生药学第三章生药的鉴定优质PPT.ppt
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又如以亚香棒虫草、香棒虫草、地蚕、人工伪制虫草及用白僵蚕冒充冬虫夏草等。
(80年代500600元/斤,现在十几万元以上),开展生药的品质评价,制订中药的鉴别依据和质量标准十分重要;
对来源单一的常用中药及其类同品以及进口生药,也都需要进行鉴定研究,制订可供鉴别、检验的依据和标准。
4)开展生药的鉴定研究,在发掘新药源和寻找进口生药的代用品方面,也有重要意义。
如血竭,系棕榈科植物麒麟竭果实当中渗出的树脂,产于印度尼西亚等地,进口生药。
经考查发现,剑叶龙血树在我国云南应用迄今已有500余年历史,经鉴定研究以“广西血竭”为名入药。
(*),第二节生药鉴定的一般程序和方法,一、生药鉴定的取样:
药材的取样是指选取供鉴定用的药材样品。
应注意有代表性,并有足够数量。
取样的代表性直接影响到检定结果的正确性.,药材取样法(程序)
(1)详细记录药材的品名、产地、批号、规格、等级、包件式样等,注意是否与标签相一致。
(2)检验包件的完整性和清洁程度,注意有无水迹、霉变或其他物质污染等异常情况,作详细记录。
凡有异常情况的包件,应单独检验。
(3)注意取样的代表性:
固体:
包件不同地方取样(三点取样法、五点取样法)。
液体:
混匀或顶、中、底取样(不易混匀者)。
贵重药材:
逐件抽样。
不足五件,逐件取样,599件,取样5件。
1001000件,按5%取样。
超过1000件的部分按1%取样。
(4)取样量:
每一包件的取样量:
一般药材100500克,粉末状药材2550克,贵重药材510克.(三份检验的量:
供实验分析、复查、留样保存用)。
要足够鉴定应用的需要,还要供复核及留样保存使用。
保存期至少1年。
二、生药的常规检查,1.杂质检查生药中杂质的存在,直接影响药材的纯度。
包括两类:
1、来源与规定相同的物质:
其性状或部位与规定不符。
2、来源与规定不同的物质:
无机杂质,如沙石、泥土等。
2水分含量测定一般对容易吸湿发霉变质、酸败的生药应规定水分检查。
常用的测定方法(*)(知道适用范围就行)烘干法甲苯法减压干燥法气相色谱法(05药典四法),第一法(烘干法),本法适用于不含或少含挥发性成分的药品。
取供试品25g,平铺于干燥至恒重的扁形称瓶中,厚度不超过5mm,疏松供试品不超过10mm,精密称定,打开瓶盖在100105干燥5小时,将瓶盖盖好,移置干燥器中,冷却30分钟,精密称定重量,再在上述温度干燥1小时,冷却,称重,至连续两次称重的差异不超过5mg为止。
根据减失的重量,计算供试品中含水量(%)。
第二法(甲苯法),本法适用于含挥发性成分的药品。
仪器装置如图。
A为500ml的短颈圆底烧瓶;
B为水分测定管;
C为直形冷凝管,外管长40cm。
使用前,全部仪器应清洁,并置烘箱中烘干。
(以下略)测定法取供试品适量(约相当于含水量24ml),精密称定,置A瓶中,加甲苯约200ml,必要时加入玻璃珠数粒,将仪器各部分连接,自冷凝管顶端加入甲苯,至充满B管的狭细部分。
将A瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热,待甲苯开始沸腾时,调节温度,使每秒钟馏出2滴。
待水分完全馏出,即测定管刻度部分的水量不再增加时,将冷凝管内部先用甲苯冲洗,再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜的方法,将管壁上附着的甲苯推下,继续蒸馏5分钟,放冷至室温,拆卸装置,如有水黏附在B管的管壁上,可用蘸甲苯的铜丝推下,放置,使水分与甲苯完全分离(可加亚甲蓝粉末少量,使水染成蓝色,以便分离观察)。
