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精品第三章蛋白质化学
第二章蛋白质化学
第一节蛋白质概述
一、蛋白质的功能
蛋白质是生物体内最重要的物质之一,英文名称叫做Protein,是“最原初的”、“第一重要的”意思,不论是动物、植物,还是简单的细菌、病毒等都有蛋白质存在。
它是细胞原生质的主要成分,与核酸一起共同构成了生命的物质基础。
蛋白质的重要性很早就被认识,1838年,当G.J.Mulder提出蛋白质这个名词时,他就明确指出:
在植物和动物中存在这样一种物质,毫不怀疑它是生物体中已知的最重要的物质,如果没有它,在我们这个星球上生命则是不可能存在的。
因此,蛋白质有着极其重要的生物学意义。
1生物催化功能:
蛋白质的一个最重要的生物学功能是作为有机体新陈代谢的催化剂——酶。
几乎所有的酶都是蛋白质。
生物体内的各种化学反应几乎都是在相应的酶参与下进行的。
2结构蛋白:
蛋白质另一个主要的生物学功能是作为有机体的结构成分。
在高等动物里,胶原纤维是主要的细胞外结构蛋白,参与结缔组织和骨骼作为身体的支架。
细胞里的片层结构,如细胞膜、线粒体、叶绿体和内质网等都是由不溶性蛋白质与脂质组成的。
3运输功能。
脊椎动物的血红蛋白和无脊椎动物中的血蓝蛋白,某些色素蛋白如细胞色素c等起传递电子的作用。
4收缩功能:
某些蛋白质与生物的运动有关,如肌球蛋白(myosin)和肌动蛋白(actin)是肌肉收缩系统的必要成分。
细菌的鞭毛或纤毛蛋白也能产生类似的活动。
近年来发现,在非肌肉的运动系统中普遍存在着运动蛋白。
有些蛋白质具有贮藏氨基酸的功能,作为有机体及其胚胎或幼体生长发育的原料,如蛋类中的卵清蛋白(ovalbumin)、乳类中的酪蛋白(casein)、小麦种子中的麦醇溶蛋白等。
5还有一些蛋白质具有激素的功能,对生物体内的新陈代谢起调节作用。
如胰岛素参与血糖的调节,能降低血液中葡萄糖的含量。
6免疫保护功能:
生物体防御体系中的抗体(antibody)也是蛋白质。
它能识别病毒、细菌以及其它机体的细胞,并与之相结合而排除外来物质对有机体的干扰,起到保护机体的作用。
近代分子生物学的研究还表明,蛋白质在遗传信息的控制、细胞膜的通透性,以及高等动物的记忆、识别机构等方面都起到重要作用。
二、蛋白质的元素组成
蛋白质是含氮的有机化合物,其含氮量占生物组织中一切含氮物质的绝大部分。
氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征性元素,根据对大多数蛋白质的氮元素分析,其氮元素的含量都相当接近,一般在15%~17%,平均为16%,即100g蛋白质中含有16g氮。
这是凯氏(Kjedahl)定氮法测定蛋白质含量的计算基础。
蛋白质含量=蛋白氮×6.25
式中:
6.25—16%的倒数,每测定1g氮相当于6.25g的蛋白质。
蛋白质除含有氮元素外,含有下述几种主要元素:
C:
50%;H:
7%;O:
23%;S:
0%~3%。
有些蛋白质含有少量的磷,还有些蛋白质含有微量的金属元素,例如铁、铜、锰、锌等。
三、蛋白质的分类
蛋白质可以按不同的方法分类。
作为分类的依据主要有:
分子的形状或空间构象;分子的溶解性;分子的组成情况;功能。
1组成成分:
单纯蛋白质-单纯蛋白不含有非蛋白质部分。
