什么叫基因工程.ppt
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第二章第二章基因工程基因工程OutlineOutline一、一、DNADNA与遗传物质与遗传物质二、二、DNADNA与基因与基因三、三、基因工程技术及应用基因工程技术及应用1909年丹麦遗传学家约翰逊(W.Johansen)在精密遗传学原理一书中提出“基因”概念。
“基因型”(genotype)、“遗传学”(genetics)等名词由此派生而来的。
具有特定功能的DNA片段,这些片段有的编码蛋白质,有的编码rRNA、tRNA,有的则是与复制、转录调控有关的DNA序列。
二二.DNA.DNA与基因与基因基因基因(gene)基因是什么?
基因是什么?
基因是生命的密码基因是生命的密码基因记录和传递遗传信息基因记录和传递遗传信息基因决定生物体的生、长、病、基因决定生物体的生、长、病、老、死等一切生命现象老、死等一切生命现象基因是染色体上的一段基因是染色体上的一段DNADNA染色体染色体基因基因11基因基因22人体染色体DNA(人体基因组)总长度为30亿碱基对(bp)。
人体各组织的每一个细胞核内都带有相同的基因组,人体各组织的每一个细胞核内都带有相同的基因组,即即2323对染色体的全部对染色体的全部DNADNA。
也就是说携带了人体基因的全部遗传信息。
不同种细胞的形态与功能是通过细胞内基因表达的调控调控作用作用控制着基因表达成相应的蛋白质。
各种刺激对细胞内基因表达影响是通过信号传递的过程来完成.生物体内每种蛋白质都有其自身特定的遗传信息,它们被储存于染色体DNA链中。
携带某特定蛋携带某特定蛋白质完整遗传密码的那段白质完整遗传密码的那段DNADNA片段片段称为基因,人体总共有大约称为基因,人体总共有大约1010万万个基因,分别定位于个基因,分别定位于2323对染色体对染色体上。
上。
DNADNA双螺旋模型的发现,中心法则的提出,遗传密码的破双螺旋模型的发现,中心法则的提出,遗传密码的破译,基因表达调控及信号传递机制的研究,译,基因表达调控及信号传递机制的研究,表明基因设计的表明基因设计的时代已经来临。
时代已经来临。
DNA可以被特异地切切割割(利用限制性内切酶这种分子剪刀似的东西)、移动移动和拼接拼接,我们可以将一种生物体的将一种生物体的DNADNA拼接拼接到另一种生物体的到另一种生物体的DNADNA上上。
生物体内每种蛋白质都有其自身特定的遗传信息,它们被储存于染色体DNA链中。
DNADNA的的结构构11组成组成DNADNA分子的分子的基本单位基本单位是什么是什么?
每个基本单位由哪几部每个基本单位由哪几部分组成?
分组成?
22组成组成DNADNA的碱基有几种?
的碱基有几种?
分别是什么?
分别是什么?
33脱氧核苷酸有几种?
分脱氧核苷酸有几种?
分别是哪些?
别是哪些?
