色谱柱使用手册.docx
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色谱柱使用手册.docx
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色谱柱使用手册
正相、反相和极性胶联柱使用手册
分类:
质量检验2007.3.2222:
20作者:
LAI|评论:
0|阅读:
146
正相、反相和极性胶联柱使用手册
ChrompackHPLCNormal-,ReversedphaseandPolarbondedcolumns
注意:
此色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂(pH>7.0)或酸性溶剂(pH<2.0)会导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前,你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
未正确地使用不能享受保修待遇。
1.简介
此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。
硅胶形态的柱子用于正相(非水)条件。
反相(C8,C18,ODS,RP-8和RP-18)通常用于反相条件(水相)。
极性胶联型(APS,diol,CN和NH2)依照应用目的,可以用于正相和反相条件。
建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下,这是因为柱子在特定的条件下,固定相的性质会发生变化,所以在其他的条件下,会影响柱效。
也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下,这是因为这种过程会发生重复性差的问题(每一次注射之间和柱与柱之间的比较)。
2.色谱柱老化
在开始分析工作以前,柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
A.在反相条件下老化
要老化这类柱子,首先要使用乙腈或者甲醇淋洗,然后你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前,每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗)。
如果流动相中使用了添加物(例如缓冲液或离子对试剂),建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。
缓冲冲洗应当首先以低流速进行,最后再使用正常流速。
B.在正相条件下老化
柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。
柱子的干燥(激活)或润湿(失活)可能是需要的。
使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。
干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
C.对于极性键合柱的特殊说明
由于这些柱子可以用于反相或者正相条件,在进行老化以前,一定要首先检查你要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。
如果这些溶剂不能混溶,必须先使用一个合适的缓冲溶剂进行冲洗。
3.洗脱液
注意第节和第2节。
一定不要使用pH低于2或者高于7的缓冲液,这是由于它们会改变固定相的性质。
极性键合柱最好使用在3到5之间。
在使用以前,洗脱液要进行脱气,以及使用0.5微米的滤膜过滤,以免发生检测和泵送问题。
一定要在开始使用系统以前检查水溶液中有否微生物生长,否则你的柱子会堵塞,柱压会升高到无法接受的水平。
4.流量和压力
柱内径(毫米)
流速
(ml/min)
最佳
最高
2.0
0.2
1.0
3.0
0.4
2.0
4.6
1.0
4.0
10.0
4.7
18.0
注意:
最高压力:
不锈钢柱:
4500psi;玻璃柱:
3000psi
增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。
如果你想更换柱子,,要降低流量至0,等待洗脱液完全流出柱子为止(2分钟)。
拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。
高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果。
使用保护柱(见第6节)会防止污染物沉积在分析柱上。
5.样品准备
保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。
你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很大的化合物泵入色谱柱,不管是来自流动相还是样品。
特别地,要禁止导入颗粒杂质。
这些最终都会造成操作压力的增高而且非常困难或者不可能去除。
6.保护柱
一定要使用保护柱,因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力的增高而且影响选择性。
对于ChromSep柱我们建议使用正确型号的ChromSep保护柱。
这个柱子的填充材料与用于分析的色谱柱的材料相似。
当柱压增高的或者观察到柱效降低的时候就需要更换保护柱了。
对于常用不锈钢柱,我们建议使用相同型号的ChromguardHighEfficiency(高效)柱(10X3.0mm)或HighCapacity(高容量)柱(50X3.0mm)。
7.进样量和浓度
柱子的最大载样量取决于:
柱子的型号,使用的条件和样品的类型。
很难给出一个一般的指示。
对于进样体积的建议则比较容易(见表中的典型值)。
注射了太大体积或太浓的样品会使峰展宽或者峰融合。
柱尺寸
长度*内径
最大样品体积
250×2.0mm
±10μl
200×3.0mm
±15μl
250×4.6mm
±50μl
250×10.0mm
±250μl
8.温度
HPLC柱最好在柱温箱中使用。
重复性取决于温度控制。
最佳的温度与特定的应用有关。
温度影响洗脱液流动的线速度。
在使用ChromSep玻璃柱的时候,一定要调节流速使压力保持在3000psi以下。
9.贮存
一定不要在柱子内充满缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下贮存色谱柱。
贮存溶剂应当含有至少20%的有机溶剂,以防止有细菌的生长。
10.柱效损失的可能原因
1.额外的峰展宽。
当使用小直径或者长度较短的柱子时,峰展宽的情况可能比较明显。
要保证管路的长度和内径都保持最小。
检查进样体积和检测器检查池体积是否适用于柱体积。
2.洗脱的平衡时间不够。
3.不正确柱温。
4.不正确的修正浓度。
5.床压缩。
使用了过大的洗脱流速。
将柱子反向,使用低流速。
11.柱效丧失和/或高背压
1.颗粒物积聚在烧结物或者树脂床上(它们都会使背压增高)。
如果柱压增高了,将柱子与进样器断开,运行泵,以验证背压的来源确实是来自柱子的颗粒污染(样品、洗脱液和系统)。
倒转柱子,以反向的流动来冲洗柱子。
如果这样不能解决问题,更换进口过滤器或者筛板。
2.微生物在洗脱液中生长。
倒转柱子,尝试以反向的流动来将污染物冲洗出柱子。
更换进口过滤器或者筛板。
3.有蛋白质脂肪,油脂污染或者极性化合物等污染。
再生柱子(见第12节)。
12.再生
1.再生反相色谱柱
a.首先倒转柱子。
b.以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟,使用的溶剂的顺序要按照水—甲醇—异丙醇—二氯甲烷—异丙醇—甲醇—水进行。
c.柱子转回正常方向,使用分析所用洗脱液平衡。
注意:
在使用另外的淋洗方法的时候,一定要先用水开始冲洗以去除缓冲液,保证其后的洗脱液可以混溶。
2.再生硅胶柱
a. 首先倒转柱子。
b. 以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟,使用的溶剂的顺序要按照异辛烷(或己烷)—乙酸乙酯—干燥的异辛烷(或己烷)进行。
c. 柱子转回正常方向,使用分析所用洗脱液平衡。
3.再生极性键合柱
取决于使用的条件,可以使用反相的条件,也可以使用硅胶柱的条件。
注意:
绝对不要使用酮类或醛类冲洗氨基柱,因为可能与固定相发生反应。
四氢呋喃作为替代可以使用。
以上内容由美国瓦里安技术中国有限公司北京办事处李华译自随柱附带的操作手册。
2002年5月16日
有机酸分析柱使用手册
分类:
质量检验2007.3.2222:
19作者:
