酚氯仿法提取DNA的原理.docx
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酚氯仿法提取DNA的原理
荧光原位杂交(FISH)探针的制备及其应用
概述
1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征
2、染色体异常常见的类型
3、染色体异常的检测方法
二、荧光原位杂交及其探针
1、荧光原位杂交的原理
2、荧光原位杂交的探针
三、荧光原位杂交探针的制备和荧光原位杂交(按试验流程介绍)
一、概述
1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征
1914年德国遗传学家Boveri就提出染色体畸变与肿瘤起源相关,然而这还仅仅只是一个假说;1960年Nowell和Hungerford在7例慢性髓系白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)的患者中发现后来被称为费城染色体(Philadelphiachromosome)的微小染色体;1973年Rowley证实了Ph染色体是9号和22号染色体易位所致,这是人们在肿瘤中认识到的第一个染色体易位;目前,已经有11,500篇文献报道了55,600多种克隆性细胞遗传学异常。
这些染色体畸变,尤其是染色体易位及其相应的融合基因在肿瘤致病的起始阶段有着重要的作用,无不说明克隆性细胞遗传学异常是肿瘤的特征,在肿瘤起源中起重要作用。
下图是各种疾病报告的克隆性染色体异常病例数
2、染色体异常的常见类型
染色体异常指数目异常和结构异常两类:
前者包括整条染色体数目的扩增和缺失;后者包括染色体易位、插入、倒置、区带的缺失或扩增等。
下图是染色体数目异常
染色体结构异常
3、染色体异常的检测方法
染色体异常的识别得益于二十世纪六十年代后发展起来的胰蛋白酶-姬姆萨染色和常规显带技术,使得常规筛查全基因组染色体异常和检测染色体核型改变成为可能。
染色体显带是细胞遗传学分析技术中标准和常用的方法,但耗时且依赖于获得良好的分裂相,还难于分析复杂和隐匿的异常。
PCR或荧光原位杂交(FISH,fluorescentinsituhybridization)对染色体异常的检出依赖于引物或探针与模板的结合,因此较常规显带具有更高的特异性,是高通量检测染色体异常的敏感和特异的方法。
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