这类蛋白质水解后的最终产物只有氨基酸。
单纯蛋白质按其溶解性质的不同可分为白蛋白(或清蛋白)、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白、精蛋白、组蛋白以及硬蛋白等。
结合蛋白质-结合蛋白是指由单纯蛋白和非蛋白成分结合而成的蛋白质,包括核蛋白、色蛋白、磷蛋白、糖蛋白等。
2按照分子的形状或空间构象:
可将蛋白质分为纤维状蛋白和球状蛋白两大类。
纤维状蛋白分子很不对称,形状类似纤维。
有的纤维状蛋白能溶于水,如肌肉的结构蛋白和血纤维蛋白原;有的纤维状蛋白不溶于水,如角蛋白、丝心蛋白以及胶原蛋白等。
球状蛋白质分子的形状接近球形,空间构象比纤维状蛋白复杂。
球状蛋白质的溶解性较好,能结晶,生物体内的蛋白质大多数属于这一类。
3按照蛋白质的功能,则可划分为酶蛋白、结合蛋白、运输蛋白、受体蛋白、调节蛋白、防御蛋白、贮存蛋白、毒蛋白等。
上述蛋白质的分类并不是绝对的,彼此间是有联系的。
例如,组蛋白属于单纯蛋白,若它和DNA结合在一起时,则把它们合称为核蛋白,就属于结合蛋白类。
第二节氨基酸
蛋白质是一类含氮的生物大分子,结构复杂,功能多样。
经酸、碱或蛋白酶处理,使蛋白质彻底水解可以得到各种氨基酸。
现在已证明氨基酸是蛋白质的基本组成单位,组成蛋白质的氨基酸共有20种。
组成蛋白质的氨基酸称为蛋白质氨基酸。
目前从各种生物体中发现的氨基酸已有180多种,除去组成蛋白质的20种氨基酸外,其余氨基酸被称为非蛋白质氨基酸。
一、蛋白质氨基酸的一般结构特点及其分类
氨基酸是含有氨基及羧基的有机化合物。
从蛋白质水解产物中分离出来的常见的20种氨基酸除脯氨酸外,其余19种氨基酸在结构上的共同特点是与羧基相邻的-碳原子上都有一个氨基,因而称为-氨基酸。
结构通式如下:
从结构上看,除甘氨酸外,所有-氨基酸的-碳原子都是不对称碳原子(asymmetriccarbon)或称手性中心,因此都具有旋光性,都能使偏振光平面向左或向右旋转,左旋通常用(-)表示,右旋通常用(+)表示。
其次每种氨基酸都有D-和L-型两种立体异构体,这是与甘油醛相比较确定的。
书写时将羧基写在-碳原子的上端,则氨基在左边的为L-型,氨基在右边的为D-型(如图3-1)。
从蛋白质水解得到的-氨基酸都属于L-型的,所以习惯上书写氨基酸都不标明构型和旋光方向。
从-氨基酸的结构通式可以知道,各种-氨基酸的区别就在于侧链R基团的不同,即是说,不同的氨基酸有不同的R基团。
这样,组成蛋白质的20种常见氨基酸可以按照R基的化学结构或极性大小进行分类。
在这里,我们将按照各种氨基酸侧链R基团的极性差
别进行分类。
这对于认识蛋白质的性质、结构与功能更为有利。
按照这种分类方法可将氨
基酸分为四大类:
1即非极性或疏水性的侧链R基氨基酸;这一组中共有8种氨基酸。
4种带有脂肪烃侧链的氨基酸,即丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)
和异亮氨酸(Ile);2种含芳香环氨基酸:
苯丙氨酸(Phe)
和色氨酸(Trp);1种含硫氨基酸即甲硫氨酸(Met);1种亚氨基酸:
脯氨酸(Pro)
。
这组氨基酸在水中的溶解度比极性R基氨基酸小。
其中以丙氨酸的R基疏水性最小
2极性但不带电荷的R基氨基酸;这一组中有7种氨基酸。
这组氨基酸比非极性R基氨基酸易溶于水。