LAI|评论:
0|阅读:
124
有机酸分析柱使用手册
ChrompackOrganicAcidsColumn
注意
ChrompackOrganicAcids色谱柱填充的是聚合物材料,需要特殊的维护。
向柱内导入以下介绍了的以外的有机溶剂会导致聚合物材料膨胀和过度增压。
因此,你应当在安装柱子以前,先用异丙醇,然后用0.1N的硫酸十分彻底地冲洗管路以彻底去除有机溶剂。
在使用这个柱子之前,你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
未正确地使用不能享受保修待遇。
1.简介
ChrompackOrganicAcids柱填充有氢形式的阳离子排斥树脂,特别开发用于在低压条件下分离包括酒、果汁、奶制品、生物样品、工业原料和环境样品中的有机酸。
2.洗脱
推荐使用浓度范围在0.002到0.05N的稀硫酸溶液。
大多数的分析使用0.01N的硫酸(pH=±2.3)都可以获得成功。
其他的强酸例如磷酸和高氯酸也可以使用,但是卤酸例如盐酸不推荐使用,因为它们会腐蚀不锈钢。
当有强酸用于柱子的洗脱液的时候,柱子就进行了自身再生。
所以,特别的再生步骤是不需要的。
但是这样并不能直接对洗提强度和大多数有机酸的保留性质进行校正,较强的洗提强度通常只减少最后馏出的化合物的保留时间。
在使用以前,所有的洗脱液都要用0.45μm滤膜过滤和脱气。
对于这个柱子,使用有机相修正,例如乙腈(最大20%),可以缩短保留时间。
这样做,总是会造成背压的升高。
所以,较高的操作温度和较低的洗提流速通常可用于防止产生过高压力。
注意,一旦对柱子使用了有机相修正,柱子就会保留使用了有机相修正的洗脱液的色谱特性,即使洗脱液已经恢复到原始的100%的水相,柱子的性质也不会回到当初发货时的状态了。
因此,如果你的应用中包括有芳香酸或不饱和酸,它们会出现较长的保留时间,我们推荐使用Chrompack的芳香酸柱(Cat.no.28352),它是专门设计用于此类化合物的。
3.流量和压力
推荐用于ChrompackOrganicAcids柱的流量是0.3-0.8ml/min。
任何情况下洗脱流量都不能超过0.8ml/min,记住柱子压力产生的原因有洗脱流速,柱温,洗脱液的黏度等等。
要限制洗提流速,使泵压力不超过2200PSI。
在45°C,0.6ml/min流速时,预期的压力应当在600-1500PSI之间。
如果在此条件下,柱压超过了1200PSI,通常指示有污染物沉积在填充材料上,必须采取改正的措施。
(见有关柱效丧失的原因一节)。
4.样品准备
保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。
你必须防止将脂肪,油脂,蛋白质物质和重金属离子导入色谱柱,不管是流动相还是样品。
特别地,要禁止导入颗粒杂质。
这些最终都会造成操作压力的增高而且非常困难或者不可能去除。
生物样品在注射以前必须除去蛋白质。
较好的除蛋白试剂是磺基水杨酸。
5.柱前过滤器
柱前过滤器含有0.5-2.0um的多孔不锈钢烧结物,安装在样品注射器和柱子之间用于从洗脱液中去除颗粒物。
这样可以防止分析柱产生压力增高的问题,延长柱子的寿命。
当有保护柱的时候,柱前过滤器就可以不用了。
6.保护柱
保护柱应当用在这个柱上,因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力的增高。
样品中诸如盐和蛋白质类的污染物可能会使柱效降低,在注射进柱子以前应当去除。
7.样品量
通常使用的样品量在10-50微升的范围内,但是进样高达100微升应当没有问题。
进样500微升或者更多可能会导致峰变宽或者融合。
8.温度
ChrompackOrganicAcids柱可以在20-90°C使用。
提高柱温会改善柱效。
然而,柱温也会样品的保留,所以建议使用柱温箱以保证得到可以重复的结果。
由于某些分离对温度非常敏感,所以有必要仔细地操控温度以优化分离效果。
如果在室温使用这个柱子,洗脱流速必须降低保持泵压不高于2200PSI。
9.贮存
柱子提供给你的时候使用0.01N的硫酸作为平衡。
这也是建议的用于贮存的洗脱液。
柱子在保存的时候,一定要使用提供的螺丝和垫圈将端口密封。
色谱柱必须以这种方式使用和保存,在任何时候都要保证不使柱床干涸。
不正确的贮存(没有密封)或不正确的使用,会导致填充材料部分地干涸,会发生高的柱压。