一一.DNA.DNA与遗传物质与遗传物质脱氧脱氧核糖核糖磷酸磷酸AGCT腺嘌呤腺嘌呤腺嘌呤腺嘌呤鸟嘌呤鸟嘌呤鸟嘌呤鸟嘌呤胞嘧啶胞嘧啶胞嘧啶胞嘧啶胸腺嘧啶胸腺嘧啶DNADNA的基本单位的基本单位脱氧核苷酸脱氧核苷酸含氮碱基含氮碱基碱基配对原则:
碱基配对原则:
AATTGGCC碱基碱基(base):
嘌呤碱,嘧啶碱嘌呤碱,嘧啶碱戊糖戊糖(ribose):
核糖,脱氧核糖核糖,脱氧核糖磷酸磷酸(phosphate)DNADNA的化学本质的化学本质核酸核酸单核苷酸单核苷酸单核苷酸单核苷酸核苷核苷核苷核苷磷酸磷酸磷酸磷酸戊糖戊糖戊糖戊糖含氮碱基含氮碱基含氮碱基含氮碱基嘌呤嘌呤嘌呤嘌呤鸟嘌呤鸟嘌呤鸟嘌呤鸟嘌呤GG腺嘌呤腺嘌呤腺嘌呤腺嘌呤AA嘧啶嘧啶嘧啶嘧啶胞嘧啶胞嘧啶胞嘧啶胞嘧啶CC尿嘧啶尿嘧啶尿嘧啶尿嘧啶UU胸腺嘧啶(胸腺嘧啶(胸腺嘧啶(胸腺嘧啶(TT)存于DNA中存于RNA中核糖核糖核糖核糖脱氧核糖脱氧核糖脱氧核糖脱氧核糖5端端3端端多个多个核苷酸核苷酸33,5,5磷酸二酯键磷酸二酯键核酸核酸AAOOCHCH22OOHHPPOOOOOO-OO5CCOOCHCH22PPOOOOOO-OO35TTOOCHCH22PPOOOOOO-OO35多个多个核苷酸核苷酸碱基配对及氢键形成碱基配对及氢键形成RNARNA的分的分子结构至于至于RNARNA的分子结构,就其化学组成上看,也是由的分子结构,就其化学组成上看,也是由四种核苷酸组成的多聚体。
它与四种核苷酸组成的多聚体。
它与DNADNA的不同,首先的不同,首先在于在于以以UU代替了代替了TT,其次是用,其次是用核糖代替了脱氧核糖核糖代替了脱氧核糖,此外,此外,还有一个重要的不同点,就是绝大部分还有一个重要的不同点,就是绝大部分RNARNA以单链形式存在,但可以折叠起来形成若干双链区以单链形式存在,但可以折叠起来形成若干双链区域。
域。
在这些区域内,凡互补的碱基对间可以形成氢在这些区域内,凡互补的碱基对间可以形成氢键键(图图)。
但有一些以但有一些以RNARNA为遗传物质的动物病毒含有双链为遗传物质的动物病毒含有双链RNRNAA。
RNA的分子结构的分子结构总结总结DNA分子结构的主要特性?
分子结构的主要特性?
相对的稳定性、多样性和特异性。
相对的稳定性、多样性和特异性。
DNADNA分子结构的相对稳定性,主要是由于外侧分子结构的相对稳定性,主要是由于外侧脱氧脱氧核糖与磷酸交替排列的顺序核糖与磷酸交替排列的顺序是稳定不变的。
是稳定不变的。
DNADNA分子结构的多样性,主要是由于内侧分子结构的多样性,主要是由于内侧碱基对碱基对的的排列顺序是千变万化的。
排列顺序是千变万化的。
DNADNA分子的特异性,是由于每个特定的分子的特异性,是由于每个特定的DNADNA分子都分子都具有其特定的具有其特定的碱基对碱基对排列顺序。
排列顺序。
WatsonandCrickWatsonandCrickproposedthattheproposedthatthetwopolynucleotidechainsinthetwopolynucleotidechainsinthedoublehelixassociatebydoublehelixassociatebyhydrogenhydrogenbondingbondingbetweenthenitrogenousbetweenthenitrogenousbases.bases.GcanhydrogenbondspecificallyGcanhydrogenbondspecificallyonlywithC,whileAcanbondonlywithC,whileAcanbondspecificallyonlywithT.ThesereactionsspecificallyonlywithT.Thesereactionsaredescribedasaredescribedasbasepairingbasepairing,andthe,andthepairedbases(GwithC,orAwithT)arepairedbases(GwithC,orAwithT)aresaidtobesaidtobecomplementarycomplementary.例、下图是例、下图是DNADNA分子结构模式图,用文字填出分子结构模式图,用文字填出111010的名称。
的名称。
PPPPACTG1234567891012345678910胞嘧啶(胞嘧啶(CC)腺嘌呤(腺嘌呤(AA)鸟嘌呤(鸟嘌呤(GG)胸腺嘧啶(胸腺嘧啶(TT)脱氧核糖脱氧核糖磷酸磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸碱基对碱基对氢键氢键一条脱氧核苷酸链的片段一条脱氧核苷酸链的片段DNADNA是遗传物质是遗传物质
(1)
(1)贮藏贮藏遗传信息的功能遗传信息的功能
(2)
(2)传递传递遗传信息的功能遗传信息的功能(3)(3)表达表达遗传信息的功能遗传信息的功能由此,克里克提出由此,克里克提出中心法则中心法则,确定遗传确定遗传信息由信息由DNADNA通过通过RNARNA流向蛋白质的普遍流向蛋白质的普遍规律。
规律。
生命通过繁殖而延续生命通过繁殖而延续,DNADNA是是生物遗传的基本物质。
生物遗传的基本物质。
漂亮的模特漂亮的模特遗传学家遗传学家“中心法中心法则”遗传信息储存在遗传信息储存在DNADNA中,中,DNADNA通过转录生成通过转录生成mRNAmRNA,mRNAmRNA再通过翻译生成蛋白再通过翻译生成蛋白质,从而完成遗传信息的表质,从而完成遗传信息的表达过程。
达过程。
克里克提出克里克提出中心法则中心法则,遗传信息由遗传信息由DNA通过通过RNA流向蛋白质流向蛋白质缬氨酸缬氨酸天冬酰胺天冬酰胺谷氨酰胺谷氨酰胺组氨酸组氨酸亮氨酸亮氨酸苯丙氨酸苯丙氨酸真核生物真核生物原核生物原核生物一个基因一个性状?