它们的侧链中含有不解离的极性基,能与水形成氢键。
丝氨酸Ser
、苏氨酸Thr和酪氨酸Tyr中侧链的极性是由于它们的羟基造成的;天冬酰胺Asn和谷氨酰胺GlnR基极性是它们的酰胺基引起的;半胱氨酸Cys则是由于含有巯基的缘故。
甘氨酸Gly的侧链介于极性与非极性之间,有时也把它归入非极性类,但是它的R基只不过是一个氢原子,对极性强的-氨基和-羧基影响极小。
这一组氨基酸中半胱氨酸和酪氨酸的R基极性最强。
半胱氨酸中的巯基和酪氨酸中的酚羟基,虽然在pH=7时电离很弱,但与这组氨基酸中的其他氨基酸侧链相比失去质子的倾向大得多。
3带正电荷的R基氨基酸;这一类的是两种酸性氨基酸天冬氨酸Asp和谷氨酸Glu,它们都含有两个羧基,并且第二个羧基在pH值6~7范围内也完全解离,因此分子带负电荷。
4带负电荷的R基氨基酸:
这一类氨基酸在pH=7时携带净正电荷,又叫碱性氨基酸。
赖氨酸Lys除-氨基外,在脂肪链的位置上还有一个氨基;精氨酸Arg含有一个带正电荷的胍基;组氨酸His有一个咪唑基。
在pH=6.0时,组氨酸分子50%以上质子化,但在pH=7.0时,质子化的分子不到10%。
组氨酸是R基的pK值在7附近的唯一种氨基酸。
注意,这些氨基酸的解离条件是指在细胞生理pH值范围内。
具有非极性或疏水的R基团的氨基酸
氨基酸名称
R集团
三字母符号
单字母符号
丙氨酸
(alanune)
缬氨酸
(valine)
亮氨酸
(leucine)
异亮氨酸
(isoleucine)
Ala
α-氨基丙酸
Val
α-氨基异戊酸
Leu
α-氨基异己酸
Ile
α-氨基-β-甲基戊酸
A
V
L
脯氨酸
(proline)
苯丙氨酸
(phenylalanine)
色氨酸
(tryptophan)
甲硫氨酸
(methionine)
Pro
β-吡咯烷基-α-羧酸
Phe
α-氨基-β-苯基丙酸
Trp
α-氨基-β-吲哚基丙酸
Met
α-氨基-γ-甲硫基丁酸
P
F
W
M
具有极性不带电荷的R基团的氨基酸
氨基酸名称
R基团
三字母符号
单字母符
甘氨酸
(glycine)
Gly
氨基乙酸
G
丝氨酸
(serine)
Ser
α-氨基-β-羟基丙酸
S
苏氨酸
(threonine)
Thr
α-氨基-β-羟基丁酸
T
半胱氨酸
(cysteine)
Cys
α-氨基-β-巯基丙酸
C
酪氨酸
(tyrosine)
Tyr
α-氨基-β-对羟苯基丙酸
Y
天冬酰胺
(asparagine)
Asn
N
谷氨酰胺
(glutamine)
Gln
Q
R基团带负电荷的氨基酸
氨基酸名称
R基团
三字母符号
单字母符号
天冬氨酸
(asparticacid)
Asp
α-氨基丁二酸
D
谷氨酸
(glutamicacid)
Glu
α-氨基戊二酸
E
表3—7R基团带正电荷的氨基酸
氨基酸名称
R基团
三字母符号
单字母符号
赖氨酸
(lysine)
Lys
α,ε-二氨基己酸
K
精氨酸
(argnine)
Arg
α-氨基-δ-胍基戊酸
R
组氨酸
(histidine)
His
α-氨基-β-咪唑基丙酸
H
二、氨基酸的理化性质
1.两性解离与等电点
依照Bronsted-Lowry的酸碱质子理论,酸是质子(H+)供体(donor),碱是质子的受体(acceptor)。
酸碱的相互关系如下:
HA=A-+H+
酸碱质子