在这种情形下,可以倒转柱子,要以0.1ml/min的流速在90°C向柱子泵入0.01N的硫酸。
逐渐增加流速到0.5ml/min。
你将会得到正常的压力,柱子将可以用于任意方向。
如果这样还不能解决问题,柱子可能有颗粒物或其他物质的污染。
10.柱效丧失的可能原因
1.额外的峰展宽。
要保证管路的长度和内径都保持最小。
2.不正确的柱温。
3.不正确的洗脱流速。
4.在开始洗脱的时候,平衡时间不够。
5.洗脱液的pH或离子强度不正确。
6.不正常的阳离子(如Na+或H+)。
7.聚合物污染。
a. 高柱压伴随柱效降低。
1.颗粒物积聚在烧结物或者聚合物床上。
(a)样品来源---过滤或离心
(b)洗脱液来源---过滤洗脱液,封闭洗脱液容器。
(c)系统来源---冲洗整个系统管路和泵;安装在线系统过滤器。
2.蛋白质类物质的积聚
(a)微生物在样品中生长。
(b)微生物在洗脱液中生长。
b. 正常柱压伴随柱效降低
1.金属离子污染
(a) 不确切的钢合金存在于系统中。
(b) 洗脱液含卤素。
(c) 在制备或者运输过程中洗脱液金属离子污染。
2.有机污染
(a) 样品中有脂肪,油脂,脂质。
聚合物的表面被覆盖。
(b) 从样品中或者未正确制备的洗脱液中带来的非特定的有机物。
(c) 在洗脱液制备完成以后带入洗脱液中的非特定有机物,例如在运输时从大气中带来。
8.床压缩
a. 过高的洗提流速
b. 使用了不正确的有机相修正或其浓度过高。
11.色谱柱再生
使用稀硫酸(或其他强酸),通常这种洗脱液会将被样品组分替换掉的氢离子补充回来而再生柱子。
因此,不必要采取特别的再生步骤。
12.用于纠正聚合物污染或聚合物床压缩的可能的操作
1.制备新鲜的洗脱液
在很多情况下,柱效的丧失会归结为洗脱液的污染。
所以,要在使用柱子以前要制备新鲜的洗脱液,冲洗所有液体管路。
洗脱液在使用以前,应当用0.2到0.4微米的滤膜过滤。
2.聚合物床的“放松”
如果使用了不正确的高流速的话,很多聚合物与硅胶连接会缺乏硬度而可以被压缩或坍塌。
然而,它们是可以回弹的,在很多情况下,压缩是可以恢复的。
要修复坍塌的聚合物床,关闭泵,使聚合物放松30分钟。
倒转色谱柱,泵入洗脱液,0.1毫升流速,65°C淋洗过夜。
恢复色谱柱的正常条件。
3.倒转色谱柱
如果柱效问题依旧存在,可以将柱子倒转,用标准的操作条件在这个反方向操作。
如果柱效恢复正常,继续在这样的状态工作。
如果没有改善,聚合物也许就永久地污染了而需要更换。
如下所述,清洗和再生步骤的关键在某种意义下是从聚合物床上清洗污染物,从而恢复柱效。
然而,重要的是在再次使用柱子之前要尝试查找问题的根源。
4.色谱柱清洗
准备25%乙腈的水溶液。
设定柱温为65°C,使洗脱液反方向0.1毫升流过色谱柱。
然而,不要使柱压超过2200psi,如果必要,调整柱流速,向柱内泵入此溶液4小时(如果污染特别严重,就要过夜)。
在正常条件下测试柱子。
如果压力恢复到正常,但是分辨率依然很差,就要尝试如下所述的柱再生步骤。
如果压力没有恢复正常,柱子也许就永久地损坏了而需要更换。
5.色谱柱再生
准备含0.05N的硫酸溶液。
设定柱温为65°C。
使柱子反方向,以正常洗提流速泵入此酸溶液。
注意观察柱压,不要是柱压超过2200psi,如果必要,调整柱流速。
向柱内泵入此溶液2小时(如果污染特别严重,就要过夜)。
6.色谱柱的检查
将柱温恢复到正常。
以正常的流速在正常分析条件下操作,但是要反方向。
如果柱效没有
恢复,将柱子正方向安装,重复以上步骤。
注意可能需要一些时间来使基线稳定。
7.色谱柱的更换
以上步骤只在某些情况下可以恢复柱效。
对于这些处理手段,重金属和某些有机物污染可能无效。
在这种情况下,必须更换柱子。
明智的做法是在安装新柱子以前,找到问题产生的原因。
仔细阅读Chrompack的文件。
记住保护柱的使用会延长柱子的寿命以及防止很多污染问题。
以上内容由美国瓦里安技术中国有限公司北京办事处李华译自ChrompackOrganicAcids柱随柱附带操作手册。
2002年5月15日
阴离子交换柱使用手册
分类:
质量检验2007.3.2222:
18作者:
LAI|评论:
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1008
阴离子交换柱实用手册
ChrompackHPLCIonoSpherAColumns
注意
