实验室常用洗液配制方法实验室洗液的配制方法.docx
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实验室常用洗液配制方法实验室洗液的配制方法
[实验室常用洗液配制方法]实验室洗液的配制方法
一:
铬酸洗液:
配制浓度各有不同,从5~12%的各种浓度都有。
配制方法大致相同:
取一定量的K2Cr2O7(工业品即可),先用约1~2倍的水加热溶解,稍冷后,将工业品浓H2SO4所需体积
数徐徐加入K2Cr2O7不溶液中(千万不能将水或溶液加入H2SO4中),边倒边用玻璃棒搅拌,并注意不要溅出,混合均匀,俟冷却后,装入洗液瓶备用。
新配制的洗液为红褐色,氧化能力很强。
当洗液用久后变为黑绿色,即说明洗液无氧化洗涤力。
例如,配制12%的洗液500mL。
取60克工业品K2Cr2O7置于100mL水中(加水量不是固定不变的,以能溶解为度),加热溶解,冷却,徐徐加入浓硫酸:
340mL,边加边搅拌,冷后装瓶备用。
二:
碱性高锰酸钾洗液用碱性高锰酸钾作洗液,作用缓慢,适合用于洗涤有油污的器皿。
配法:
取高锰酸钾(KMnO4)4克加少量水溶解后,再加入10%氢氧化钠(NaOH)100mL。
三:
纯酸纯碱洗液根据器皿污垢的性质,直接用浓硫酸(HCL)或浓硫酸(H2SO4)、浓硝酸(HNO3)浸泡
或浸煮器皿(温度不宜太高,否者浓酸挥发刺激人)。
纯碱洗液多采用10%以上的浓烧碱(NaOH)、氢氧化钾(KOH)或碳酸钠(Na2CO3)液浸泡或浸煮器皿(可以煮沸)。
四:
碱性乙醇洗液溶解120克氢氧化钠固体于120ml水中,用95%乙醇稀释至1L。
在铬酸洗液洗涤无效时,用于清洗各种油污;由于碱对玻璃的腐蚀,玻璃磨口不能长期在该洗液中浸泡;须存放于胶塞瓶中,防止挥发、防火,久注易失效
五:
碱性高锰酸钾洗液4克高锰酸钾固体溶于少量水中,再加入100ml10%氢氧化钠溶液
清洗玻璃器皿内的有无或其他有机物质;浸泡后器壁上会析出一层二氧化锰,需用盐酸或盐酸加过氧化氢除去
六:
磷酸钠洗液57克磷酸钠、28克油酸钠溶于470ml水中
清洗玻璃器皿上的残留物;浸泡数分钟后用刷子刷洗
七:
酸性硫酸亚铁洗液含有少量硫酸亚铁溶液
清洗由于贮存高锰酸及洗液而残留在玻璃器皿上的棕色污斑;浸泡后洗刷
八:
硝酸-过氧化氢洗液15%-20%的硝酸加等体积的5%过氧化氢
清除特殊难洗的化学污物久存易分解,应存放于棕色瓶
九:
有机溶剂如三氯乙烯、二氯乙烯、苯、二甲苯、丙酮、乙醇、乙醚、三氯甲烷、四氯化碳、汽油等
清除玻璃器皿上的油脂类、单体原液、聚合体等有机污物,应根据污物性质选者使用
注意毒性、可燃性,用过的废液溶剂应回收
十:
硫代硫酸钠洗液10%的硫代硫酸钠溶液。
可清洗衣物上的碘斑,浸泡后洗刷。
玻璃砂芯器皿清洗剂
过滤沉淀物有效清洗剂
脂肪、脂膏四氯化碳
有机物质混有中铬酸钾的温热浓硫酸浸泡一昼夜
氯化亚铜、铁斑混有氯酸钾的热浓盐酸
硫酸钡热浓盐酸
汞渣热浓硝酸
硫化汞热王水
氯化银氨水或硫代硫酸钠
铝质和硅质残渣用2%氢氟酸、浓硫酸、蒸馏水、丙酮依次漂洗,重复至无酸痕为止
细菌5.72ml浓硫酸、2克硝酸钠、94ml、蒸馏水混合液
水垢盐酸
一、玻璃仪器的洗涤方法
1.洁净剂及其使用范围
最常用的洁净剂有肥皂、合成洗涤剂(如洗衣粉)、洗液(清洁液)、有机溶剂等。
肥皂、合成洗涤剂等一般用于可以用毛刷直接刷洗的仪器,如烧瓶、烧杯、试剂瓶等非计量及非光学要求的玻璃仪器。
肥皂、合成洗涤剂也可用于滴定管、移液管、量瓶等计量玻璃仪器的洗涤,但不能用毛刷刷洗。