不一定。
例如肤色的控制至少有三个基因参与。
基因决定性状,环境还起不起作用?
在基因型确定的基础上,环境常常会影响表型。
产生黑色素的酶在较高温产生黑色素的酶在较高温度下失活,所以毛色在端点度下失活,所以毛色在端点位置体温较低处呈黑色位置体温较低处呈黑色基因与疾病基因与疾病基因与人类的疾病密切相关,遗传病是由于基因先天缺陷所致;肿瘤的发生涉及多种基因改变,包括癌基因激活或抑癌基因失活;高血压、糖尿病等多基因病也涉及到多种基因的改变;由病原体所致的传染病也和人体基因密切相关,存在易感人群和耐受人群;甚至致病原因与基因无关的外伤也在治疗和恢复过程中离不开基因.基因与个性基因与个性从血型和性格的相关性谈起.基因与人的性格密切相关,特别是一些精神性疾病,如烦躁,抑郁,同性恋,犯罪,自杀等,最近研究表明,人的聪明程度,行为倾向,高矮胖瘦等特征均与基因密切相关.真核细胞基因结构和原核细胞的有何相同点和不真核细胞基因结构和原核细胞的有何相同点和不真核细胞基因结构和原核细胞的有何相同点和不真核细胞基因结构和原核细胞的有何相同点和不同点?
同点?
同点?
同点?
11)相同点:
)相同点:
)相同点:
)相同点:
都是由能够编码蛋白质的都是由能够编码蛋白质的都是由能够编码蛋白质的都是由能够编码蛋白质的编码区编码区编码区编码区和具有调控和具有调控和具有调控和具有调控作用的作用的作用的作用的非编码区非编码区非编码区非编码区组成。
组成。
组成。
组成。
22)不同点:
)不同点:
)不同点:
)不同点:
原核细胞基因的编码区是原核细胞基因的编码区是原核细胞基因的编码区是原核细胞基因的编码区是连续连续连续连续的,的,的,的,真核细胞真核细胞真核细胞真核细胞基因的编码区是基因的编码区是基因的编码区是基因的编码区是间隔间隔间隔间隔的,的,的,的,不连续不连续不连续不连续的。
的。
的。
的。
真核细胞基因组中的基因常有内含子存在,能否在原真核细胞基因组中的基因常有内含子存在,能否在原核细胞中表达?
能,为什么?
不能,为什么?
核细胞中表达?
能,为什么?
不能,为什么?
不能,因为原核细胞缺乏对真核基因中内含子的剪接功能和转录后加工系统。
原核生物必须有相应的原核RNA聚合酶可识别原核细胞的启动子,以催化RNA的合成。
基因表达是以操纵子为单位,操纵子由数个相关的结构基因和调控功能的部位组成的。
因此在构建原核表达载体时必须有1个强的原核启动子及其两侧的调控序列。
核核酸酸核糖核酸核糖核酸(RNA)脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA)核糖体核糖体RNA(rRNA)转运转运RNA(tRNA)信使信使RNA(mRNA)分类分类分布分布细胞核细胞核、线粒体、叶绿线粒体、叶绿体、质粒等体、质粒等功能功能遗传信息的遗传信息的载体载体细胞质细胞质、细胞核细胞核核糖体的成分核糖体的成分转运氨基酸转运氨基酸传递传递DNA的的遗传信息,遗传信息,指导蛋白质指导蛋白质合成合成是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。
大发明。
理论上的三大发现:
理论上的三大发现:
证实了证实了DNADNA是遗传物质是遗传物质揭示了揭示了DNADNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定技术上的三大发明:
技术上的三大发明:
限制核酸内切酶的发现与限制核酸内切酶的发现与DNADNA切割切割DNADNA连接酶的发现与连接酶的发现与DNADNA片段的连接片段的连接基因工程载体的研究与应用基因工程载体的研究与应用基因工程诞生的理论基础是什么?