ChrompackIonoSpherA色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂(pH>6.5)或酸性溶剂(pH<2.5)会溶解硅胶材料导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前,你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
1.简介
ChrompackIonoSpherA柱填充硅胶基质的强阴离子交换材料,含有季胺功能团。
特别设计用于使用常规HPLC分析有机和无机阴离子。
2.色谱柱老化
在开始分析工作以前,柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
要老化这类柱子,首先要使用甲醇淋洗,然后使用去离子水。
再用你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前,每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗)。
3.洗脱液
推荐在这类柱上使用的洗脱液要求低电导,或者UV吸收的缓冲液,例如磷酸缓冲液,pH范围从2.5到6.5。
绝对不能使用水杨酸缓冲液,因为水杨酸分解产物会改变固定相的性质。
另外,硝酸铵(1mM)可以改善峰型,而且不会明显影响保留时间,检测或定量结果。
洗脱液在使用以前要脱气,并用0.45微米滤膜过滤,防止发生检测和泵送问题。
一定要在开始使用系统以前检查有否微生物生长,否则你的柱子会堵塞,柱压会升高到无法接受的水平。
4.流量和压力
柱内径(毫米)
流速
(ml/min)
最佳
最高
2.0
0.2
1.0
3.0
0.4
2.0
4.6
1.0
4.0
10.0
4.7
18.0
注意:
最高压力:
不锈钢柱:
4500psi;玻璃柱:
3000psi
增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。
如果你想更换柱子,,要降低流量至0,等待洗脱液完全流出柱子为止(2分钟)。
拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。
高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果。
使用保护柱(见第6节)会防止污染物沉积在分析柱上。
5.样品准备
保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。
你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很大的化合物泵入色谱柱,不管是来自流动相还是样品。
特别地,要禁止导入颗粒杂质。
这些最终都会造成操作压力的增高而且非常困难或者不可能去除。
6.保护柱
一定要使用保护柱,因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力的增高而且影响选择性。
对于ChromSep柱我们建议使用ChromSepAnion交换保护柱。
当柱压增高的或者观察到柱效降低的时候就需要更换保护柱了。
对于常用不锈钢柱,我们建议使用ChromguardAnionexchangeHighEfficiency(高效)柱(10X3.0mm)或HighCapacity(高容量)柱(50X3.0mm)。
7.进样量和浓度
柱尺寸
长度*内径
最大样品体积
250×2.0mm
±10μl
200×3.0mm
±15μl
250×4.6mm
±50μl
250×10.0mm
±250μl
当样品的洗提强度比洗脱液低(在柱样品预浓缩)的时候,更高的样品量也可以注射。
8.温度
ChrompackIonoSpherA柱可以在室温环境使用。
为了提高柱子的稳定性,建议不要在40°C以上使用。
9.贮存
在贮存柱子以前,建议先用去离子水,然后用甲醇冲洗。
一定不要在柱子内充满缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下贮存色谱柱。
10.检测灵敏度
对于使用邻苯二甲酸缓冲液作为洗脱液的阴离子的检测,以下几种方法可用:
·折光检测
·电导检测
·紫外检测
邻苯二甲酸缓冲液对所有三种检测方法都是特别好的,因为邻苯二甲酸缓冲液具有高的折光性,相对低的电导率和紫外吸收性质。