这里原始的酸(HA)和生成的碱(A-)被称为共轭酸-碱对。
根据这一理论,氨基酸在水中的偶极离子既起酸(质子供体)的作用:
也起碱(质子受体)的作用:
同一个氨基酸分子上带有能释放出质子的-NH3+正离子和能接受质子的-COO-负离子,是两性离子。
氨基酸具有两性解离的特点,因此是两性电解质。
完全质子化的氨基酸可以看成是多元酸,侧链不能解离的中性氨基酸可看作是二元酸,酸性氨基酸和碱性氨基酸可视为三元酸。
现以甘氨酸为例说明氨基酸的解离情况。
它分步解离如下:
(3.1)
(3.2)
在上列公式中,K′1和K′2分别代表α-碳原子上的-COO-和-N+H3的表观解离常数。
如果侧链R基上有可解离的基团,其表观解离常数用K′R表示。
图3-2甘氨酸的解离曲线(方框内表示在解离曲线拐点处的pH值时所具有的离子形式)
为了判断滴定曲线上的两个拐点,pH值2.34和9.60究竟代表甘氨酸中哪个基团的解离,可以把它们与脂肪酸和脂肪胺的pK′值进行对比。
脂肪酸中的—COOH基pK′值一般在4~5,脂肪胺中的—N+H3的pK’值一般在9~10。
所以最可能的是pK1’=2.34代表甘氨酸中—COOH基的解离,pK2′=9.60代表甘氨酸中—N+H3基的解离。
甘氨酸中的—COOH基的酸性要比醋酸(pK′=4.76)强100多倍,这是因为邻近的—N+H3基的正电荷对—COOH的质子(H+)产生静电排斥因而增强了—COOH基释放质子的趋势,用下式表示:
含一氨基一羧基和不解离R基的氨基酸都具有类似甘氨酸的滴定曲线。
这类氨基酸的pK′值相当于pK1′的范围为2.0~3.0,pK2′为9.0~10.0(见表3-8)。
带有可解离R基的氨基酸,相当于三元酸,有三个pK′值,因此滴定曲线比较复杂。
表
图中曲线A和B之间的拐点(pI=5.97)就是甘氨酸处于净电荷为零时的pH值,称为等电点(isoelectricpoint,缩写为pI)或等电pH值(pHI)(在某一PH值时,氨基酸所带的静电荷为零,在电场中既不向阴极移动,也不向阳极移动,此时氨基酸所处溶液的PH值称为该氨基酸的等电点)。
在等电pH值时,氨基酸在电场中既不向正极也不向负极移动,即处于兼性离子(极少数为中性分子)状态,少数离子成阳离子和阴离子,但解离成阳离子和阴离子的数目相等。
对侧链R基不解离的中性氨基酸来说,其等电点是它的pKl′和pK2′的算术平均值。
在等电点以上的任何pH值,氨基酸带净负电荷,并因此在电场中向正极移动。
在低于等电点的任一pH值,氨基酸带有净正电荷,在电场中向负极移动。
在一定pH值范围内,氨基酸溶液的pH值离等电点越远,氨基酸所携带的净电荷越大。
对于多元酸只要依次写出它从酸性至中性至碱性解离过程的各种离子形式,取两性离子两侧的pK1值的平均值即为该氨基酸的pI值。
20种基本氨基酸,除组氨酸外,在生理pH值(pH值为7左右)下都没有明显的缓冲容量。
因为这些氨基酸的pK′值都不在pH值7附近(表3-8),而缓冲容量只在接近pK′值时才显现出来。
从表3-8和图3-2可见,组氨酸咪唑基的pK′R值为6.0,在pH值为7附近有明显的缓冲作用。
1.吸收光谱
参与蛋白质组成的20种氨基酸,在可见光区域都没有光吸收,但在远紫外区域(<220nm均有光吸收。
在近紫外区域(220~300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。
