食品微生物实验报告Word文档格式.docx
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实验材料与方法
配制培养基所需器材
实验设备:
高压蒸汽灭菌器。
实验器材:
500ml三角烧瓶、蓝盖瓶、5ml刻度吸管、培养基、天平、砝码、
称量纸、药勺、500ml、100ml量筒、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、铁丝筐、平皿、剪刀等。
培养基等集中放讲台前高压桶内,送到洗刷室统一高压灭菌条件及本卷须知
高压灭菌条件:
121.3℃,15min。
含糖培养基113℃,15min。
倒平板电炉加热灭菌好的培养基翻开平皿包装倒平板(10块)本卷须知:
空气环境无菌(应在酒精灯火焰周围无菌区)。
a.在酒精灯火焰处,倾斜翻开瓶口。
b.瓶口要过火焰。
c.左手掀开平皿小口。
d.倾注满皿底再多一点,约10ml(7cm直径平皿)。
e.推放一边要轻缓,不能晃起琼脂挂壁,易在培养过程中污染杂菌。
f.完全凝固再翻转平板放塑料筐内,4℃备用。
(1)如何证明培养基灭菌是否彻底?
把灭菌后的培养基按灭菌锅内的不同位置,每处抽取数管(瓶),标上记号,置25℃~30℃培养一周左右进展检查。
如果培养基没有什么变化,说明灭菌效果良好;
如果某一位置的培养基出现了杂菌菌落,可能是摆放的太紧,导致蒸汽不畅,或锅的构造不合理等原因所致,应根据上述情况进展改进;
如果大部分或全部菌种瓶都出现杂菌,说明灭菌温度或灭菌时间不够,应提高压力或延长灭菌时间。
经过几次检验都证明能彻底灭菌后,以后按同样条件灭菌的那么不必进展检查。
经过几次检验都证明能彻底灭菌后,以后按同样条件灭菌的那么不必进展检查。
(2)为什么说消毒与灭菌是微生物学和临床医学必不可少的根本知识?
由于病原生物广泛存在于自然界,可通过不同途径和媒介进入人体,引起感染或造成疾病流行。
因此,杀灭或去除存在于体外传播媒介上的病原生物,对于切断传播途径、预防和控制其感染具有重要意义。
自古以来,人们就利用煮沸、火烧、日晒等方法杀灭或去除微生物,到达预防疾病的目的。
实际上,除了在临床医疗实践中需要防止微生物的污染或感染外,在微生物学实验室、食物保存、饮水净化、药品与生物制品生产等过程中都需要防止微生物的污染。
接种是微生物实验及科学研究中一项根本操作技术。
根据实验目的和要求,
选择适宜的接种工具与接种方法,接种工具有接种环、接种针、接种铲、接种钩、吸管、滴管、棉签等。
常用接种方法有:
斜面接种,液体接种,穿刺接种,平板接种和固体接种。
接种的关键是无菌操作。
无菌操作的原那么:
在酒精灯火焰旁进展,所有器皿均须严格消毒,培养基应事先做无菌试验,
接种工具使用前后须经火焰烧灼灭菌,棉塞不能乱放,始终夹在手指中。
在培养四大类微生物时应注意选择适宜的培养条件。
多数细菌为专性需氧菌与兼性需氧菌,少数为厌氧菌。
多数食品腐败菌和工业用菌种,以及人和动物病原菌的最适生长温度为37℃,并且在近中性(PH6.5~7.5)条件下生长良好。
多数放线菌为好氧菌,少数为厌氧菌,最适生长温度为28~30℃,多数适宜在偏碱性环境中生长(PH7.5~8.5)。
(1)实验材料:
实验设备:
温箱。
毛霉、曲霉、青霉、根霉、啤酒酵母、白假丝酵母、新生隐球酵母菌、细黄链霉菌、PDA平板、高盐察氏平板、高氏合成I号平板、塑料筐、20%甘油水溶液、镊子、接种铲、无菌盖玻片、无菌滤纸、无菌载玻片、石棉网、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、铁丝筐等。
(2)实验方法:
平板接种:
毛霉→PDA平板(点植法)
啤酒酵母→PDA平板(五区别离划线法)青霉、曲霉→PDA平板(连续划线法)
1、取灭菌后小室平皿。
2、取无菌PDA琼脂薄层平板,用镊子夹住盖玻片切割成0.5~1.0cm2的琼脂块,并将其移至培养小室中的载玻片上,制作过程注意无菌。
3、用接种环取少量霉菌的孢子接种于培养基四周,用无菌镊子
将盖玻片覆盖在琼脂块上,并(转载于:
l灭菌的20%甘油(用于保持湿度),盖上皿盖,标记,置28~30℃培养3~5d
1.取粮食样品20g,放入无菌烧杯,加无菌水洗涤,
反复10次,弃去水后,将粮粒倒于平皿内备用2.镊子取粮食种入PDA琼脂内,每皿可接种5-10粒。
放线菌的接种:
取细黄链霉菌划线法接种,在接种的划线处,无
菌操作斜插入盖玻片数张。
1.空气环境无菌(应在酒精灯火焰周围无菌区)
2.在酒精灯火焰处,倾斜翻开瓶口。
3.接种环使用前,直接在酒精灯上烧灼灭菌,把环和金属丝烧红即可。
4.接种环使用后,先在火焰周围把环上标本烤干,再烧灼灭菌,以免标本汽化,爆烈四溅,污染环境。
5.金属杆快速通过火焰2-3次,杀灭外表微生物
1、粮食中产毒真菌的种类及产生毒素?