检读水量,并计算供试品中的含水量(%)。
【附注】用化学纯甲苯直接测定,必要时甲苯可先加水少量,充分振摇后放置,将水层分离弃去,经蒸馏后使用。
水分测定装置,补充气相色谱法.P129(南药),3灰分含量测定生药的灰分测定分为总灰分测定及酸不溶性灰分测定。
(05药典)总灰分:
指生药本身经过灰化后遗留的不挥发性的无机成分以及生药表面附着的不挥发性无机成分总和。
(*)酸不溶灰分:
指总灰分中加10盐酸处理,得到不溶于10盐酸的灰分。
(*),规定生药的总灰分限度,对于保证生药的品质和纯净程度,有一定的意义。
常用的测定方法总灰分测定法酸不溶灰分测定法(表示外来杂质),【总灰分测定法】测定用的供试品须粉碎,使能通过二号筛,混合均匀后,取供试品23g(如须测定酸不溶性灰分,可取供试品35g),置炽灼至恒重的坩埚中,称定重量(准确至0.01g),缓缓炽热,注意避免燃烧,至完全炭化时,逐渐升高温度至500600,使完全灰化并至恒重。
根据残渣重量,计算供试品中总灰分的含量(%)。
如供试品不易灰化,可将坩埚放冷,加热水或10硝酸铵溶液2ml,使残渣湿润,然后置水浴上蒸干,残渣照前法炽灼,至坩埚内容物完全灰化。
【酸不溶性灰分测定法】取上项所得的灰分,在坩锅中注意加入稀盐酸约10ml,用表面皿覆盖坩锅,置水浴上加热10分钟,表面皿用热水5ml冲洗,洗液并入坩埚中,用无灰滤纸滤过,坩埚内的残渣用水洗于滤纸上,并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。
滤渣连同滤纸移至同一坩埚中,干燥,炽灼至恒重。
根据残渣重量,计算供试品中酸不溶性灰分的含量(%)。
4、浸出物的测定:
某些生药有效成分尚不明确,无法进行含量测定,可测定其浸出物量。
但须具有针对性和控制质量的意义。
选择溶剂,可结合用药习惯、生药质地等,选择适宜的溶剂,或采用“鉴别”项中提取成分的溶剂。
一般要用不同溶剂进行测试,例如某生药含水溶性及脂溶性有效成分,可用水、甲醇或乙醚作溶剂以测浸出物量,经试验比较,确定较为适宜的浸出物。
供试品需粉碎,过二号筛,并混合均匀。
常用的测定方法(药典三法)水溶性浸出物的测定冷浸法热浸法醇溶性浸出物的测定醚溶性浸出物的测定,【水溶性浸出物测定法】测定用的供试品须粉碎,使能通过二号筛,并混合均匀。
冷浸法取供试品约4g,称定重量,置250300ml的锥形瓶中,精密加入水100ml,塞紧,冷浸,前6小时内时时振摇,再静置18小时,用干燥滤器迅速滤过,精密量取滤液20ml,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于105干燥3小时,移置干燥器中,冷却30分钟,迅速精密称定重量,除另有规定外,以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量(%)。
热浸法取供试品约24g,称定重量,置100250ml的锥形瓶中,精密加入水50100ml,塞紧,称定重量,静置1小时后,连接回流冷凝管,加热至沸腾,并保持微沸1小时。
放冷后,取下锥形瓶,密塞,称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,用干燥滤器滤过。
精密量取滤液25ml,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于105干燥3小时,移置干燥器中,冷却30分钟,迅速精密称定重量,除另有规定外,以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量(%)。
【醇溶性浸出物测定法】照水溶性浸出物测定法测定(热浸法须在水浴上加热)。
