P2微生物试验室安全操作手册慈济大学环境保护暨安全卫生中心.docx
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P2微生物试验室安全操作手册慈济大学环境保护暨安全卫生中心
慈濟大學
BSL-2實驗室生物安全管理手冊
實驗室名稱:
000
實驗室地點:
(實驗室編號)
實驗室管理負責人:
000
聯絡電話:
000000000
E-MAIL:
000000000
00年00月00日
目錄
一、前言03
二、生物安全的原則03
三、生物性與一般廢棄物之處理07
四、實驗室之清潔與管理08
五、緊急應變處理08
六、附件
附件1000實驗室生物材料清單11
附件2人員訓練紀錄11
附件3進出人員登記12
附件4實驗室安全檢查紀錄表13
附錄5實驗室逃生路線圖(附逃生標示照片)14
一、前言
本校000系BSL-2實驗室位於00大樓000室,目前總計有00種細菌正在使用或保存,請參考附件1。
本安全操作管理手冊主要目的為使工作人員熟悉相關實驗操作以及與第二級生物危害性微生物類(含病毒、細菌等)的潛在危險性,使其能在安全的環境下進行實驗。
因此每位進入本實驗室的工作人員必須熟讀此操作手冊,並符合進入本實驗室之條件。
本手冊包含第二級生物危害實驗室的簡介、安全操作規定、生物實驗室的分類及附件。
附件中包含實驗室微生物操作規定、培養箱與生物安全操作櫃的使用規則以及感染性廢棄物處理等。
本實驗室之全體工作人員均應確實遵守相關安全規定,以確保工作安全。
二、生物安全的原則
本實驗室等級為第2等級,須符合BSL-2實驗室之安全規範
1.生物安全等級2(Bio-safetyLevel2)
「生物安全等級2」適用於操作對實驗室工作人員及環境具中度潛在性危險的特定物質。
本實驗室根據世界衛生組織之「2004實驗室生物安全手冊第三版生物安全等級設施總表」訂定本實驗室安全手冊。
生物安全等級設施需求表
生物安全等級
實驗室操作規範
安全設備及設施
第一等級/BSL-1
遵循優良微生物學技術
無特別需求
第二等級/BSL-2
遵循優良微生物學技術,工作人員穿著工作服(或實驗衣),實驗室門口應有生物危害標誌。
1.應設置生物安全櫃每年至少測試1次為原則。
2.實驗室需有人員進出管制措施。
3.使用合格的高溫高壓蒸氣滅菌器。
4.實驗室需設置洗手槽並靠近出口處,洗手槽可採用肘動、腳踏或自動感應操作方式。
5.洗眼器。
第三等級/BSL-3
同BSL-2實驗室要求,加上工作人員穿著特殊防護衣,進入管制區。
1.應設置三級生物安全櫃。
2.設施內應為負壓且為定向氣流
3.實驗室需有人員進出管制措施。
4.使用合格的高溫高壓蒸氣滅菌器。
5.實驗室需設置洗手槽並靠近出口處,洗手
槽可採用肘動、腳踏或自動感應操作方式。
6.洗眼器。
第四等級/BSL-4
同BSL-3實驗室要,加上廢棄物之特殊處理。
同BSL-3實驗室要求,加雙門高壓蒸氣滅菌器(穿牆式),設施使用經過濾之空氣、氣密門及出口淋浴裝置。
除以上需求以外,應特別注意以下事項。
(1)本實驗室工作人員受過由本實驗室室管理人000指導使用第二風險等級微生物之特殊訓練。
(2)本實驗室特別小心受污染的尖銳物品,以防感染。