青霉、毛霉、曲霉、根霉、酵母、白念、细黄链霉菌(放线菌)青霉素、丝生毛霉素、黄曲霉素、根霉素、白念菌素。
细黄链菌素
2、常用霉菌培养基有哪些?
马铃薯蔗糖培养基
豆芽汁葡萄糖(或蔗糖)琼脂培养基察氏培养基
3、霉菌的接种方法有何不同?
为什么?
(1)连续划线法(青霉、曲霉)
青霉与曲霉为局限性生长的霉菌。
应采用连续划线接种法接种。
(2)点植法(根霉、毛霉)
根霉与毛霉生长区域比较大,应采用点植法。
(3)小室载玻片培养法(青霉、毛霉、根霉、曲霉)
实验三霉菌的制片与形态观察
实验目的:
学习并掌握观察霉菌形态的根本方法;
了解四类常见霉菌的根本形态特征。
了解放线菌的根本形态特征。
实验原理:
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3-10μm),常是细
菌菌体宽度的几倍至几十倍,因此,用低倍显微镜即可观察。
霉菌菌丝较粗大,细胞易收缩变形,且孢子容易飞散,所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液,用此染液做霉菌制片的特点是细胞不变形,具有杀菌、防腐作用,不易枯燥,能保持较长时间,能防止孢子四处飞散,棉兰具有一定的染色作用,染液的蓝色能增大反差。
(一)菌种:
在马铃薯琼脂平板上培养3—4天的青霉(Penicilliumsp.)、曲霉(Aspergillussp.)、毛霉(Mucorsp.)、根霉;
(二)器材及用具:
镊子、载玻片、盖玻片、显微镜。
(一)直接制片观察
于干净载玻片上,用镊子取霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝,然后小心地盖上盖玻
片。
置显微镜下先用低倍镜观察,必要时再换高倍镜
(二)小室培养观察
将载玻片直接放低倍镜下观察,再换高倍镜观察。
观察原那么:
毛霉:
用低倍镜观察孢子囊梗、囊轴等。
用高倍镜观察孢子囊孢子的形
状、大小。
根霉:
菌丝、孢子同毛霉,注意观察有无假根。
曲霉:
在高倍镜下观察菌丝有无隔膜,分生孢子着生位置,识别分生孢
子梗、顶囊、小梗和分生孢子。
青霉:
在高倍镜下观察菌丝有无隔膜,分生孢子梗、副枝、小梗和分生
孢子的形状等。
实验结果:
分析与讨论:
青霉和曲霉的形态有哪些异同?
青霉常分布在霉腐变质的水果、蔬菜、粮食和皮革等物体上,菌体直立菌丝的顶端长有扫帚状的构造,构造的每一个分枝上,生有成串的孢子,成熟的孢子呈青绿色,进展孢子生殖。
曲霉广泛分布在谷物、空气和土壤中,曲霉直立菌丝的顶端膨大成球状,球状构造的外表放射状地生有成串的孢子,孢子随曲霉种类的不同而呈黄色、橙色或黑色。
从皮肤取材查真菌如何检查?