基因工程诞生的理论基础是什么?
为什么能把一种生物的基因为什么能把一种生物的基因“嫁接嫁接”到另一种生物上到另一种生物上?
推测这种推测这种“嫁接嫁接”怎样才能实现?
怎样才能实现?
DNADNA是生物的主要遗传物质是生物的主要遗传物质DNADNA都是由四种脱氧核苷酸形成的规则的双螺旋结构都是由四种脱氧核苷酸形成的规则的双螺旋结构二二.基因工程基因工程基因工程培育抗虫棉的简要过程基因工程培育抗虫棉的简要过程:
普通棉花普通棉花(无无抗虫特性抗虫特性)苏云金芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌提取提取提取提取抗虫基因抗虫基因与与与与运载体运载体运载体运载体DNADNADNADNA拼接拼接拼接拼接导入导入导入导入棉花细胞棉花细胞(含含抗虫基因抗虫基因)棉花植株棉花植株(有有抗虫特性抗虫特性)上述培育抗虫棉的关键步骤是什么?
上述培育抗虫棉的关键步骤是什么?
基因工程的概念基因工程的概念基因工程的概念基因工程的概念基因工程基因工程又叫做又叫做基因拼接技术基因拼接技术或或DNADNA重组重组技术技术。
是在生物体外,通过对是在生物体外,通过对DNADNA分子进行人分子进行人工工“剪切剪切”和和“拼接拼接”,对生物的基因进行,对生物的基因进行改造和重新组合,然后导入受体细胞内进行改造和重新组合,然后导入受体细胞内进行无性繁殖,使重组基因在受体细胞内表达,无性繁殖,使重组基因在受体细胞内表达,产生出产生出人类所需要的新的生物类型和生物产人类所需要的新的生物类型和生物产品品.基因工程基因工程基因工程操作的工具1.1.将目的基因片断从受体细胞内提取,将目的基因片断从受体细胞内提取,需要基因的剪刀需要基因的剪刀限制性核酸内切酶。
限制性核酸内切酶。
2.2.将目的基因与质粒将目的基因与质粒DNADNA连接,连接,需要基因的针线需要基因的针线DNADNA连接酶。
连接酶。
3.3.将目的基因运入大肠杆菌,将目的基因运入大肠杆菌,需要基因的运输工具需要基因的运输工具运载体。
运载体。
基因工程所需的基本条件基因工程所需的基本条件CCCC用于基因转移的受体菌或细胞用于基因转移的受体菌或细胞用于基因转移的受体菌或细胞用于基因转移的受体菌或细胞目的基因目的基因目的基因目的基因目的基因目的基因-符合人类需要的基因符合人类需要的基因符合人类需要的基因符合人类需要的基因符合人类需要的基因符合人类需要的基因目的基因表达系统目的基因表达系统目的基因表达系统目的基因表达系统目的基因表达系统目的基因表达系统BBBB用于用于用于用于基因克隆的载体基因克隆的载体基因克隆的载体基因克隆的载体-运载和表达基因的工具运载和表达基因的工具运载和表达基因的工具运载和表达基因的工具运载和表达基因的工具运载和表达基因的工具AAAA用于核酸操作的工具酶用于核酸操作的工具酶用于核酸操作的工具酶用于核酸操作的工具酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶-分割分割分割分割分割分割DNADNADNA分子的工具分子的工具分子的工具分子的工具分子的工具分子的工具DNADNADNA连接酶连接酶连接酶连接酶连接酶连接酶-把把把把把把DNADNADNA片段连接起来的工具片段连接起来的工具片段连接起来的工具片段连接起来的工具片段连接起来的工具片段连接起来的工具基因工程原理示意图AA用于核酸操作的工具酶用于核酸操作的工具酶基因的剪刀基因的剪刀限制性内切酶限制性内切酶限制性内切酶限制性内切酶(简简称限制酶称限制酶)。
主要。
主要存在于微生物存在于微生物中。
一种限制酶只能中。
一种限制酶只能识别一种特定的识别一种特定的核苷酸核苷酸序列,并且能在特定的切点序列,并且能在特定的切点上切割上切割DNADNA分子分子工工具酶具酶基因基因工程中的工具酶主要包括工程中的工具酶主要包括用于用于DNADNA和和RNARNA分子分子的切割的切割、连接连接、聚合聚合、逆、逆转录等转录等相相关的各种酶类关的各种酶类。