(3)本實驗室使用之生物安全材料可能產生氣霧或濺灑者,需使用第2級生物安全操作櫃以及物理性防護設備(例如:
安全的離心裝置、面罩、臉部保護等)。
本室生物安全材料可能存在未知之感染物質,所以必須依生物安全等級2之規定操作。
2.進入本實驗室之工作人員須具有下列條件:
(1)由實驗室負責人講解本管理手冊之詳細內容,人員需熟讀與熟悉本手冊後,並進一步完成生物安全與保全之教育訓練(人員訓練記錄附件2)。
(2)初次進入本實驗室工作,需由具有經驗且熟悉本實驗室之工作人員陪同示範一次以上。
3.人員進出管制
(1)被允許之工作人員,進入BSL-2實驗室準備區更換BSL-2專用實驗衣後,戴上口罩以及手套始能進入實驗區。
實驗進行中請依BSL-2實驗室之規定進行實驗操作。
工作完成後,應將手套、口罩脫下置於感染性垃圾桶,並在準備區以清潔劑清洗雙手並換下實驗衣後離開實驗室。
(2)爲維持實驗室環境之安全性,進出實驗室請隨手將門關緊,不同區域之門不可同時開啟以避免發生污染。
(3)進入實驗室之工作人員,更換實驗區拖鞋時,均須穿上個人之襪子,以維持公共衛生。
(4)手套使用範圍僅在實驗室內,若發現有破損請立即更換,不得戴上手套碰觸門把。
(5)實驗結束且完成整理清潔後,才可脫手套離開出實驗區。
4.實驗室操作規範及技巧
本實驗室設有以下規範,所有人員必須清楚了解本操作規範及技巧。
除了熟知本實驗室之潛在危險外,對實驗操作技巧也必須熟練。
以下規定應確實完成。
(1)實驗室入口張貼「生物性危害」標示。
(2)實驗進行時,關閉實驗室門。
只有被核准之人員方可進入實驗。
(3)實驗進行中,要在實驗室之入口,標示「BSL-2級實驗室」,並掛上「BSL-2級實驗進行中」的標示。
保存重組體之冰箱及冷凍庫也要做同樣的標示。
(4)實驗室管理人有責任且具職權管制進出人員。
先天免疫缺乏者、高危險性後天感染者或感染後病症特殊者,禁止進入實驗室。
(5)實驗完成後必須洗手。
(6)實驗室禁止:
吃、喝、吸煙、儲存食物、施用化妝品等。
(7)禁止以口接觸任何與實驗相關物品。
(8)任何物質禁止放入口中,標籤禁止以舌舔。
(9)工作時需穿著實驗衣,且此實驗衣不可於非工作區域穿著。
受污染之實驗衣以高壓滅菌法進行消毒。
(10)實驗室禁止穿涼鞋及拖鞋。
(11)實驗衣與自己的衣服必須分開放置。
(12)戴安全眼鏡或面罩。
(13)操作感染性物質必須配戴隔離手套,尤其手上皮膚有受傷時。
(14)小心操作以減少感染物的濺溢或氣霧之產生。
(15)工作桌於每次實驗完成後與一日工作結束後以75%酒精擦拭消毒。
操作中有人不慎接觸生物危害性物質時須立即消毒。
(16)實驗室應該保持整潔,實驗不必用到的物品不應該出現。
(17)實驗室內特別要求安全操作尖銳物品,盡可能使用塑膠器材。
(18)不可徒手處理破碎玻璃器皿,須使用機械式器具,如:
掃帚與畚斗、鉗子、鑷子等。
裝有感染性針頭、尖銳物品、及破碎玻璃的容器須先經消毒,再依據相關法令規定處置。
(19)以防漏容器收集、處理、貯存、傳遞、運送培養物、組織或組織液樣本。
(20)所有培養物、貯存物、及其他管制廢棄物,在丟棄前需依認可之方法消毒,例如:
高溫高壓滅菌法處理。
若消毒須於臨近實驗室處進行時,所有物品需置於耐用、防漏密閉的容器中,以利安全運送。
