常用pH缓冲溶液的配制和pH值.docx
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常用pH缓冲溶液的配制和pH值
(一)溶液配制注意事项1.药品要有较好的质量试剂分为优级纯(保证试剂,Guaranteedreagent,G.R.)、分析试剂(Antalyticalreagent,A.R.)化学纯(Chemicalpure,C.P.)和实验试剂(Laboratoryreagent,L.R.)等等。
工业用的化学试剂,杂质较多,只在个别情况下应用,如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2.药品称量要精确。
3.配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水,比电阻值在50万欧姆以上,pH在~之间才可应用,在组织培养等特殊用途时应注意此项要求,配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
4.配好后的溶液,应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质),以防杂菌生长。
(二)(1/15)Mol/L磷酸缓冲液1.1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制:
称取磷酸二氢钾(KH2PO4,A.R.)9.08g,用蒸馏水溶解后,倾入1000ml容量瓶内,再稀释至刻度(1000ml)。
2.1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制:
称取无水磷酸氢二钠(Na2HPO4,.)9.47g(或者Na2HPO4·2H2O11.87g)用蒸馏水溶解后,放入1000ml容量瓶内,再加蒸馏水稀释至刻度(1000ml)。
3.按附表的比例,配制成不同pH值的缓冲溶液。
附表1磷酸盐缓冲液配制法(单位:
毫升)pH1/15Mol/LNa2HPO41/15Mol/LKH2PO4pH1/15Mol/LNa2HPO41/15Mol/LKH2PO4(三)LPB液附表2LPB液配制法pHLNa2HPO4(ml)LNaH2PO4(ml)Na2HPO4·2H2O分子量=L溶液含26.7g/L。
Na2HPO4·12H2O分子量=L溶液含53.7g/L。
NaH2PO4·H2O分子量=L溶液含20.7g/L。
NaH2PO4·2H2O分子量=L溶液含23.4g/L。
(四)LPB缓冲液附表3LPB缓冲液配制法pHMol/LNa2HPO4(ml)LNaH2PO4(ml)LNa2HPO4·2H2O溶液35.61g/LNa2HPO4·12H2O溶液含71.64g/LLNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/LNaH2PO4·2H2O溶液含31.21g/L欲配LPB缓冲液则在LPB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。
欲配制PBS液时,则在溶液中加%的NaCl溶液即可。
(五)无钙镁离子磷酸缓冲盐水(PBS)(LPH)NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO41.15g(如为Na2HPO4·12H2O,则为2.89g)KH2PO40.2g将上述试剂依次溶于1000ml去离子水中,完全溶解后,115℃高压灭菌10min~15min,存在4℃冰箱中备用。
此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。
(六)硼酸盐缓冲液(Boratesalinebuffer)文章来自:
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zfg1.硼酸(H3BO3)L硼酸:
硼酸12.37g加水至1000ml。
2.硼砂(Na2B4O7)L硼砂:
硼砂19.07g加水至1000ml。
附表4不同pH的L硼酸缓冲液配制法pHL硼砂(ml)L硼酸(ml)pHL硼砂(ml)L硼酸(ml)(七)巴比妥缓冲液1.离子强度L巴比妥缓冲液巴比妥钠47.6g蒸馏水3000mlHCl(NHCl=193ml浓HCl加1807ml蒸馏水)⑴将4.76g巴比妥钠溶于3000ml蒸馏水。
⑵加NHCl55ml。
⑶用HCl调节pH到,并加蒸馏水至4265ml。
2.L巴比妥缓冲液巴比妥1.84g巴比妥钠10.30g加蒸馏水至13.L巴比妥缓冲液巴比妥1.66g巴比妥钠12.76g加蒸馏水1(八)L醋酸盐缓冲液见表附表5附表5L醋酸盐缓冲液配制法pHLTris(ml)LHCl(ml)pHLTris(ml)LHCl(ml)23℃37℃23℃37℃25525252525252525252525252525(九)三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液(Tris—HCl缓冲液)不同pH,LL三羟甲基氨基甲烷加х,加水稀释至100ml(见下表)附表6Tris—HCl缓冲液配制法pHLTris(ml)(ml)pHLTris(ml)(ml)23℃37℃23℃37℃2552525252525252525252525252525252525三羟甲基氨基甲烷(Tris)分子量=L三羟甲基氨基甲烷:
Tris24.23g,加水至1000ml。
:
取,加水至1000ml。
(十)L碳酸盐缓冲液NaHCO33.70gNa2CO30.60g溶于蒸馏水中即得。
不用时塞紧瓶塞,以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。
最好小量配制。
(十一)甘油磷酸缓冲液1.配制磷酸缓冲液LNa2HPO4NaH2PO4混合即可2.9份甘油与1份磷酸缓冲液混合,即为甘油磷酸缓冲液。
用途:
用于免疫荧光试验。
(十二)Hank’s液1.贮存液NaCl80.00gKCl4.00gNa2HPO4·12H2O1.52gKH2PO40.60g葡萄糖4.00g%酚红液双馏水加至115℃高压灭菌15min,冰冻保存。
2.工作液贮存液1份双馏水9份115℃高压灭菌15min。
临用时用灭菌的%NaHCO3液调pH值至左右(溶液呈橙红色)。
(十三)萘(钠)氏试剂(Nessler’sreagent)配方1:
氯化汞6.0g碘化钾12.4g20%NaOH30ml加蒸馏水至100ml配方2:
碘化汞11.5g碘化钾8g蒸馏水50ml(完全溶解后)过滤,加20%NaOH50ml。
用途:
检测溶液中氨离子。
