HPLC法同时测定柴胡与春柴胡中皂苷类及黄酮类成分的含量百汇总.docx
- 文档编号:18499623
- 上传时间:2023-08-18
- 格式:DOCX
- 页数:16
- 大小:49.75KB
HPLC法同时测定柴胡与春柴胡中皂苷类及黄酮类成分的含量百汇总.docx
《HPLC法同时测定柴胡与春柴胡中皂苷类及黄酮类成分的含量百汇总.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《HPLC法同时测定柴胡与春柴胡中皂苷类及黄酮类成分的含量百汇总.docx(16页珍藏版)》请在冰点文库上搜索。
HPLC法同时测定柴胡与春柴胡中皂苷类及黄酮类成分的含量百汇总
HPLC法同时测定柴胡与春柴胡中皂苷类及黄酮类成分的含量
*
韦英杰1
王茉2
宁青1
詹雯1
施静逸1
贾晓斌
1
**(1.江苏省中医药研究院中药新型给药系统重点实验室,国家中医药管理局中药口服释药
系统重点研究室,南京210028;2.吉林市食品药品检验所,吉林132001
摘要目的:
建立HPLC法同时测定柴胡和春柴胡中2个皂苷类活性成分(柴胡皂苷a和柴胡皂苷d、4个黄酮类活性成分(芦丁、槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量。
方法:
采用AgilentZorbaxC18(46mm250mm,5m色谱柱,以01%磷酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1mLmin-1,检测波长203nm(测定皂苷类成分和360nm(测定黄酮类成分,柱温35。
结果:
6个活性成分的峰面积与浓度的线性关系良好(r09994,线性范围宽;精密度试验的RSD为067%~19%;加样回收率为951%~1043%。
10批市售柴胡和春柴胡的黄酮类和皂苷类成分含量具显著差异:
春柴胡中4个黄酮类成分平均含量约为柴胡中的75~72倍;春柴胡中柴胡皂苷a的平均含量为柴胡的1/10,而柴胡皂苷d的平均含量约为柴胡的3倍;柴胡与春柴胡中6个成分含量的相关系数为010~062。
结论:
本方法具良好的精密度、重复性和可靠性,可同时测定柴胡和春柴胡中皂苷类和黄酮类成分的含量并有效表征其差别。
关键词:
高效液相色谱法;柴胡;春柴胡;皂苷;黄酮中图分类号:
R917
文献标识码:
A
文章编号:
0254-1793(201105-0879-05
HPLCsimultaneousdeterminationofsaponinsand
flavonoidsofBupleuriRadixandBupleuriHerba
*
WEIYing-jie1
WANGMo2
NINGQing1
ZHANWen1
SHIJing-yi1
JIAXiao-bin
1**
(1.KeyLaboratoryofNewDrugDeliverySystemofChineseMeteriaMedica,JiangsuProvincialAcademyofChineseMedicine,
Nanjing210028,China;2.JilinInstituteforFoodandDrugContro,lJilin132001,China
AbstractObjective:
ToestablishanHPLCmethodforthesimultaneousdeterminationof2saponins(saikosaponina,saikosaponindand4flavonoids(rutin,quercetin,kaempferideandisorhamnetinofBupleuriRadixandBupleuriHerba.Methods:
ThesesixcompoundswereanalyzedsimultaneouslywithanAgilentZorbaxC18(46mm250mm,5mcolumnbygradientelutionusing01%(v/vphosphoricacid-acetonitrileasthemobile
phaseattheflowrateof1mLmin-1
;Thedetectionwavelengthwassetat203nmforsaponinsand360nmforflavonoids,andthecolumnwasmaintainedat35.Results:
Allthecompoundsshowedgoodlinearity(r09994inarelativelywideconcentrationrange.RSDsoftheprecisiontestwere067%-19%,andtherecoverieswere951%-1043%.Theoverallreproducibilityofthemethodwasacceptable.TherewassignificantdifferenceoncontentofsaponinsandflavonoidsbetweenBupleuriRadixandBupleuriHerba:
contentofflavonoidsinBupleuriHerbawasabout75-72timesofthatinBupleuriRadix;whilecontentofsaikosaponinainBupleuriRadixwasabout10timesofthatinBupleuriHerba,contentofsaikosaponindinBupleuriHerbawasabout3timesofthatinBupleuriRadix;CorrelationofcontentbetweenBupleuriHerbaandBupleuriRadixwas010-062.Conclusion:
ThevalidatedHPLC-DADmethodhastheadvantagesofprecision,reproducibilityandreliability,allowingsimultaneousdeterminationandcomparisonofsaponinsandflavonoidsbetweenBupleuriRadixandBupleuriHerba.Keywords:
HPLC;BupleuriRadix;BupleuriHerba;saponins;flavonoids
879
药物分析杂志ChinJPharmAnal2011,31(5*江苏省中医药领军人才专项(2006;国家自然科学基金面上项目(30973978(;-mai:
ljx@m
柴胡为伞形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狭叶柴胡BupleurumscorzonerifoliumWilld.的干燥根;具有疏散退热、疏肝解郁、升举阳气之功;用于治疗感冒发烧、寒热往来、胸胁胀痛等症[1]。
春柴胡(BupleuriHerba为狭叶柴胡的带根全草,为江苏、安徽等地习惯用药材,但尚未被中国药典收载。
柴胡与春柴胡的功效是否相当,明晰二者的物质基础差异具有重要意义。
已有对柴胡的质量控制研究以检测其皂苷类化合物为主[1~4],而对春柴胡的分析则主要关注其黄酮类成分[5,6],近年来的研究开始关注柴胡中黄酮类成分[7,8]或春柴胡中皂苷类成分[9],尚未有对柴胡和春柴胡中皂苷类和黄酮类同时进行分析与比较的报道。
本文采用HPLC法同时测定柴胡和春柴胡中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、芦丁、槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量,并比较其含量差别,为完善柴胡与春柴胡的质量控制及合理临床应用提供参考。
1仪器与试药
Agilent1100型系列高效液相色谱仪,包括G1311A四元梯度泵、G1313A自动进样器、G1316A柱温箱、G1315BDAD检测器;Chemstation601色谱工作站(美国Agilent公司。
柴胡、春柴胡药材各10批,购自哈尔滨市、吉林市、锦州市以及南京市多个药店。
经作者鉴定为柴胡BupleurumchinenseDC.干燥根、狭叶柴胡BupleurumscorzonerifoliumWilld.的干燥根或全草。
对照品芦丁(批号100080-200707、槲皮素(批号100081-200406、山柰素(批号110861-200808、异鼠李素(批号110860-200406、柴胡皂苷a(批号110777-200406及柴胡皂苷d(批号110778-200505均购自中国药品生物制品检定所,纯度均>98%。
乙腈、磷酸为色谱纯(德国Merck公司,水为乐百氏纯净水,甲醇为分析纯。
2色谱条件
色谱柱:
AgilentZorbaxC18(46mm250mm,5m色谱柱;流动相:
01%磷酸水(A-乙腈(B,梯度洗脱(0~15min,5%B20%B;15~30min,20%B25%B;30~60min,25%B45%B;60~70min,45%B50%B;流速:
10mLmin-1;检测波长203nm(测定皂苷类成分和360nm(测定黄酮类成分;柱温:
35。
对照品、柴胡、春柴胡色谱图
图1对照品(A、柴胡(样品6,B及春柴胡(样品3,C高效液相色谱图
Fig1HPLCchromatogramsofreferencesubstances(A,BupleuriRadix(sample6,BandBupleuriHerba(sample3,C