以各该品种项下规定浓度的乙醇或95%的乙醇代替水为溶剂(挥发性醚浸出物测定P130),5挥发油测定适用于含挥发油的生药。
测定用的供试品,一般须粉碎使通过二号至三号筛,并混合均匀,在特制的挥发油测定器中进行测定。
常用的测定方法甲法:
适用于测定相对密度在1.0以下的挥发油。
乙法:
适用于测定相对密度在10以上的挥发油。
挥发油的测定挥发油是中药中一类有效成分。
可利用其能与水蒸气一起蒸馏出来的性质,在特制的蒸馏器内测定其含量。
(1)挥发油的常量测定有以下二种方法:
甲法本法适用于测定比重在1.0以下的挥发油。
例如,莪术中所含挥发油的含量测定:
仪器装置如图35。
A为1000ml的硬质圆底烧瓶,上接挥发油测定器B,B的上端连接回流冷凝管C。
以上各部分均用玻璃磨口连接。
测定器B应具有0.1ml的刻度。
全部仪器应充分洗净,并检查接合部分是否严密,以防止油分逸出。
乙法本法适用于测定比重在1.0以上的挥发油。
仪器装置和取供试样量如甲法。
甲法:
本法适用于测定相对密度在1.0以下的挥发油。
取供试品适量(约相当于含挥发油0.51.0ml),称定重量(准确至0.01g),置烧瓶中,加水300500ml(或适量)与玻璃珠数粒,振摇混合后,连接挥发油测定器与回流冷凝管。
自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分,并溢流入烧瓶时为止。
置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热至沸,并保持微沸约5小时,至测定器中油量不再增加,停止加热,放置片刻,开启测定器下端的活塞,将水缓缓放出,至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止。
放置1小时以上,再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐,读取挥发油量,并计算供试品中挥发油的含量(%)。
乙法:
本法适用于测定相对密度在1.0以上的挥发油。
取水约300ml与玻璃珠数粒,置烧瓶中,连接挥发油测定器。
自测定器上端添加水使充满刻度部分,并溢流入烧瓶中为止,再用移液管加入二甲苯lml。
然后连接回流冷凝管。
将烧瓶内容物加热至沸腾,并继续蒸馏,其速度以保持冷凝管的中部呈冷却状态为度。
30分钟后,停止加热,放置15分钟以上。
读取二甲苯的容积。
然后照甲法自“取供试品适量”起,依法操作。
读取已溶有挥发油的二甲苯容积,从中减去二甲苯量,即为挥发油量,再换算成供试样中含有挥发油的百分数。
三、生药的限量检查,主要指有害物质的控制:
指农药残留过量和重金属含量超标。
生药中有害物质的来源主要有:
生境的污染(土壤、地质背景等);
栽培和仓储过程中施用农药或驱虫剂;
加工炮制过程中辅料的污染;
包装材料的有害物质污染。
植物本身的遗传特性和对该类元素的富集能力有关.,
(1)砷盐检查砷盐的检查用古蔡氏法二乙基硫代氨基甲酸银法二法中以标准砷溶液2ml(2微克的砷)所产生的色为最适宜。
砷盐限度一般不得过百万分之十。
(*),()重金属重金属系指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质,包括铅、汞、镉等。
(*)检查时以铅为代表,采用目视法观察比(加入硫代乙酰胺或硫化钠后,呈现的黄褐色)(重金属限度一般不超过百万分之二十)重金属测定以铅计算为20g(小于10g,大于3mg不易区别)P99(05药典生药或提取物重金属或有害元素的限量)(原子吸收分光光度法的标准曲线法),中国药典2005年版选用气相色谱法测定有机氯类农药残留量。