(十四)阿氏(Alsever’s)液葡萄糖2.05g柠檬酸钠0.80g氯化钠0.42g蒸馏水100ml溶解后,以10%柠檬酸调节pH至,过滤,分装,10磅10min灭菌,4℃保存。
(十五)青、链霉素混合液(简称S.P.液或双抗液)青霉素(40万U)5支链霉素(200万μg)1支分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中,混合后分装小瓶,置-10℃~-20℃冰箱保存备用(1万单位μg/ml)。
临用时,按1%的量加入营养液或其他溶液中,最后浓度是青霉素100U/ml,链霉素100ug/ml。
(十六)洗液(清洁液)配方1:
重铬酸钾150g蒸馏水300ml浓硫酸3000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中,使之自然溶解或水浴溶解,亦可在大坩埚中加热溶解,然后慢慢加入浓硫酸,边加边搅拌,见发热过剧则稍停,冷却后再继续加。
此为强洗液。
盛清洁液的容器要坚固,上加厚玻璃盖,操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套,以保安全。
洗液一旦变绿,表示铬酸已经还原,失去了氧化能力,不宜再用。
如将这样洗液加热,再加适量重铬酸钾,又可重新使用。
配方2:
浓硫酸50%蒸馏水50%重铬酸钾5%此为中等强度洗液。
配方3:
重铬酸钾100g蒸馏水1000ml加热溶解,冷却后缓慢加入工业硫酸100ml此液为弱洗液,为棕红色。
使用此液时,必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净,经自来水冲洗,沥干然后才能浸入,否则该洗液很快失效
缓冲溶液(英文:
buffersolution)是一种能在加入少量或和时大大减低变动的。
pH缓冲系统对维持的正常pH值和正常环境起到重要作用。
多数仅能在很窄的pH范围内进行活动,而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。
在生物体中有三种主要的pH缓冲体系,它们是缓冲系统、重碳酸盐缓冲系统以及缓冲系统。
每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和中是不同的。
在生化研究工作中,常常需要使用缓冲溶液来维持实验体系的。
研究工作的溶液体系pH值的变化往往直接影响到研究工作的成效。
如果“提取”实验体系的pH值变动或大幅度变动,就会下降甚至完全丧失。
所以配制缓冲溶液是一个不可或缺的关键步骤。
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常用作缓冲溶液
常用作缓冲溶液的酸类由及其共轭酸盐组合成的溶液具有缓冲作用。
实验室常用的缓冲系主要有、、、、、()等系统,生化实验或工作中要慎重地选择缓冲体系,因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值,而是缓冲液中的某种。
如、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的化学反应。
硼酸盐:
硼酸盐与许多化合物形成、如。
柠檬酸盐:
柠檬酸盐离子容易与钙结合,所以存在有钙离子的情况下不能使用。
磷酸盐:
在有些实验,它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物,重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。
而且它在以上时缓冲能力很小。
三羟甲基氨基甲烷:
它可以和重金属一起作用,但在有些系统中也起作用。
其主要缺点时。
这点往往被忽视,在室温pH是的Tris缓冲液,4℃时是,37℃时是,因此,4℃配制的缓冲液在37℃进行测量时,其氢离子浓度就增加了10倍。
在以下,其缓冲能力极为不理想。
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缓冲溶液组成
缓冲体系由
1、弱酸和它的盐(如HAc---NaAc)
2、弱碱和它的盐()
3、多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐(如NaH2PO4---Na2HPO4)
的水溶液组成。
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决定缓冲液pH值的因素
设缓冲系统的弱酸的为K(),平衡时弱酸的为[酸],弱酸盐的浓度为[盐],则由弱酸的电离平衡式可得下式:
[H+]=Ka{[弱酸]/[共轭碱]}
pH=pKa+log{[共轭碱]/[弱酸]}
这就是Henderson-Hasselbach等式。
如果[弱酸]=[共轭碱],
pH=
根据此式可得出下列几点结论:
1缓冲液的pH值与该酸的常数K及盐和酸的浓度有关。
弱酸的pH值衡定,但酸和盐的比例不同时,就会得到不同的pH值。
酸和盐浓度相等时,溶液的pH值与PK值相同。
2酸和盐浓度等比例增减时,溶液的pH值不便。
3酸和盐浓度相等时,缓冲液的缓冲效率为最高,比例相差越大,缓冲效率越低,缓冲液的一般有效缓冲范围为PK±1pH。
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缓冲溶液的配制
只要知道的PK值,和要的缓冲液的pH值(及要求的缓冲液总浓度),就能按计算[盐]和[酸]的量。
这个算法涉及对数换算,较麻烦,前人为减少后人的计算麻烦,已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了。
只要我们知道要配制的缓冲液的pH,经查表便可处所用缓冲剂的比例和用量。
例如配制浓度为0.1M磷酸缓冲液。
经查表知浓度为0.2M毫升,而0.2M毫升。
依此可出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M,而0.1MNa2HPO4需要毫升。
计算好后,按计算结果准确称好化学成分,放于中,加少量溶解,转移入50ml,加蒸馏水至刻度,摇匀,就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制,均按表格按比例混合,某些试剂,必须标定配成准确浓度才能进行,如醋酸、等。
另外,所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。
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