镉对小鼠肝脏毒性作用的实验观察Word格式文档下载.doc
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在肝脏中,镉易与巯基结合从而诱导金属硫蛋白生成镉一硫蛋白【1】,因而金属硫蛋白对急性镉中毒有应急保护作用【2】,但若镉在短期内大量转运到肝脏,便导致肝内金属硫蛋白相对不足,不能与镉有效结合而引起肝功能障碍,这可能是镉引起血清AST、ALT活性及MDA升高的原因之一。
【3】
有研究发现,染镉后,从外观上看,小鼠肝脏体积肿大,肝叶肿胀明显,肝叶间有粘连、边缘变钝,颜色紫黑,质地变硬。
【3】镜下肝实质细胞的肿胀、嗜酸性变、淋巴细胞浸润及核固缩等肝细胞损伤改变。
本研究通过动物实验,了解镉对小鼠肝脏的毒性作用,并从氧化应激方面探讨其作用机制。
二、
实验内容与方法
(1)、实验动物:
健康成年清洁级昆明种小鼠40只,雌雄各半。
(2)、主要试剂与仪器:
l
仪器:
7230分光光度计;
显徽镜;
分析天平;
SIGMA2K15型冷冻高速离心机;
试剂:
氯化镉
(CdCI2,A.R.)、HNO3-HClO4、蒸馏水、生理盐水
(3)、动物分组与染毒:
体重
18—25g的健康成年清洁级昆明种小鼠随机区组分为4组,每组10只,雌雄各办临用前以生理盐水配制CdCI2溶液,CdCI2染毒剂量分别为0.5、
1.0、
2.0mg/kg,染毒组小鼠皮下注射氯化镉溶液(10ml/kg体重),对照组注射生理盐水
(10ml/kg体重),连续染毒三天。
各组小鼠最后一次染毒24小时后摘眼球采血或断头取全血,4°
下用3000r/min离心10分钟制备血清。
小鼠处死后迅速摘出肝脏,生理盐水洗净、吸干、称重。
血清用于AST、ALT生化指标测定,取部分肝脏用于SOD、MDA测定。
三、
观察指标
1.
AST、ALT活性的测定:
AST、ALT检测试剂盒,比色法。
2.
MDA测定采用:
硫代巴比妥酸(TBA)法.以
1,1,3,3—四乙氧基丙烷
(TEP)为标准,单位以每克蛋白中与TBA反应物(TBARS)的μmol数表示。
蛋白质测定采用Lowry法,以小牛血清白蛋白为标准;
MDA检测试剂盒,比色法。
3.
SOD测定:
SOD检测试剂盒,比色法。
4.
肝重、体重、脏器系数:
称重法。
5.
肝匀浆蛋白质测定:
考马氏亮蓝比色法
四、
数据统计处理方法
各组检测指标计算均数、标准差,数据各组间比较采用F检验。
五、
预期实验结果
1、随着CdCI2浓度的增长,AST、ALT的活性升高,提示镉对肝脏组织的损伤作用。
2、MDA测定的反应物TBARS与CdCI2的染毒浓度呈正相关,且有效应剂量关系。
文献资料:
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刘杰.用转基因动物研究金属硫蛋白对镉毒性的左右[J].中华劳动卫生职业病杂志,1998,16
(1):
43.
【2】
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【3】
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【5】
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【6】
谢吉民,胡继岳,朱卫华.等.几种二六代氨基甲酸盐解镍致小鼠肝肾毒性作用比较[J].江苏医药.1998.24(增刊):
521.
【7】
李宏,张文昌,汪家梨,黄凌群.
镉的雌激素样作用及相关机制体内的实验.
[J]毒理学杂志.2005.19(3):
231.
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