生药含有机氯农药残留量(主要三种)六六六(总BHC)不得过百万分之零点二;
滴滴涕(总DDT)不得过百万分之零点二;
五氧硝基苯(PCNB)不得过百万分之零点一。
(05药典生药农残留限量即课本黄芪和甘草),农残种类(GC外标法),有机氯类(P100)对照品:
六六六(四种异构体).滴滴涕(四种异构体及五氯硝基苯(3种)有机磷类:
对照品:
对硫磷,甲基对硫磷,乐果,氧化乐果,甲胺磷,久效磷,二嗪农,乙硫磷,马拉硫磷,杀扑磷,敌敌畏,乙酰甲胺磷.(12种)拟除种菊类:
氯氰菊酯,氰戊菊酯及溴氰菊酯.(3种),.其他有害物质的检查有的生药由于寄生于有毒植物而产生有害物质,亦须加以检查。
例如桑寄生需作强心苷检查,是因为寄生于夹竹桃树上的桑寄生会吸入夹竹桃树中的强心苷,而具毒性。
印度防己毒素的检杳控制马桑寄生的混入。
生药中内源性有害物质,1.肝毒性成分(P91)里西定生物碱(heptotoxicpyrrolizidinealkaloids,HPAs)是目前已知的最重要的植物性肝毒成分.如野百合碱,千里光碱.2.肾毒性成分(P92)含马兜铃酸(arisolochic,AA)的中草药可引起肾损害.(马兜铃,青木香,天仙藤,关木通,寻骨风,广防己和朱砂莲),许多生药在贮藏过程中易霉变而产生黄曲霉素(Aflatoxin,AF),其中有:
牛膝、天冬、玉竹、黄精、当归、甘草、百部、白术、天花粉、葛根、山药、知母、麦冬等。
现代科学研究结果证实有14种霉菌素有致癌作用,而黄曲霉素致癌作用强度位居前列。
有必要对生药中的黄曲霉素进行限量控制,以确保用药的安全。
除黄曲霉素外,还要控制二氧化硫。
二者限量目前05药典中没有明确规定,第三节原植物鉴定,、观察植物形态对具有较完整植物的标本,应注意其根、茎、叶、花、果实等器官的观察,对繁殖器官(花、果、孢子囊、子实体等)应特别仔细,可借助放大镜或解剖显微镜,观察微小的特征,如毛茸、腺点的形态构造。
同时注意对药用部位进行观察。
二、核对文献,根据检品的形态特征及其产地、别名、效用等线索,可查阅中国药典、相关的中草药书籍和图鉴,加以分析对照。
(首先查植物分类学方面的著作其次是中药鉴定方面的著作),重要参考文献、著作:
中国植物志、中国高等植物图鉴、新华本草纲要、中国中药资源丛书;
(分类学著作)中药志、中华本草、中国药材学、常用中药材品种整理和质量研究、全国中草药汇编、中药鉴定学等。
(中药鉴定学著作)原始文献(第一次发现该种首次命名的文献),三、核对标本,当确定未知种是什么科属时,可以到有关植物标本馆核对已定学名的该科属标本。
(植物所)要得到正确的鉴定,必须要求标本馆中已定学名的标本正确可靠。
在核对标本时,要注意同种植物在不同生长期的形态差异,需要参考更多一些的标本和文献资料,才能使鉴定的学名准确。
第四节性状鉴定(*),性状鉴定(macroscopicalidentifi-cation)即通过眼观、手摸、鼻闻、口尝、水试、火试等十分简便的鉴定方法,是以性状,包括形态、大小、色泽、表面、质地、断面、气味等特征为依据对生药进行鉴别的方法。
故又称传统经验鉴别。
(*),
(一)、形状(shape,form),生药的形状与药用部位有关。
如根类生药有圆柱形、圆锥形、纺锤形等;
皮类生药有卷筒状、板片状等;
种子类生药有圆球形、扁圆形等。
老药工们常以简单、生动的语言加以概括,易懂易记:
如防风的根茎部分称“蚯蚓头”“凤眼圈”;
山参的主要特征被形象地描述为“芦长碗密枣核艼,紧皮细纹珍珠须”;
(芦头:
药材顶端有短小的根茎习称“芦头”。
芦碗:
药材芦头上凹陷的茎痕习称“芦碗”艼:
人参上的细长横伸的不定根习称“艼”。
珍珠点:
全须生晒参须根具细小的疣状突起习称“珍珠点”。
)海马的外形为“马头蛇尾瓦楞身”。