1.芦丁(rutin2.槲皮素(quercetin3.山柰素(kaempferide4.异鼠李素(isorhamnetin5.柴胡皂苷a(saikosaponina6.柴胡皂苷d(saikosaponind
3供试品溶液的制备
取柴胡或春柴胡药材粉碎(过65目筛,称取细粉20g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇40mL,密塞,称定重量,超声(功率200W,频率40kHz处理30min,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,滤过,用70%甲醇洗涤药渣,合并滤液及洗涤液置蒸发皿中,于50水浴蒸干。
残渣用70%甲醇溶解并转移至10mL量瓶中并定容至刻度,摇匀,045m微孔滤膜过滤,得供试品溶液(芦丁含量较高的春柴胡样品需进一步将此供试品溶液稀释2~5倍,制得供测定芦丁含量。
880
药物分析杂志ChinJPharmAnal2011,31(5
4线性关系考察
分别精密称取芦丁353mg、槲皮素363mg、山柰素420mg和异鼠李素273mg,置10mL量瓶中,加甲醇溶解并定容,即得黄酮类化合物混合对照品储备液。
分别精密称取柴胡皂苷a1070mg和柴胡皂苷d985mg,置5mL量瓶中,加甲醇溶解并定容,即得皂苷类化合物混合对照品储备液。
将黄酮类和皂苷类化合物各自的混合对照品储备液分别依次稀释,制得浓度分别为初浓度的1/250,1/100,1/50,1/20,1/10,1/5,1/2,1/1的黄酮类化合物混合对照品溶液和皂苷类化合物混合对照品溶液。
在本实验色谱条件下,各浓度对照品溶液分别进样20L。
以峰面积(Y对浓度(X,gmL-1进行线性回归,线性关系良好,回归方程见表1。
表1峰面积与浓度的线性关系、检测限和定量限
Tab1Linearrelationbetweenpeakareaandconcentration,LODandLOQ
化合物(compound
回归方程
(regressionequation
r
线性范围
(linearrange/gmL-1
LOD/gmL-1LOQ/gmL-1
芦丁(rutinY=2900X-131109997141-3530011035槲皮素(quercetinY=6260X+318509996145-3630007024山柰素(kaempferideY=1922X+284709996168-4200021053异鼠李素(isorhamnetinY=7565X-330209997109-2730018068柴胡皂苷a(saikosaponinaY=7752X+278809994856-2140036107柴胡皂苷d(saikosaponindY=6955X+118809994788-1970066197
分别取黄酮类混合对照品溶液和皂苷类混合对照品溶液,用甲醇依次稀释制成一系列由高到低的梯度浓度溶液,进样20L进行测定,取峰面积为噪音3倍(S/N=3时的进样浓度为检测限(LOD,取峰面积为噪音10倍(S/N=10时的进样浓度为定量限(LOQ,见表1。
5精密度试验
精密量取4项下1/10浓度梯度的混合对照品溶液20L,连续进样5次,以峰面积计算,6个化合物芦丁、槲皮素、山柰素、异鼠李素、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的RSD(n=5分别为13%,11%,095%,067%,19%,16%,说明精密度良好。
6重复性试验
取柴胡和春柴胡各1个批号,每个批号6份,按3项下方法制备供试品溶液并进样20L进行分析。
结果柴胡中6个化合物芦丁、槲皮素、山柰素、异鼠李素、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量(n=6分别为005,001,001,001,357,269mgg-1;RSD为13%~24%。
春柴胡中6个化合物含量(n=6分别为521,101,008,014,028,338mgg-1;RSD为091%~17%。
重复性良好。
7稳定性试验
分别取6项下柴胡和春柴胡供试品溶液各1份,分别于0,2,4,6,8,12h进样20L进行分析,记录色谱峰面积。
结果柴胡和春柴胡6个化合物峰面积的RSD(n=6分别为12%~20%和093%~24%,表明供试品溶液在12h内稳定。
8加样回收率试验
取6项下已测定含量的柴胡和春柴胡细粉各6份,每份约10g,精密称定,分别加入4项下黄酮类混合对照品溶液和皂苷类混合对照品溶液适量,按3项下方法制备供试溶液,按上述色谱条件分别进样20L进行分析,记录各色谱峰峰面积,计算回收率。
结果回收率为951%~1043%,RSD为17%~50%。
见表2。
表2加样回收试验结果(n=6