因为它们的R基含有苯环共轭双键系统。
酪氨酸的最大光吸收波长在275nm,苯丙氨酸的在257nm,色氨酸的在280nm。
蛋白质由于含有这些氨基酸,因此也有紫外吸收能力。
一般最大光吸收在波长280nm处,因此利用分光光度法能很方便地测定蛋白质的含量。
但是在不同的蛋白质中这些氨基酸的含量不同,所以它们的消光系数(或称吸收系数)是不完全一样的。
3.重要化学反应
氨基酸的化学反应主要是指它的α-氨基和α-羧基以及侧链上的功能团所参与的那些反应。
(1)与亚硝酸反应在室温下亚硝酸能与含游离α-氨基的氨基酸起反应,定量地放出氮气,氨基酸被氧化成羟酸(含亚氨基的脯氨酸则不能与亚硝酸反应)。
其反应式如下:
在标准条件下测定生成的氮气体积,即可计算出氨基酸的量,用此方法反应很快,也较为准确,是定量测定氨基酸的方法之一(此反应是Vanslyke氨基氮测定法的基础)。
此法还可用于蛋白质水解程度的测定。
这里值得注意的是生成的氮气(N2)只有一半来自氨基酸。
此外应该指出,除α-NH2外,赖氨酸的ε-NH2也能与亚硝酸反应,但速度较慢。
而α-NH2作用3~4min即完成反应。
(2)与2,4-二硝基氟苯的反应在弱碱性溶液中,氨基酸的α-氨基很容易与2,4-二硝基氟苯(DNFB)作用,生成稳定的黄色2,4-二硝基苯基氨基酸(简写为DNP-氨基酸)。
这个反应首先被英国的Sanger用来鉴定多肽或蛋白质的N末端氨基酸。
(3)与异硫氰酸苯酯反应在弱碱性条件下,氨基酸中的α-氨基还可以与异硫氰酸苯酯(PITC)反应,产生相应的苯氨基硫甲酰氨基酸(PTC-氨基酸)。
在无水酸中,PTC-氨基酸即环化为苯硫乙内酰脲(PTH),后者在酸中极稳定。
这些衍生物是无色的,可用层析法加以分离鉴定。
这个反应首先被Edman用于鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸。
它在多肽和蛋白质的氨基酸顺序分析方面占有重要地位。
(4)与茚三酮反应在氨基酸的分析化学中,具有特殊意义的是氨基酸与茚三酮的反应。
茚三酮在弱酸性溶液中与α-氨基酸共热,引起氨基酸氧化脱氨、脱羧反应,最后茚三酮与反应物──氨和还原茚三酮发生作用,生成蓝紫色物质。
其反应如下:
用纸层析或柱层析把各种氨基酸分开后,利用茚三酮显色可以定性或定量测定各种氨基酸。
定量释放的CO2用测压法测量,从而计算出参加反应的氨基酸量。
两个亚氨基酸──脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应形成黄色化合物。
第三节肽
一、肽键、肽链、肽单位、氨基酸残基和肽的命名
1肽:
一个氨基酸的α-羧基和另一个氨基酸的α-氨基脱水缩合而成的化合物叫肽。
2肽键:
氨基酸之间脱水后形成的键叫肽键(peptidebond),又称为酰胺键,写作-CO-NH-。
最简单的肽由两个氨基酸组成,称为二肽(dipeptide),其中包含一个肽键。
含有三个、四个氨基酸的肽分别称为三肽、四肽。
10个以上氨基酸所生成的肽称为多肽,多肽为链状结构,所以多肽也叫多肽链。
3氨基酸残基:
肽链中氨基酸由于参加肽键的形成已经不是原来完整的分子,因此称为氨基酸残基(aminoacidresidue)。
多肽链中每一氨基酸单位在形成肽键时都丢失1分子水。
