QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统培训手册DNA版.docx
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QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统培训手册DNA版
QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统培训手册
DNA版
基因有限公司生命科学组
一、QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统简介
二、QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统安装和维护
三、氮气瓶的安装及使用
四、GelCartridege凝胶卡夹的安装及校正
五、培训所需试剂、仪器及耗材
六、DNA样品演示实验
七、BioCalculatorTM软件基本功能及数据分析
八、常见问题解答
一.QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统介绍
QIAGEN是全球核酸、蛋白质分离纯化试剂和新技术的权威供应商,总部设在德国。
其主打产品是QIAxcel,用于高通量DNA/RNA分离分析,这个产品广泛用于遗传分析,疾病检测以及食品鉴定等方面。
相比其它同类产品而言,其特点是高效,省时,安全,适用于标准化。
(一)产品介绍:
技术参数:
1. 自动加样全自动化96孔加样;
2. 高通量12通道上样,96孔板连续检测;
3. 无需制胶更换式凝胶试剂盒;
4. 快速分析1-1.3小时/96个样品;
5. 高灵敏度PCR产物检测最低DNA浓度为0.1ng/ul;
6. 高分辨率500bp以下达2-5个bp;
7. 数据显示电泳图谱和峰图
8. 体积小便于搬运;
9. 污染小无敞开式EB污染。
10.重量23kg
(二)BioCalculatorTM软件
1.操作简单,多种分离方法可供选择
2.多种内嵌式方法模板适用各种用途
3.数据分析界面友好:
既可用于定性分析也可用于定量分析,一次完成多组数据分析
4.数字化实验数据采集:
●实验数据以电泳峰图和胶图两种形式显示
●可适时电泳峰图和胶图
●电子化实验数据方便储存和传递
二.QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统安装和维护
(一)安装条件
1.位置要求:
稳定水平的操作平台放置设备,远离震荡设备。
2.温度要求:
25℃
3.湿度要求:
40%-95%
4.电源:
100-230V~,50-60Hz,360W(VA)
5.电脑要求:
●Processor处理器:
PentiumIV1.8或更高
●硬盘:
40GB
●内存:
512MBRAM
●显示器:
800x600
●操作系统:
Microsoft®Windows®XP
6.氮气要求:
纯度为99.999%的高纯氮气
7.
(二)维护
用湿布清洁仪器的外表面。
不能灭菌,不需要用化学物质清洁仪器外表面,否则可能会引起表面损坏。
如果矿物油偶尔滴在样品支架或溢出到样品支架时,用热水和肥皂水清洗(和新的卡夹第一次使用时清洗的过程相同)。
凝胶卡夹的储存温度推荐为10℃-30℃,相对湿度为40%-95%。
三.氮气瓶的安装及使用
关于氮气瓶的安装,将由工程师完成或请在工程师指导下完成此工作
1.先将减压阀安装到氮气瓶上
2.
请选择如下图所示规格的转接头,将氮气瓶和仪器连接起来。
安装完成后要确保不能漏气。
3.仪器打开前,先打开氮气瓶总阀,并将减压阀压力调到40psi左右,再开始实验。
4.实验完成后,将减压阀和氮气瓶总阀关闭
四.GelCartridege凝胶卡夹的安装及校正
(一)凝胶卡夹的安装
1.使用前将卡夹中的所有试剂室温平衡,并将卡夹置于盛有DNAWashingSolution的catridegestand中平衡20min.
