和对心血管具有多种药理作用[8-10]。
PC抗氧化活性使其可抑制诸如组织胺、5羟色胺、前列腺素及白三烯等炎症因子的合成和释放。
在本实验中PC组能够明显减少2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠脑组织的iNOS平均阳性细胞表达数(),减轻神经元损伤,尤以中、高剂量组作用显着(),推测PC神经保护作用的机制可能是通过抗氧自由基作用抑制炎症反应,降低iNOS含量,减少神经毒性NO的产生,进一步发挥抗自由基作用,从而起到神经保护作用。
国内外关于PC的神经保护作用研究较少,尚未发现有PC对2型糖尿病局灶性脑缺血后海马组织iNOS表达影响的相关报道。
本研究从此角度研究PC的保护作用,从而对临床应用PC提供了证据。
【参考文献】
[1]张小郁,高明堂,李文广,等.葡萄籽提取物体外抗脂质过氧化作用的研究[J].自由基生命科学进展,1999,7(4):
116-120.
[2]PiaoCS,KimJB,HanPL,etal.Administrationofthep38MAPKinhibitorSB203580affordsbrainprotectionwithawidetherapeuticwindowagainstfocalischemicinsult[J].JNeurosisRev,2003,73(4):
537-544.
[3]司晓晨,尚文斌,卞慧敏,等.链脲佐菌素加高脂膳食诱导2型糖尿病大鼠模型[J].安中医临床杂志,2003,15(5):
383-385.
[4]陈佳俊,石岩殊,韩雪梅,等.线拴法大鼠局灶性脑缺血模型(PMCAO)的实验研究[J].吉林医学,2004,25(10):
16-17.
[5]李妮,林中昌.高血糖的危害性与致病机制研究进展[J].中国慢性病预防与控制,2004,12(3):
143-144.
[6]Ste-marieL,HazelAS,BeneurC,etal.Immunohistochemicaldetectionofinduciblenitricoxidesynthase,nitrotyrosineandmanganesesuperoxidedismutasefollowinghyperglycemicfocalcerebralischemia[J].BrainRes,2001,918(1-2):
10-19.
[7]TorunS,ChenF,PernowJ,et ofspontaneousorinducedbrainischemiaonvesselreactivity:
theroleofinduciblenitricoxidesynthases[J].LifeSci,2002,71(4):
679-692.
[8]YamaguchiF,YoshimuraY,NakazawaH,etal.FreeradicalscavengingactivityofgrapeseedextractandantioxidantsbyelectronspinresonancespectrometryinanH2O2/NaOH/DMSOsystem[J].AgricFoodChem,1999,7(7):
2544-2548.
[9]SinatraST,DeMarcoJ.Freeradicals,oxidativestress,oxidizedlowdensitylipoprotein(LDL),andtheheart:
antioxidantsandstrategiestolimitcardiovasculardamage[J].ConnMed,1995,59(10):
579-588.
[10]FacinoRM,CariniM,AldiniG,etal.Dietenrichedwithprocyanidinsenhancesantioxidantsactivityandreducesmyocardialpost-ischaemicdamageinrats[J].LifeSci,1999,64(8):
627-642.
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 浅论 糖尿病 局灶性脑 缺血 大鼠 海马 组织 iNOS 表达 花青素 干预
![提示](https://static.bingdoc.com/images/bang_tan.gif)