检测波长取决于要检测的离子。
11.统峰
当你使用ChrompackIonoSpherA柱的时候,系统峰可能会出现。
通常一个馏分既溶剂在前面,第二个馏分应当是硫酸盐。
方向(正峰或负峰)取决于样品的pH。
位置取决于流动相的Ph。
较低pH会使系统峰向前移动。
在我们的实验中pH值在3.8-4.3之间最佳。
12.柱效损失的可能原因
1.额外的峰展宽。
要保证管路的长度和内径都保持最小。
2.洗脱的平衡时间不够。
3.不正确的洗脱液pH或洗脱液的离子强度。
4.洗脱液中存在不正确离子。
5.固定相污染。
a.高柱压伴随分辨率降低。
1.颗粒物积聚在烧结物或者填充物床上。
(a)样品来源---过滤或离心
(b)洗脱液来源---过滤洗脱液,封闭洗脱液容器。
(c)系统来源---冲洗整个系统管路和泵;安装在线系统过滤器。
2.蛋白质类物质的积聚
(a)微生物在样品中生长。
3.微生物在洗脱液中生长。
b. 正常柱压伴随柱效降低
1.有机污染
(a)样品中有脂肪,油脂,脂质。
固定相的表面被覆盖。
(b)从样品中带来的不确切的有机物或未正确制备的洗脱液。
(c)在洗脱液制备完成以后带入洗脱液中的非特定有机物,例如在运输时从大气中带来。
13.对于纠正污染问题的可能有效的操作
1.准备新鲜的洗脱液
在很多情况下,柱效的丧失可以归结为洗脱液的污染。
所以,要在使用柱子以前准备新鲜的洗脱液,冲洗所有液体管路。
洗脱液应当用0.2到0.4微米的滤膜过滤,在使用以前要脱气。
2.色谱柱再生
a.首先使色谱柱反向
b.以0.4ml/min的流速用1M硝酸铵洗脱30ml。
c.以0.4ml/min的流速用40:
60(v:
v)的甲醇/水洗脱30ml。
d.以0.4ml/min的流速用异丙醇洗脱30ml。
e.以0.4ml/min的流速用水洗脱30ml。
f.以0.4ml/min的流速用洗脱液洗脱30ml。
g.将柱子转回正常方向。
用洗脱液平衡。
以上内容由美国瓦里安技术中国有限公司北京办事处李华译自ChrompackIonoSpherA柱随柱附带操作手册。
2002年5月14日
阳离子交换柱使用手册
ChrompackHPLCIonoSpherCColumns
注意
ChrompackIonoSpherC色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂(pH>6.5)或酸性溶剂(pH<2.5)会溶解硅胶材料导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前,你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
1.简介
ChrompackIonoSpherC柱填充硅胶基质的强阳离子交换材料,含有磺酸盐功能团。
特别设计用于使用常规HPLC分析有机和无机阳离子。
2.色谱柱老化
在开始分析工作以前,柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
要老化这类柱子,首先要使用甲醇淋洗,然后使用去离子水。
再用你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前,每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗)。
3.洗脱液
推荐在这类柱上使用的洗脱液是要求低电导的缓冲液,例如柠檬酸或酒石酸缓冲液(或其混合溶液),pH范围从2.5到6.5,其中有乙二胺作为洗脱阳离子。
绝对不能使用水杨酸缓冲液,因为水杨酸分解产物会改变固定相的性质。
洗脱液在使用以前要脱气,并用0.5微米滤膜过滤,防止发生检测和泵送问题。
一定要在开始使用系统以前检查有否微生物生长,否则你的柱子会堵塞,柱压会升高到无法接受的水平。
4.流量和压力
柱内径(毫米)
流速
(ml/min)
最佳
最高
2.0
0.2
1.0
3.0
0.4
2.0
4.6
1.0
4.0
10.0
4.7
18.0
注意:
最高压力:
不锈钢柱:
4500psi;玻璃柱:
3000psi
增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。
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