严格地说每形成一个肽键丢失1分子水,因此丢失的水分子数比氨基酸残基数少1个。
一条多肽链通常在一端含有一个游离的末端氨基,在另一端含有一个游离的末端羧基。
这两个游离的末端基团有时连接而成环状肽(cyclicpeptide)。
肽的命名是根据参与其组成的氨基酸残基来确定的。
规定从肽链的NH2末端氨基酸残基开始,称为某氨基酰某氨基酰……某氨基酸。
例如,具有下列化学结构的五肽命名为丝氨酰甘氨酰酪氨酰丙氨酰亮氨酸,简写为Ser—Gly-Tyr—Ala—Leu。
肽链也像氨基酸一样具有极性,通常总是把NH2末端氨基酸残基放在左边,COOH末端氨基酸残基放在右边。
除特别指明者外,上面举例的五肽丝氨酸残基一侧为NH2末端,亮氨酸残基一侧为COOH末端。
注意,反过来书写的Leu—Ala—Tyr—Gly—Ser是与前者不同的另一种五肽。
4肽单位:
肽键的四个原子和与之相连的两个α-碳原子所组成的基团。
肽单位的特点:
(1)主链肽键C—N具有双键性质而不能自由旋转C-N单键的键长是0.148nm;C=N双键的键长是0.127nm;X-射线衍射分析证实,肽键中C…N的键长为0.132nm。
(2)肽键的所有4个原子和与之相连的两个α-碳原子(习惯上称为Cα)都处于一个平面内,此刚性结构的平面称为肽平面(peptideplane)或酰胺平面(图3-3),每一个肽单位实际上就是一个肽平面。
(3)肽平面内的C=O与N—H呈反式排列,各原子间的键长和键角都是固定的。
从上面五肽的化学结构可以看出,肽链中的骨干是由右示单位规则地重复排列而成的,称之为共价主链(mainbackbond)。
各种肽链的主链结构都是一样的,但侧链R基的顺序即氨基酸残基顺序不同。
肽链主链上的重复结构称为肽单位(peptideunit)或肽基(peptidegroup)。
肽键的实际结构是一个共振杂化体(resonancehybrid)。
由于氮电子离域形成了包括肽键的羰基氧、羰基碳和酰胺氮在内的O—C—Nπ系统。
二、重要的寡肽及其应用
肽广泛存在于动植物组织中,有一些在生物体内具有特殊功能。
据近年来对活性肽的研究,生物的生长发育、细胞分化、大脑活动、肿瘤病变、免疫防御、生殖控制、抗衰老、生物钟规律及分子进化等均涉及到活性肽。
(1)谷胱甘肽动植物细胞中都含有一种三肽,称为还原型谷胱甘肽(reducedglutathion)即γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸,因为它含有游离的-SH,所以常用GSH来表示。
它的分子中有一特殊的γ-肽键,是谷氨酸的γ-羧基与半胱氨酸的α-氨基缩合而成,显然这与蛋白质分子中的肽键不同。
结构式如下:
还原型谷肽甘肽(GSH)氧化型谷胱甘肽(GSSG)
由于GSH中含有一个活泼的巯基,很容易氧化,两分子GSH脱氢以二硫键相连就成为氧化型谷胱甘肽(GSSG)。
谷胱甘肽作为清除剂与有害的氧化剂作用可以保护含巯基的蛋白质,还是某些酶的辅酶,在体内氧化还原过程中起重要作用。
(2)脑啡肽在小的活性肽中一类称为脑啡肽(enkephalins)的物质近年来很引人注意。
它是一类比吗啡更有镇痛作用的五肽物质。
1975年底将其结构搞清,并从猪脑中分离出两种类型的脑啡肽。
其结构如下:
甲硫氨酸型脑啡肽(Met-脑啡肽)
H·Tyr·Gly·Gly·Phe·Met·OH