一、限制性核酸内切酶一、限制性核酸内切酶(res(restricrictioioneendoonucleaseclease,RE),RE)限制性限制性内切酶切酶的的发现19601960年,瑞士科学家阿尔伯年,瑞士科学家阿尔伯在观察大肠杆菌时,发现了一在观察大肠杆菌时,发现了一种酶种酶。
这种酶,它能识别。
这种酶,它能识别DNADNA顺顺序上特定序上特定的的DNADNA位置并在这一位位置并在这一位置进行切割。
这种酶被称为限置进行切割。
这种酶被称为限制性内切酶,后来被广泛地使制性内切酶,后来被广泛地使用于基因工程中,用于基因工程中,阿尔伯阿尔伯因此因此荣获了荣获了19781978年度年度诺贝尔奖诺贝尔奖。
限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶史密斯(1931-)内森斯(1928-)内森斯和史密斯都是美国科学家,因为发现限制性核酸内切酶而获得1978年诺贝尔生理学及医学奖。
限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶EcoR1EcoR1限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶EcoR1EcoR1对对对对DNADNA分子的切割分子的切割分子的切割分子的切割有趣的回文序列有趣的回文序列有趣的回文序列有趣的回文序列CGACGAATTCGATAGCTGCTTAAGCTAT是一类由细菌产生的能专一识别和是一类由细菌产生的能专一识别和切割双链切割双链DNADNA中的特定碱基序列的核酸内切酶,简称中的特定碱基序列的核酸内切酶,简称限制酶限制酶或或切割切割酶酶。
根据限制酶作用特性,一般分为根据限制酶作用特性,一般分为、和和型,型,其中常用的是其中常用的是型限制酶型限制酶。
限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶第一个字母取自产生该酶的细菌属名,用大写第一个字母取自产生该酶的细菌属名,用大写第一个字母取自产生该酶的细菌属名,用大写第一个字母取自产生该酶的细菌属名,用大写;第二、第三个字母是该细菌的种名,用小写;第二、第三个字母是该细菌的种名,用小写;第二、第三个字母是该细菌的种名,用小写;第二、第三个字母是该细菌的种名,用小写;第四个字母代表株;第四个字母代表株;第四个字母代表株;第四个字母代表株;用罗马数字表示发现的先后次序。
用罗马数字表示发现的先后次序。
用罗马数字表示发现的先后次序。
用罗马数字表示发现的先后次序。
命名命名EcoR属属种种株株序序EscherichiacoliRY13株株大大肠杆菌杆菌RY13株的第一种酶株的第一种酶大肠杆菌大肠杆菌限制酶的命名应该是依据其来源和发现顺序,名称分两部分限制酶的命名应该是依据其来源和发现顺序,名称分两部分:
第一部分:
第一部分:
用供体微生物拉丁学名的关键字(如大肠杆菌:
用供体微生物拉丁学名的关键字(如大肠杆菌:
EEscherichiacolischerichiacoli,E.coliE.coli););第二部分第二部分:
该酶在该菌中发现的顺序:
该酶在该菌中发现的顺序:
II表示首先发现,表示首先发现,IIII表表示第二发现。
示第二发现。
ECORIECORI:
大肠杆菌中发现最早的限制酶大肠杆菌中发现最早的限制酶SmaISmaI:
粘质沙雷氏菌中发现最早的限制酶粘质沙雷氏菌中发现最早的限制酶HindHind、HindHind和和Hind:
Hind:
从流感嗜血杆菌从流感嗜血杆菌dd株(株(HaemophilusHaemophilusinfluenzaeinfluenzaedd)中先后分离到)中先后分离到33种限制酶,种限制酶,