防风根头部环纹:
防风正品药材,叶鞘残基和断面,克氏海马,三斑海马:
生晒山参:
在观察外形时,对皱缩的商品生药如叶和花类,鉴定时须先用热水浸泡,展平后观察;
在观察某些果实种子类生药时,亦可用热水浸软,以便剥去果皮或种皮,观察内部特征。
(二)、大小(size),生药的大小指长短、粗细、厚薄。
有些很小的种子类生药,如葶苈子、车前子、菟丝子等,应在放大镜下测量。
表示生药的大小,一般有一定的幅度。
中国药典规定的大小幅度,系指生药的常见大小(*)。
(三)、色泽(color),各种生药的颜色是不相同的,而同一生药的色泽变化与生药质量有关。
玄参要黑,丹参要紫,茜草要红,黄连要黄。
如加工条件变化、贮藏时间不同或灭菌不当等,就会改变生药的固有色泽,甚至引起内在质量的变化。
黄芩苷,酶,水解,黄芩素葡萄糖醛酸,具3个邻位酚羟基,氧化,醌类(绿色),例如:
黄芩(表面棕黄色或深黄色,要杀酶保苷)(*),在观察生药的色泽时,生药应干燥,并应在日光下观察。
色泽的描述包括表面和断面色泽的内容。
一般把质量好的色泽放在前面,二种色调组成描写的应以后一种色为主,如黄棕色,即以棕色为主。
(*),(四)、表面特征(surfacecharacter),生药表面特征:
有光滑、粗糙、皱纹、皮孔、毛茸等。
双子叶植物的根类生药顶部,有的带有根茎;
单子叶植物根茎,有的具膜质鳞叶;
蕨类植物的根茎,常带有叶柄残基和鳞片。
(绵马贯众),例如:
白花前胡(浙江的)头部有叶鞘残存的纤维毛状物,是区别紫花前胡根的重要特征;
植物香橼未成熟果实或幼果作枳壳或枳实时,果顶俗称“金钱环”,这一特征是鉴别该种的重要依据。
白花前胡:
紫花前胡:
枳实(甜橙),(五)、质地(texture),生药质地可分为:
软硬、坚韧、疏松、致密、黏性或粉性等。
形容生药质地的术语很多:
如质轻而松、断面多裂隙,谓之“松泡”,如南沙参;
(*)生药富含淀粉,折断时有粉尘散落,谓之“粉性”,如山药;
葛根;
质地柔软,含油而润泽,谓之“油润”,如当归;
质地坚硬,断面半透明状或有光泽,谓之“角质”,如郁金,红参等。
(六)、断面(fracture),断面:
一是指生药自然折断面,二是指用刀横切(或削)成的断面。
对于根及根茎、茎和皮类生药的鉴别折断面观察很重要。
如茅苍术易折断,断面放置能“起霜”(析出白毛状结晶),白术不易折断,断面放置不“起霜”;
就可区分开二者。
甘草折断时有粉尘散落(淀粉);
杜仲折断时有胶丝相连;
黄柏折断面,呈纤维性;
苦楝皮的折断面,裂片状分层;
厚朴折断面可见亮星。
生药断面特征(cutsurfacecharacter)非常重要,可通过观察皮部与木部的比例、维管束的排列方式、射线的分布、油点的多少等特征区别易混品生药。
对于横切面特征的描述,经验鉴别有很多术语,如:
黄芪有“菊花心”;
粉防已有“车轮纹”;
茅苍术有“朱砂点”;
大黄根茎可见“星点”;
何首乌有“云锦纹”;
商陆有“罗盘纹”等。
甘草断面(菊花心),粉防己断面(车轮纹),何首乌横切面(根、云锦纹),大黄性状,(七)、气(odour),有些生药有特殊的香气或臭气,这是由于生药中含有挥发性物质的缘故,也成为鉴别该生药主要依据之一。
如檀香、阿魏、麝香、肉桂、牡丹皮等。
(八)、味(taste),味是鉴别生药时口尝的实际滋味。
生药的味与其含有的成分有关,每种生药的味感是比较固定的,生药的味感也是衡量生药品质的标准之一。
如乌梅、木瓜、山楂均以味酸为好;
黄连、黄柏以味越苦越好;
甘草、党参以味甜为好。
(九)、水试,水试法是利用生药在水中或遇水发生沉浮、溶解、颜色变化、透明度、膨胀性、旋转性、粘性、酸碱变化等特殊现象进行鉴别生药的方法。
如西红花加水浸泡后,水液染成金黄色(伪品没有);