亮氨酸型脑啡肽(Leu-脑啡肽)
H·Tyr·Gly·Gly·phe·Leu·OH
由于脑啡肽类物质是高等动物脑组织中原来就有的,因此对它们进行深入研究不仅有可能人工合成出一类既有镇痛作用而又不会像吗啡那佯使病人上瘾的药物来,更重要的是为分子神经生物学的研究开阔了思路,从而可以在分子基础上阐明大脑的活动。
(3)加压素加压素是脑下垂体后叶所分泌的多肽激素,由九个肽组成,呈环状结构,其简式如下:
加压素的功能是促进血管平滑肌收缩和抗利尿作用,因此临床上用于治疗尿崩症和肺咯血。
第四节蛋白质的分子结构
蛋白质是生物体中功能最多样化的生物大分子。
它们在功能上的多样化决定于构象上的多样化。
蛋白质的基本结构是由氨基酸残基构成的多肽链,再由一条或一条以上的多肽链按一定的方式组合成具有特定结构的生物活性分子。
随着肽链数目、氨基酸的组成及其排列顺序不同就形成了不同的蛋白质。
根据对不同种类、不同形状、不同功能的蛋白质三维结构的研究,已确认蛋白质的结构有不同的层次,人们为了认识的方便通常将其分为一级结构、二级结构、超二级结构、结构域、三级结构及四级结构。
一、蛋白质的一级结构
1.一级结构的含义及重要性
1969年,国际纯化学和应用化学协会经过讨论,规定一级结构只指肽链中的氨基酸的排列顺序,其他内容属于一般的化学结构。
这种规定对于讨论“一级结构决定高级结构”这一命题是有意义的。
1953年,Sanger等人经过将近10年的努力,首次完成了牛胰岛素的氨基酸顺序的测定,目前一级结构已经测定的蛋白质数量日益增多,主要的有胰岛素、细胞色素c、血红蛋白、肌红蛋白、烟草花叶病毒蛋白、牛胰核糖核酸酶及溶菌酶等。
胰岛素是一级结构首先被揭示的蛋白质,是动物胰岛细胞分泌的一种激素蛋白。
胰岛素分子由51个氨基酸残基组成,分子量为5734,它由两条肽链组成,一条称为A链,是21肽;另一条称为B链,是30肽。
A链和B链由两对二硫键连接起来。
在A
链内还有一个由二硫键形成的链内小环(图3-4)。
测定一级结构的意义在于:
不仅使人工合成有生物活性的蛋白质和多肽成为可能,而且对于揭示一级结构与生物功能间的关系也有着特别重要的意义。
我国生化工作者根据胰岛素的氨基酸顺序于1965年用人工方法合成了具有生物活性的牛胰岛素,第一次成功地完成了蛋白质的全合成,为生物化学的发展作出了重大贡献。
此外,人们可以从比较生物化学(Comparativebiochemistry)的角度分析比较功能相同、而种属来源不同的蛋白质的一级结构差异,为生物进化提供生物化学依据;也可以分析比较同种蛋白质的个体差异,为遗传疾病的诊治提供可靠依据。
图3-4牛胰岛素的化学结构
2.测定一级结构的基本原理和方法
氨基酸顺序测定的战略,应该先把多肽链降解成足够短的顺序以便使化学反应能够产生可靠的结果,然后再把这些结果组合成整条多肽链的顺序。
在蛋白质顺序测定中实际所采用的步骤是:
(1)将待测蛋白质进行纯化。
(2)拆开所有二硫键。
若多肽链之间或多肽链内部存在二硫键,在测定肽链的氨基酸顺序之前必须把二硫键拆开,以获得伸展的肽链,这样才能进行氨基酸顺序的测定。
最常用的方法是还原法和氧化法。
还原法是用过量的巯基乙醇(mercaptoethanol)或二硫苏
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