2.用温和的去污剂清洗盛溶液的盘子,然后用去离子水彻底冲洗干净
3.加8ml的DNAWashingSolution到盛溶液的盘子的WP和WI槽
4.加16ml的SeparationBufferSolution到盛溶液的盘子的BUF槽
5.然后加2ml的矿物油到WP和WI槽,加4ml的矿物油到BUF槽,防治洗液和分离液挥发(图1)
图1
6.加15ul的AlignmentMarker到0.2ml的连管中,每孔加一滴矿物油,然后插入到盛溶液的盘子的MARKER1的位置(图2)
7.加15ul的IntensityCalibrationMarker到彩色的0.2ml的连管中,然后插入到盛溶液的盘子的MARKER2的位置(图2)
图2
8.点击
9.去掉凝胶卡夹后面的封胶带,打开仪器上的卡夹门,将凝胶卡夹正面朝前插入仪器卡夹内,凝胶卡夹上的加密钥匙插入仪器相应的适配器中,关上卡夹门,凝胶卡夹的ID号将会在仪器的控制面板上显示(图3)。
图3
(二)凝胶卡夹的浓度校正
1.双击
快捷图标,进入软件操作,在
图4
2.点击
图5
3.打开文件,点击
图6
4.点击绿色的
图7
5.校正过程结束后,(Cal)会出现凝胶卡夹的ID的后面(图8C)。
图8
6.去掉仪器控制面板
7.程序运行完成后,确认所有通道只有一个峰。
8.在
图9
9.不要选中
图10
10.在结果图表中检查na(normalizedarea)值,所有的通道na值应该在4.500E-003和5.500-003之间,如果超出这个范围,那么必须进行重新校正(图11)
图11
五.培训所需试剂、仪器及耗材
(一)试剂
1.DNAGelCartridge(GC-5000-4)
2.去离子水
(二)仪器及耗材
1.台式离心机
2.移液器
3.0.2mlPCR反应管,Tip头,手套等
以上物品请用户提前准备妥当,我公司培训人员将使用以上物品进行仪器使用的培训工作。
如不具备请及时与培训技术人员联系。
六.DNA样品演示实验
(一)样品准备
PCR样品
提示:
有些PCR的反应kit盐的含量过高,适当稀释能得到更好的结果
(二)实验操作步骤
1.双击
快捷图标,进入软件操作,在
2.点击
3.选择合适的分离方法,如:
OM500(图12A)
4.输入样品类型、位置和分离重复次数(图12B)
5.点击
6.确认所用到的通道均已选中(图12G)
7.检查仪器的状态,Pres1:
OK;Pres2:
OK;SD:
Closed;CD:
Closed。
8.点击
图12
七.BioculatorTM软件基本功能及数据分析
(一)软件的基本功能
图13InstumentControl
显示序列列表,列出了仪器所有的功能
显示当前凝胶卡夹可以使用的方法
分离样品的类型
分离样品的位置
仪器的吸样时间,可以在0-60s之间选择
样品分离的重复次数
如果选中,仪器将自动从A行加样品,依次到B、C、D、E、F、G和H行
输入和样品孔对应的每个样品的名字
锁住仪器内的凝胶卡夹
去除仪器内的凝胶卡夹
定位凝胶卡夹到盛溶液的盘子的WP槽
移动盛溶液的盘子和支架,方便更好溶液和放置样品
上传分离实验中使用的Referencemarker
(二)软件数据分析
1.实验运行结束后,打开
图14
2.检查
然后点击
图15
3.打开
4.以Alignmentmarker条带为基础,出现重排结果(图16)。
图16
5.确定DNA样品的大小和浓度
(1)双击Marker通道上面的彩色条带,放大实验结果,确认所有的峰均在对照阈值之上
(2)打开
选中目的Marker,显示目的Marker的条带(图17)
图17
(3)输入第一条和最后一条Alignmentmarker的大小,如第一条为15pb,最后一条为5000bp(图18,图19)。
图18
图19
(4)点击
图20
(5)点击
图21
(6)打开
图22
八.常见问题解答
Q:
仪器不能打开?
A:
1.检查电源是否连接好
2.保险丝断了,更换保险丝
Q:
仪器不能运行?
A:
1.检查样品门和卡夹门是否关闭
2.没有检测到凝胶卡夹的加密钥匙
3.氮气瓶压力太低
4.USB软件key丢失或破裂,重连USB软件key或更换key
Q:
某些通道的峰迁移慢?
A:
通道中有气泡,用Purge方法去除气泡或更换分离buffer。
Q:
不同通道之间Calibrationmarker的信号有差异?
A:
检查新的凝胶卡夹是否进行校正
Q:
Alignmentmarker信号太弱?
A:
Alignmentmarker降解,更换marker
Q:
运行时不产生信号?
A:
1.样品的体积太少,最少10ul
2.毛细管堵塞,用Purge的方法疏通毛细管,如果不行,更换凝胶卡夹
Q:
电泳条带太宽?
A:
1.DNA样品浓度太高,TEbuffer稀释样品,或减少上样的时间,或选用高浓度分离方法(OH500)
2.通道破裂产生高背景,更好凝胶卡夹
Q:
DNA信号太低?
A:
1.DNA样品浓度太低,增加上样的时间,或选用低浓度分离方法(OL500)
2.样品盐浓度太高,去盐或稀释样品
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