微生物限度检查方法 薄膜过滤法 验证方案Word文件下载.docx
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生产部
生产车间
QC
QA
4.验证方案批准
批准人:
批准日期:
二、验证方案
1.验证目的和原理
验证目的
为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定,特制定本方案。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行,若因特殊原因确需要变更时,应报验证委员会批准。
原理
通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。
2.验证方法步骤
验证前的准备:
进行微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证前,所有的平皿和稀释剂都应该严格
按照相关的灭菌程序消毒,以确保其对试验的结果没有影响。
试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。
验证试验的操作计划:
用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验,通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。
试验结果可接受标准:
用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性,试验结果应显示3次独立的平行试验中,稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%,试验组回收率也不低于70%。
3.试验实施
试验前的准备
3.1.1主要仪器设备:
恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。
3.1.2操作环境:
操作间应该安装空气除菌过滤层装置。
环境洁净度不应低于10000级,局部洁净度为100级(或放置同等级净化工作台)。
操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压,不低于。
3.1.3试验样品:
批号:
批号:
3.1.4培养基:
培养基名称
培养基批号
配制日期
有效期至
改良马丁琼脂培养基
玫瑰红钠琼脂培养基
胆盐乳糖增菌培养基
营养琼脂培养基
3.1.5稀释液:
无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。
3.1.6验证用微生物名称及其编号
实验菌株的来源:
菌株名称
内控编号
大肠埃希菌CMCC(B)44102
Ec-
金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003
Sa-
枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501
Bs-
白色念珠球菌CMCC(F)98001
Ca-
黑曲霉CMCC(F)98003
An-
编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。
3.1.7器具:
无菌薄膜过滤器:
(孔径直径50mm)、无菌移液管(5ml)
4.验证方法
菌液的制备
将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30~35℃下培养18~24小时,将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中,在23~28℃下培养24~48小时。
将黑曲霉接种至改良马丁液体培养基中,在23~28℃下培养5~7天。
将上述培养物用%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌落数为50~100cfu的菌悬液。
实验方法
供试液的制备:
取样品10g(ml)加入无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,振摇使分散均匀□,用匀浆仪混匀□,置45℃水浴使胶囊壳溶化混匀□,制成1:
10均匀的供试液。
A样品试验组
取1:
10供试液(相当1g或1ml供试品)10ml,加至100ml稀释液中混匀,过滤并用稀释液冲洗滤膜3次,每次100ml,在最后一次冲洗液中加入50~100cfu菌液,滤完后,将接有细菌的滤膜取出,菌面向上(接触细菌和样品的面)贴于已凝固的培养基上。
大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌贴于营养琼脂培养基平皿上;
白色念珠菌、黑曲霉贴于玫瑰红钠琼脂培养基平皿上。
B菌液组
取上述制备菌液各1ml加至100ml稀释液中混匀,过滤并用稀释液冲洗滤膜3次,每次100ml,滤完后,将接有细菌的滤膜取出,菌面向上(接触细菌和样品的面)贴于已凝固的培养基上。
C供试品对照组
取上述1:
10供试液10ml,加至100ml稀释液中混匀,过滤并用稀释液冲洗滤膜3次,每次100ml,滤完后,将滤膜取出,接触样品的面向上贴于已凝固的培养基上。
D稀释剂对照组
取氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜3次,每次100ml,在最后一次冲洗液中加入50~100cfu菌液,滤完后,将接有细菌的滤膜取出,菌面向上贴于已凝固的培养基上。
培养
将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在30~35℃下培养48小时,将白色念珠菌、黑曲霉在23~28℃下培养72小时,点计菌落数。
5.试验结果
产品试验组微生物生长检查情况:
菌种名称
产品试验组计数结果(cfu/皿)
平均值
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
供试品对照组微生物生长检查情况:
供试品对照组计数结果(cfu/皿)
稀释剂对照组微生物生长检查情况:
稀释剂对照组计数结果(cfu/皿)
菌液组微生物生长检查情况:
菌液组计数结果(cfu/皿)
6.回收率计算
稀释剂对照组菌回收率
批号
菌落计数(cfu/皿)
回收率
稀释剂对照组
菌液组
表中:
回收率=稀释剂对照组的平均菌落数÷
菌液组的平均菌落数×
100%。
试验组菌回收率
试验组
供试品对照组
回收率=(试验组的平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数)÷
7.结论:
经过验证,大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率分别为%、%、%、%、%。
稀释剂回收率为%、%、%、%、%。
以上验证结果证明,本品采用上述方法进行微生物限度检查。
检验人:
复核人:
8.验证结果评价分析
质控部负责各项验证、试验结果记录,验证小组根据验证、试验结果进行评价,起草验证报告,报验证委员会。
验证委员会负责对验证结果进行综合评审,做出验证结论,发放验证证书。
对验证结果的评审应包括:
(1)验证试验是否有遗漏;
(2)验证实施过程中对验证方案有无修改,修改原因、依据以及是否经过批准;
(3)验证记录是否完整;
(4)验证试验结果是否符合标准要求,偏差及对偏差的说明是否合理,是否需进一步补充试验。
9.最终审批
验证报告由验证组长审核后,报验证总负责人批准,并签发验证证书。
验证报告
年月日至年月日,验证小组根据批准的微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证文件对微生物限度检查法进行了相关的一系列验证工作,达到了预期效果,滋将有关事项说明如下:
1、验证方案在实施过程中未做修改。
2、验证方案各项性能指标在验证中未作变动,误差在允许范围内。
3、验证过程中结果符合规定要求,记录完整属实。
4、验证结果符合设计要求和GMP原则要求,可以投入使用。
5、组分或检验条件改变时须重新验证。
以上情况,请验证委员会审批!
验证小组:
年月日
试验报告审批表
验证名称
微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证
编号
验证内容
审
阅
会
签
质
量
部
审核人:
验证委员会意见:
批准人:
验证证书
验证证书编号:
验证名称:
有效期:
上述方法已按验证方案进行验证,各项验证结果符合标准要求,批准按此方法进行本品的控制菌检查。
特发此证。
验证总负责人:
备注:
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