(2)产生平末端(bluntend):
酶的识别和切割位点:
通常4-6bp,具有回文结构(palindrom)
(1)产生粘性末端(stickingend)5-末端:
EcoR1:
5-GAATTC-33-CTTAAG-53-末端:
Pst1:
5-CTGCAG-33-GACGTC-5Sma1:
5-CCCGGG-33-GGGCCC-5bp是basepair的简称,也就是一个碱基对。
又称异源同工酶。
指来源不同,但具有又称异源同工酶。
指来源不同,但具有相同的识相同的识别别序列序列。
同识同切同识同切:
在切割在切割DNADNA时,其时,其切割点切割点可以是可以是相同相同的,产的,产生平头末端生平头末端.同识异切同识异切:
切割点切割点也可以是也可以是不同不同的,产生的,产生33或或55粘性末粘性末端端.同裂酶同裂酶同裂酶同裂酶同识同切同识同切同裂酶同裂酶同识异切同识异切指来源不同,但识别与切割顺序有一定的相关性的指来源不同,但识别与切割顺序有一定的相关性的一类酶。
它们作用后一类酶。
它们作用后产生相同产生相同的粘性的粘性末端末端。
同同尾尾酶酶BamBamHHBgBgllGGATCCCCTAGGAGATCTTCTAGAGCCTAGGATCCG+ATCTAGGATCTA可变酶可变酶识别顺序中的一个或几个碱基是可变的,识别顺序中的一个或几个碱基是可变的,并且识别顺序往往超过并且识别顺序往往超过66个碱基对。
个碱基对。
如,如,BstBstpp,其识别顺序为其识别顺序为GGTNACCGGTNACC。
可变酶可变酶常用限制性核酸内切酶的特性微生物物名称酶酶名称识别顺序序同同裂酶酶同同尾酶酶BacillusamyloliquefaciensH解淀粉芽孢杆菌杆菌BamHGGATCCBstBglMboBacilliusglobigil球芽孢杆菌杆菌BglACATCTEscherichiacoliRY13大大肠杆菌杆菌EcoRGAATTCHaemophilusinfluenzae流感嗜血菌菌HindAAGCTTHsuProvidenciastuartii164普罗威登细菌菌PstCTGCAGSalpStreptomycesalbusSubspeciespathocidicus白色链球菌菌SalGTCGACAvaXho其他重要的工具酶其他重要的工具酶工具酶工具酶活性活性T4DNAT4DNA连接酶连接酶T4DNADNA连接酶接酶催化化双链DNADNA一一端33-OHH与另一另一双链DNADNA的的55端磷酸根形成形成3355磷酸二酯键DNADNA聚合酶聚合酶Klelenoow片段(Klelenoowfraragmeent)。
DNADNA为模板合成为模板合成DNADNA性性末端或或平端的的DNADNA两端连接接起来。
酶在酶在有有dNTPdNTP情况下,呈现情况下,呈现DNADNA聚合酶活性,在聚合酶活性,在没有没有dNTPdNTP情况下呈现外切酶活情况下呈现外切酶活在在有有dNTPdNTP情况下,呈现情况下,呈现DNADNA聚合酶活性,在聚合酶活性,在没有没有dNTPdNTP情况下呈现外切酶活性。
情况下呈现外切酶活性。
逆转录酶逆转录酶以以RNARNA为模板合成为模板合成cDNAcDNA碱性磷酸酶碱性磷酸酶切除切除55末端磷酸末端磷酸T4T4多聚核苷酸激酶多聚核苷酸激酶催化核酸催化核酸5-5-羟基磷酸化羟基磷酸化末端脱氧核苷酸转移酶末端脱氧核苷酸转移酶催化催化3-3-端合成同聚尾端合成同聚尾内切酶、碱性磷酸酶、连接酶的作用内切酶、碱性磷酸酶、连接酶的作用1.基因工程中常用限制性内切酶的识别序列,正确的说法是:
(E)A.聚胞苷酸;B.聚腺苷酸;C.6或8个任意
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