秦皮水浸,浸出液在日光下显碧蓝色荧光;
(香豆素成分)葶苈子、车前子等加水浸泡,则种子变黏滑,且体积膨胀;
(伪品无)熊胆粉末投入清水杯中,即在水面旋转并呈黄色线状下沉而不扩散。
(十)、火试,有些生药用火烧之,能产生特殊的气味、颜色、烟雾、闪光和响声等现象,作为鉴别手段之一。
如降香微有香气,点燃则香气浓烈,有油流出,烧后留有白灰;
麝香少许用火烧时有轻微爆鸣声,起油点如珠,似烧毛发但无臭气,灰为白色;
(不现实了太贵)海金沙易点燃而产生爆鸣声及闪光,而松花粉及蒲黄无此现象,可资鉴别。
第五节生药的显微鉴定,显微鉴定(microscopicalidenifi-ction)是利用显微镜来观察生药的组织构造、细胞形状以及内含物,描述显微特征,制定显微鉴别依据,用以鉴定生药品种和质量的重要手段之一。
一、显微鉴定的常用方法,显微鉴定组织鉴定:
观察药材的切片或磨片,鉴别其组织特征,适合于完整的药材或粉末特征相似的同属药材的鉴别;
粉末鉴定:
观察药材的粉末制片或解离片鉴别其细胞分子及内含物的特征,适合于破碎、粉末状药材或中成药的鉴别。
鉴定者:
需具有植(动)物解剖的基本知识,掌握制片的基本技术。
鉴定时:
根据观察的对象和目的,选择具有代表性的药材,制备不同的显微制片,依法进行鉴别。
(质检部门),植物性生药,根、根茎、茎藤、皮、叶等类,制作横切片观察,必要时制纵切片;
(一般横切片就可)果实、种子类须作横切片及纵切片观察;
木类须观察横切、径向纵切及切向纵切三个面。
鉴定叶、花、果实、种子、全草等类生药,可取叶片、萼片、花冠、果皮、种皮制表面片,以观察各部位的表面(皮)特征。
可将生药作粉末片进行观察。
可制解离组织片,以观察某些细胞组织,如纤维、石细胞、导管等。
(用碱酸来解离)对于中成药,可直接取目的物,选用不同试液制片,观察粉末的具有鉴别意义的组织、细胞及细胞后含物显微特征。
切片类型(*略),横切片或纵切片切片方法徒手切片:
1020m,最为简便、快速,较为常用。
石蜡切片:
便于教学用。
滑走切片:
有专用机器切制。
冰冻切片:
宜于科研,不利于教学,无法染色,解离组织片:
可用氢氧化钾法,使细胞间质溶解,细胞分离后观察目的物。
表面片:
叶、花、果实、种皮等多用,可观察各部位的表皮特征。
粉末片是将药材粉碎后,根据要求不同而采用不同试剂处理后封片观察,常用稀甘油直接封片,用稀碘液直接封片、经水合氯醛透化后封片。
水合氯醛透化片水合氯醛是一种常用透化剂,它能将粉末中的淀粉粒、蛋白质、挥发油、树脂等物质溶解,使观察的粉末更为清晰易辨。
另外水合氯醛还能很快透入组织中,使干燥的细胞组织膨胀。
取少量粉末放在载玻片中间,然后滴加23滴水合氯醛液,轻轻搅匀后于酒精灯上微微加热将要煮沸,注意不要使火太急,以免烧干。
等载玻片略为冷却后,再滴加1滴稀甘油,以免水合氯醛干燥后析出结晶,影响观察,然后加上盖玻片,用吸水纸吸去多余的液体,最后将其置于显微镜下观察。
二、显微鉴定要点(*),
(一)根类生药(*)1、根类生药的组织构造双子叶植物:
多为次生构造,表层为木栓组织;
皮层一般已不存在;
栓内层发达呈皮层样,称次生皮层;
韧皮部较发达;
形成层环多明显;
木质部由导管、管胞、木纤维、木薄璧细胞及木射线组成;
中央大多无髓。
木栓层,韧皮部,射线,纤维束,形成层,木质部,导管,木纤维,甘草根横切面简图,少数为初生构造,皮层宽,中柱小,木质部束及韧皮部束数目少,相间排列,初生木质部呈星芒状,一般无髓。
双子叶植物有些有异常构造(三生构造):
何首乌根的形成层环外方有数个复合维管束;
(云锦纹)牛膝根有数轮
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- 生药 第三 鉴定