(21)除定期消毒外,若發生有感染性物質潑灑或其他污染情形發生時,實驗室內儀器及工作檯面須以適當的殺菌劑消毒,受污染的儀器依照政府相關單位的規定消毒及包裝後,才得移出維護修理。
(22)操作細菌、病毒或是感染性物質相關實驗時,若需使用微量吸取器進行操作微量液體之吸取,需使用含過濾頭之tip以避免發生污染,當使用完後tip需置於含消毒殺菌水溶液的瓶內浸泡(例如0.1%的漂白水溶液),待瓶內空間飽和時將漂白水移除後再置於廢棄桶進行消毒。
(23)實驗室管理人須建立本操作手冊,實驗室人員必須熟讀且遵守。
(24)實驗室人員必須定期接受生物安全與保全之訓練。
此外,若有修訂任何程序步驟須再接受額外的訓練。
(25)實驗室有任何意外必須立即向實驗室管理人報告。
任何藥物評估、監測及處理須紀錄及保存。
5.二級防護設備及實驗室設施
本實驗室設施為保護實驗室人員免於受到感染性物質之污染,在設計上必須做到以下事項:
(1)避免或降低人員和感染性物質接觸。
(2)材質必須不滲透、抗腐蝕、並符合結構需求。
(3)組合上不要有粗糙的或鋸齒狀的邊。
(4)設計上要易於操作、維護、清潔及去除污染。
(5)本實驗室實驗進行皆於第2級生物安全操作櫃中操作。
(6)實驗進行時應穿著實驗衣,以免污染外出服。
並且不可將這些衣物穿離或帶離實驗室。
(7)實驗時請配戴手套,尤其當皮膚有破皮或出疹情形時。
必要時甚至可以戴兩層手套。
(8)如預期有微生物或其他危險物質濺灑臉部,則須配戴眼部保護裝置。
(9)本實驗室以高溫高壓滅菌鍋處理廢棄物以去除污染。
(10)本實驗室之生物安全操作櫃符合感染性生物材料管理辦法之規範。
(11)本實驗室設門禁管制,並有進出人員登記如附件3。
(12)本實驗室地板為磨石子地板易於清潔。
(13)本實驗設備材質均防滲並能抵抗熱、有機溶劑、酸、鹼及其他化學品。
。
(14)本實驗室生物安全操作櫃設置於適當位置。
(15)本實驗室之實驗區照明適當,無反射、強光、鏡面等妨礙視覺之物品。
(16)本實驗室之實驗區設獨立室空調,門板下方加裝門底封條,使排氣不再循環至建築之任一處。
三、生物性與一般廢棄物之處理
本實驗室所產生之廢棄物分為生物性廢棄物與一般廢棄物兩類,本實驗室生物性廢棄物指的是實驗室所產生之微生物等生物性物質或曾與上述物質接觸後所產生之廢棄物。
例如使用過後之培養瓶、培養皿、玻璃、塑膠吸管或離心管等均屬之。
1.固態生物性廢棄物:
(1)手套、口罩和固體廢棄物皆須置於大型滅菌袋內(有紅色生物性危害標示圖案),並加以密閉以避免污染。
密封後利用高壓滅菌鍋以121C,1.1kg/cm2下滅菌30分鐘後完成滅菌。
(2)清運過程中需要兩位人員協同進行,帶有手套人員負責清運廢棄物,另一位未帶手套人員則是協助開啟各區之門以利運送。
2.液態生物性廢棄物:
(1)放置在不銹鋼提籃,以高溫高壓滅菌鍋於121C,1.1kg/cm2下滅菌30分鐘後,再以清
洗一般實驗器皿、玻璃試管和血清瓶方式清潔。
(2)一般廢棄物指無危害性者,一般性廢棄物則由清潔人員處理。
(3)實驗當天其液態和固態生物性廢棄物產出後,液態廢棄物進行高溫高壓滅菌;固態廢棄物
則噴灑消毒劑封口,待隔天實驗結束後以高溫高壓滅菌的廢棄物清運處理。
四、實驗室之清潔與管理
(1)本實驗室每天定期安全檢查並紀錄,紀錄表如附件4。