Tab2Analyticalresultsofrecoveries
样品(sample化合物(compound初始量(original/mg加入量(added/mg回收率(recovery/%RSD/%柴胡(BupleuriRadix芦丁(rutin005005395138槲皮素(quercetin001001198945山柰素(kaempferide001000998750异鼠李素(isorhamnetin001001399144柴胡皂苷a(saikosaponina361332096132柴胡皂苷d(saikosaponind2722850103633
881药物分析杂志ChinJPharmAnal2011,31(
5
续表2
样品(sample化合物(compound初始量(original/mg
加入量(added/mg
回收率(recovery/%
RSD/%春柴胡(BupleuriHerba
芦丁(rutin525523098217槲皮素(quercetin102110097320山柰素(kaempferide008009095834异鼠李素(isorhamnetin0140130103034柴胡皂苷a(saikosaponina0280286104342柴胡皂苷d(saikosaponind
341
3380
979
41
9样品测定
取市售柴胡和春柴胡各10批,按3项下方法制备供试品溶液,进样20L进行色谱分析。
按外标法分别计算样品中6个成分的含量,结果见表3。
表3柴胡与春柴胡中6个成分含量测定结果(mgg-1,n=3
Tab3ThedeterminationresultsofthesixmarkercompoundsinBupleuriRadixandBupleuriHerba
药材(crudedrug编号(No.来源(sources芦丁(rutin槲皮素(quercetin山柰素(kaempferide
异鼠李素(isorhamnetin
柴胡皂苷a(saikosaponina
柴胡皂苷d(saikosaponind
柴胡(BupleuriRadix
1
安徽井泉(Jingquan,Anhui
005
001
001
001
357
269
2河北安国(Anguo,Hebei005
001
003
001
077
325
3河北祁新(Qixin,Hebei033
002
002
001
079
197
4河北祁新(Qixin,Hebei021
002
002
001
077
188
5河北安国(Anguo,Hebei006
001
003
001
075
333
6安徽亳州(Bozhou,Anhui001
001
002
001
298
199
7安徽井泉(Jingquan,Anhui
015
002
007
004
145
196
8安徽亳州(Bozhou,Anhui001
000
001
001
294
236
9安徽亳州(Bozhou,Anhui015
002
003
002
092
232
10河北安国(Anguo,Hebei
015
001
001
001
181
159
平均值(average
012001002001168233RSD/%
866519712690654252春柴胡(BupleuriHerba
1
安徽铜陵(Tongling,Anhui
521
101
008
014
028
338
2安徽亳州(Bozhou,Anhui015
004
030
001
006
000
3安徽亳州(Bozhou,Anhui667
103
017
020
030
908
4河北瑞草(Ruicao,Hebei775
062
022
009
023
1203
5安徽亳州(Bozhou,Anhui547
127
005
023
035
1796
6安徽亳州(Bozhou,Anhui184
074
008
011
024
826
7安徽亳州(Bozhou,Anhui670
154
030
018
021
1193
8安徽亳州
451
086
017
019
023
865
882药物分析杂志ChinJPharmAnal2011,31(5
续表3
药材(crudedrug
编号
(No.
来源
(sources
芦丁
(rutin
槲皮素
(quercetin
山柰素
(kaempferide
异鼠李素
(isorhamnetin
柴胡皂苷a
(saikosaponina
柴胡皂苷d(saikosaponind9安徽亳州
(Bozhou,Anhui
012003022001000000
10安徽亳州
(Bozhou,Anhui
0100100050030
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- HPLC 同时 测定 柴胡 皂苷 酮类 成分 含量 汇总