1.目的
本方法规定了食品中菌落总数的测定方法。
本方法适合于各类食品中菌落总数的测定。
2.设备和材料
温箱:
36±
1℃。
恒温水浴:
46±
电炉吸管。
广口瓶或三角瓶:
容量为500ml玻璃珠:
直径约5mm。
平皿:
直径为90mm。
试管。
酒精灯。
试管架。
灭菌刀或剪子。
灭菌镊子。
3.测定步骤
检样稀释及培养
(1)以无菌操作,将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。
(2)用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管,混合均匀,做成1∶100的稀释液。
(3)另取1mL灭菌吸管,按上条操作顺序,做10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1mL火菌吸管。
(4)根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选择2~3个适宜稀释度,分别在做10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。
(5)稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于46±
1℃水浴保温)注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照
(6)待琼脂凝固后,翻转平板,置36±
1℃温箱内培养48±
2h。
菌落计数方法
做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏。
在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
菌落计数的报告
(1)平板菌落数的选择
选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,那么不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,假设片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界限),假设仅有一条链,可视为一个菌落;
如果有不同的几条链,那么应将每条链作为一个菌落计。
(2)稀释度的选择
应选择平均菌落数在30~300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之。
假设有两个稀释度,其生长的菌落数均在30~300之间,那么视两者之比方何来决定。
假设其比值小于或等于2,应报告其平均数;
假设大于2那么报告其中较小的数字。
假设所有稀释度的平均菌落数均大于300,那么应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
假设所有稀释度的平均菌落数均小于30,那么应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
假设所有稀释度均无菌落生长,那么以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
假设所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,其中一部分大于300或小于30时,那么以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
菌落数的报告
菌落数在100以内时,按其实有数报告,大于100时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算。
为了缩
4.出现的问题
①接种过程操作速度太慢,导致培养基与接种液无法充分混合。
②平板划线不规律。
③仪器使用不熟练,配合不够默契。
5.参照国标得出结论部分食品国标
短数字后面的零数,也可用10的指数来表示。
瓶(桶)装饮用水菌落总数限量是≤20CFUmL,/总大肠菌群(MPN/100mL或CFU/100mL)不得检出,耐热大肠菌群(MPN/100mL或CFU/100mL)不得检出,大肠埃希氏菌(MPN/100mL或CFU/100mL)不得检出常温液态奶≤10cfu/ml。
6.结论:
自来水(或啤酒)的培养基均未培养出菌落,表示自来水(或啤酒)中菌落总数合格。
土壤(或污水)的培养基中发现有大量菌落,那么自来水和啤酒中无超标现象,符合卫生标准。
学习金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等细菌涂片制作、枯燥和固定技术。
掌握细菌的简单染色和革兰氏染色技术
菌种
大肠杆菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,金黄色葡萄球菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。
溶液和试剂
草酸铵结晶紫染液,革兰氏碘液,95%乙醇,番红复染液等。
仪器和其他用品
酒精灯,载玻片,显微镜,双层瓶(内装香柏油和二甲苯),擦镜纸,接种环,试管架,镊子,载玻片夹子,滤纸,滴管和无菌生理盐水等。
1、细菌涂片制作
(1)涂片。
用接种环从试管培养液中取一环菌,于载玻片中央涂成薄层即可,或先滴一滴无菌水于载玻片中央,用接种环从斜面挑出少许
(2)枯燥。
涂片后自然枯燥,也可在酒精灯上略加热,使之迅速枯燥。
(3)固定。
固定的方法主要取决于勇什么染色方法,常用的有火焰固定法和化学固定法,火焰固定法的主要操作要领是:
手持载玻片一端,标本面向上,在灯的火焰外侧迅速来回移动3~4次,约3~4s.
2、革兰氏染色法
涂片→枯燥→草酸铵结晶紫(60s)→水洗→革兰氏碘液媒染(60s)→95%酒精脱色(30s)→水洗→番红(2min)→水洗→枯燥→镜检。
脱色是革兰氏染色关键的一步,可直接用95%酒精冲洗脱色,直到流下的酒精无明显的紫色为止。
然后,应立即用水冲洗,以防止脱色时间过长而影响最终染色结果。
另外,挑菌量、固定温度、染色时间也是影响结果的重要因素,只有通过反复实践,才能获得满意的结果。
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