(2)本實驗室生物安全操作櫃之初級濾網應定期更換,並填寫更換紀錄於安全檢查紀錄表中,替換掉之初級濾網需噴灑75%酒精以及0.1%漂白水溶液處理後,以滅菌袋封裝,並以高壓滅菌處理後才能以廢棄物丟棄。
(3)生物安全操作櫃每年應委外之合格檢驗公司進行檢測風速與落菌數之確校。
(4)空調系統濾網應定期更換並填寫更換記錄於安全檢查紀錄表中,以維護本實驗之安全室內空氣品質。
五、緊急應變處理
有關緊急應變處理請參考本校訂定之「慈濟大學實驗場所生物安全緊急應變計畫」。
生物試劑洩漏緊急應變處理
A.生物安全櫃內之洩漏處理:
步驟1進入實驗區前穿著個人防護器材:
手套、安全眼鏡、實驗衣等始得進行清理工作。
步驟2將擦拭紙放置於洩漏區上。
步驟3使用殺菌劑(如0.1%漂白水溶液)清潔櫥壁、工作面及凹槽,使用殺菌劑時應避免噴濺。
步驟4讓殺菌劑停滯污染面10~20分鐘。
步驟5以擦拭紙擦拭或吸收所有的殺菌劑,將吸收棉紙放入標示有「生物性危害」紅色袋中,以生物性廢棄物處理。
步驟6再以殺菌清潔劑清洗所有暴露面。
步驟7以殺菌劑清潔生物安全櫃內部,包括更換初級濾網,替換掉之初級濾網放入標示有「生物性危害」紅色袋中。
該濾網需經高壓滅菌處理後以感染性廢棄物處理。
若有紙製物或其他會吸收液體之物質則直接當感染性廢棄物處理。
步驟8清潔與更換濾網完畢後,將UV(紫外光燈)開啟,操作時間至少3小時以上至隔日。
步驟9於生物安全櫃玻璃門張貼「消毒中,禁止開啟」相關字樣。
B.如有大量樣本洩漏,需立即停止所有作業立即投入緊急應變處理,並聯繫本實驗室負責人000緊急處理。
步驟1進入實驗區前穿著個人防護器材:
手套、安全眼鏡、實驗衣等始得進行清理工作。
步驟2確定這間實驗室所有人員皆已疏散、清點人數並將實驗室門關閉。
步驟3進入實驗室,以吸收棉索將洩漏範圍圍住,再以吸收棉紙覆蓋在洩漏區。
步驟4小心傾倒殺菌劑(如1%漂白水溶液)在洩漏區外周圍,然後再往洩漏區傾倒,過程中避免產生噴濺及氣膠現象。
步驟5讓殺菌劑靜置20分鐘以上。
步驟6使用更多的吸收棉材料將殺菌劑完全的擦拭掉。
步驟7將所有吸收棉材料放入標示有「生物性危害」紅色滅菌袋中,以生物性廢棄物處理。
步驟8先使用殺菌劑清理後才可脫掉防護具,並將防護具丟棄於標示有「生物性危害」紅色滅菌袋中,以感染性廢棄物處理。
步驟9在實驗室門口張貼「消毒中,實驗人員禁止進入」相關字樣,避免不知情人員進入。
步驟10離開後立即以殺菌劑清洗雙手及各身體可能之開放面。
C.發生火災緊急應變處理:
本實驗室若發生火災之事故發生者或發現者,依事故內容通報以下單位:
●本實驗室負責人電話:
0900-000000(000老師)
●單位主管聯絡電話:
0900-000000(000主任)
●校安緊急聯絡電話:
03-8560505(校安人員)
●環安中心緊急聯絡電話:
03-8565301-1553,0937977384(潘巨展先生)
●警衛室聯絡電話:
0921146080(24小時值班)
步驟1狀況判別:
●引起火災的原因(明火、電氣走火、靜電火花等引燃易燃物)
●火災現場是否有特殊的危險(害)狀況(爆炸性氣體洩漏或毒性氣體(蒸氣)溢散或禁水性化學品或爆炸性、不穩定性化學品)
步驟2危害性判別:
●是否已有人員傷亡?
