第十四章真菌检验技术.ppt
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掌握真菌的检验方法熟悉真菌标本采集及注意事项;真菌的鉴定程序;真菌药物敏感试验方法了解常用抗真菌药物本章重点:
临床真菌标本的采集和处理真菌的形态学检查、培养技术和鉴定试验真菌药物敏感试验,第一节真菌形态检验技术,一、标本的采集和处理1.标本的采集根据真菌感染部位采集不同的标本,取毛发、皮屑、指(趾)甲等标本,取痰液、脓汁、血液、脑脊液等标本,2.标本采集注意事项,第一节真菌形态检验技术,临床标本,分离培养,直接检查,免疫学检查,观察菌落,生化反应,染色镜检,直接镜检,3.检验程序,核酸检测,其他鉴定试验,形态学检查,病理组织标本,动物实验,镜检,PAS,HE,第一节真菌形态检验技术,二、直接镜检,标本处理液:
(1)KOH溶液适于检查致密的难以透明的材料
(2)生理盐水用于观察真菌的出芽现象(3)水合氯醛-石炭酸-乳酸封固液透明力较强,只限于不透明的标本,镜检,注意真菌与其他混杂物的鉴别,第一节真菌形态检验技术,三、染色镜检革兰染色:
各种真菌均为革兰阳性(图1)乳酸酚棉蓝染色:
染成蓝色(图2)墨汁染色:
背景染成黑色,菌体不着色(图3)荧光染色:
荧光显微镜下发出荧光糖原染色:
多糖成分呈红色,核为蓝色,背景为淡绿色,返回章内容,(图1),(图3),(图2),第一节真菌形态检验技术,第二节真菌培养技术,一、基本条件1.常用工具平皿、试管、接种针、接种环、接种钩、培养箱等,一、基本条件2.培养基真菌营养要求不高,最适pH4.06.0常用的培养基:
第二节真菌培养技术,显色鉴定培养基,真菌特异性酶的底物(无色),产色基团游离(显色),真菌的酶分解代谢基质,原理,第二节真菌培养技术,第二节真菌培养技术,二、培养方法,仅用于培养生长繁殖较快的真菌,观察真菌结构及生长发育过程,多用于菌种传代接种与保存,第二节真菌培养技术,三、生长现象,类酵母型菌落,丝状菌落,观察菌落,生长速度、菌落大小、表面形态、性质、颜色、边缘、底部等,酵母型菌落,返回章内容,第二节真菌培养技术,一、常用生化试验,第三节真菌的鉴定方法,二、免疫学检查,第三节真菌的鉴定方法,三、其它鉴定诊断方法l.厚膜孢子形成试验,接种,玉米粉吐温-80琼脂,25孵育13天,待测菌,每天于显微镜下观察,应用:
白假丝酵母菌的鉴定,方法:
结果:
白假丝酵母菌在72小时内可观察到丰富的假菌丝,假菌丝顶端见12个厚膜孢子,第三节真菌的鉴定方法,2.芽管形成试验,方法:
待测菌+0.51ml血清,37水浴23小时,镜检,应用:
白假丝酵母菌的鉴定,三、其它鉴定诊断方法,结果:
绝大部分白假丝酵母菌可形成典型的放大镜柄状芽管,芽管,第三节真菌的鉴定方法,三、其它鉴定诊断方法,3.动物接种,4.病理组织检查,5.核酸检测,6.真菌毒素的检测,用于分离病原性真菌、确定真菌的致病性、研究抗真菌药物,用于深部真菌感染的诊断,用于真菌的分型鉴定,有ELISA、生物学方法、薄层层析法、高效液相色谱法等多种方法,7.G试验,用于念珠菌、曲霉菌等深部真菌感染的早期诊断,返回章内容,第三节真菌的鉴定方法,第四节真菌药物敏感试验,一、临床常用抗真菌药物,第四节真菌药物敏感试验,二、酵母菌药敏试验方法微量稀释法1试验前准备,RPMI1640培养基(含L-谷氨酰胺、酚红,不含碳酸氢钠),培养基,第四节真菌药物敏感试验,2方法,第四节真菌药物敏感试验,3结果判断,4.质量控制采用标准菌株作为每次测定质控菌株,其MIC应落在预期值范围内,第四节真菌药物敏感试验,二、酵母菌药敏试验方法纸片扩散法1试验前准备,商品化含药物纸片,药物纸片,用无菌生理盐水调整至0.5麦氏单位,待检菌液制备,含葡萄糖和亚甲蓝的M-H琼脂,第四节真菌药物敏感试验,二、酵母菌药敏试验方法纸片扩散法2方法,用无菌棉签蘸取菌液,35孵育1824小时若生长不良可延长至48小时,贴上药物纸片,均匀涂布接种M-H琼脂,第四节真菌药物敏感试验,4.质量控制标准质控菌株的抑菌环直径必须在质控允许范围,二、酵母菌药敏试验方法纸片扩散法,返回章内容,第四节真菌药物敏感试验,
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