有請迅速將人員移至安全區域予以急救。
●是否有立即的危險?
●有無發生爆炸或有爆炸的可能性。
●空氣中,有害(險)性物質濃度,是否已達致死濃度或介於爆炸界限濃度範圍。
●有立即危險,請盡速依照逃生路線(如附件5)離開火災現場,並緊急通報校方處理。
步驟3火災處理
●適用最初起火時,且能在三分鐘以內滅火之火源。
本BSL-2級實驗室000室在門口外側有配滅火器,可直接使用手提滅火器滅火。
●火勢無法收拾,請利用火災手按報知機(火警鈴聲示警通報),盡速依照逃生路線(如附件5)離開火災現場,並緊急通報校方處理。
步驟4發生地震緊急應變處理
●室內人員應停止手邊工作,關閉開啟之火源,立即尋找堅固牢靠之樑柱邊或桌子櫃子邊掩護。
●應立即儘可能去關閉火源電源及危險、危害氣體源,以免發生火災、爆炸及氣體洩漏。
●於地震搖晃間斷或停止時,依照緊急逃生路線(如附件5)往室外空曠處疏散,不得搭乘電梯。
●因地震而引發各項事故(人員受傷、化學品洩漏、火災等)時,發現同仁應立即採取相關處理措施及通報同仁支援;利用火災手按報知機(火警鈴聲示警通報)。
步驟5發生停電緊急應變處理
●停電時立即停止手邊工作,關閉火源與電器電源開關,若有安全疑慮,立即依照緊急逃生路線(如附件5)離開。
●停電狀況發現者,依事故內容通報實驗室負責人與主管,若停電引發各項事故(人員受傷、化學品洩漏、火災等)時,發現同仁應立即通報實驗室負責人。
●在實驗進行中,因停電終止實驗時,首先應將實驗器具密封蓋好,產出的廢棄物密封完整再放置廢棄物收集筒中並噴灑消毒劑,拉下生物操作台的門並關好,拔除不必要使用之插頭,確定跳電或復電時對於儀器不會造成損傷。
依緊急照明燈指示逃生路線出實驗室。
●確認復電後各儀器運作功能正常,若有異常則依各儀器標準操作流程進行檢修或報請維修處理。
附件1
000實驗室生物材料清單
項次
中文名稱
生物材料編號
生物安全等級
英文名稱
1
2
3
4
5
6
7
8
9
附件2
000實驗室生物操作人員教育訓練記錄
日期
教育訓練內容[簡要說明名稱、辦理單位]
姓名
時數
附件3實驗室人員進出登記冊
日期
進入實驗區時間
實驗內容
離開實驗區時間
簽名
附件4:
實驗室生物安全檢查紀錄表
檢查日期:
年月
0000實驗室實驗室編號:
檢查結果標示符號:
v表合乎要求x表未合乎要求#表下班後繼續使用
檢查
項目
檢視要點
檢查結果(日)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
每日檢查項目
無菌操作台
(00台)
Poweroff、門拉下、關燈。
培養箱
(00台)
17:
00後如未使用,培養箱電源應關閉。
水槽
實驗器具是否保持整齊、清潔、定位。
天平
電源關閉。
工作桌
桌面是否整齊清潔。
照明
電源關閉。
空調系統
運作是否正常。
保養與記錄
特殊檢查
環境是否有異常聲音及異味
化學品是否放置於安全儲存處
生物安全操作櫃檢查
更換HEPA(片數)
更換前置濾網
更換UV燈管
維修說明:
功能檢測
檢查人簽名
附件5:
實驗室逃生路線圖(附逃生標示照片)
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