洗液多用于不能用毛刷刷洗的玻璃仪器,如滴定管、移液管、量瓶、比色管、玻璃垂熔漏斗、凯氏烧瓶等特殊要求与形状的玻璃仪器;也用于洗涤长久不用的玻璃仪器和毛刷刷不下的污垢。
2.洗液的配制及说明
铬酸清洁液的配制:
处方1处方2
重铬酸钾(钠)10g200g
纯化水10ml100ml(或适量)
浓硫酸100ml1500ml
制法:
称取处方量之重铬酸钾,于干燥研钵中研细,将此细粉加入盛有适量水的玻璃容器内,加热,搅拌使溶解,待冷后,将此玻璃容器放在冷水浴中,缓慢将浓硫酸断续加入,不断搅拌,勿使温度过高,容器内容物颜色渐变深,并注意冷却,直至加完混匀,即得。
说明:
(1)硫酸遇水能产生强烈放热反应,故须等重铬酸钾溶液冷却后,再将硫酸缓缓加入,边加边搅拌,不能相反操作,以防发生爆炸。
(2)清洁液专供清洁玻璃器皿之用,它能去污去热原的作用的原因为本品具有强烈的氧化作用。
重铬酸钾与浓硫酸相遇时产生具有强氧化作用的铬酐:
K2CrO7+H2SO4→H2CrO7+K2SO4
↓
2CrO3+H2O→Cr2O3+3[O]
浓硫酸是一个含氧酸,在高浓度时具有氧化作用,加热时作用更为显著:
H2SO4→H2O+SO2+[O]
Δ
K2CrO7+3SO2+H2SO4→Cr2(SO4)3+K2SO4+H2O
(3)铬酸的清洁效力之大小,决定于反应中产生铬酐(CrO3)的多少及硫酸浓度之大小。
铬酐越多,酸越浓,清洁效力越好。
(4)用清洁液清洁玻璃仪器之前,最好先用水冲洗仪器,洗取大部分有机物,尽可能仪器空干,这样可减少清洁液消耗和避免稀释而降效。
(5)本品可重复使用,但溶液呈绿色时已失去氧化效力,不可再用,但能更新再用。
更新方法:
取废液滤出杂质,不断搅拌缓慢加入高锰酸钾粉末,每升约6~8g,至反应完毕,溶液呈棕色为止。
静置使沉淀,倾取上清液,在160℃以下加热,使水分蒸发,得浓稠状棕黑色液,放冷,再加入适量浓硫酸,混匀,使析出的重铬酸钾溶解,备用。
(6)硫酸具有腐蚀性,配制时宜小心。
(7)用铬酸清洁液洗涤仪器,是利用其与污物起化学反应的作用,将污物洗去,故要浸泡一定时间,一般放置过夜(根据情况);有时可加热一下,使有充分作用的机会。
3.洗涤玻璃仪器的方法与要求
(1)一般的玻璃仪器(如烧瓶、烧杯等):
先用自来水冲洗一下,然后用肥皂、洗衣粉用毛刷刷洗,再用自来水清洗,最后用纯化水冲洗3次(应顺壁冲洗并充分震荡,以提高冲洗效果)。
计量玻璃仪器(如滴定管、移液管、量瓶等):
也可用肥皂、洗衣粉的洗涤,但不能用毛刷刷洗。
(2)精密或难洗的玻璃仪器(滴定管、移液管、量瓶、比色管、玻璃垂熔漏斗等):
先用自来水冲洗后,沥干,再用铬酸清洁液处理一段时间(一般放置过夜),然后用自来水清洗,最后用纯化水冲洗3次。
(3)洗刷仪器时,应首先将手用肥皂洗净,免得手上的油污物沾附在仪器壁上,增加洗刷的困难。
(4)一个洗净的玻璃仪器应该不挂水珠(洗净的仪器倒置时,水流出后器壁不挂水珠)。
实验室各种洗液
1.铬酸洗涤液
铬有致癌作用,因此配制和使用洗液时要极为小心,常用两种配制方法如下:
⑴取100mL工业浓硫酸置于烧杯内,小心加热,然后慢慢加入5g重铬酸钾粉末,边加边搅拌,待全部溶解并缓慢冷却后,贮存在磨口玻璃塞的细口瓶内。
⑵称取5g重铬酸钾粉末,置于250mL烧杯中,加5mL水使其溶解,然后慢慢加入100mL浓硫酸,溶液温度将达80℃,待其冷却后贮存于磨口玻璃瓶内。
2.其他洗涤液
⑴工业浓盐酸:
可洗去水垢或某些无机盐沉淀。
⑵5%草酸溶液:
用数滴硫酸酸化,可洗去高锰酸钾的痕迹。
⑶5%~10%磷酸三钠(Na3PO4?
12H2O)溶液:
可洗涤油污物。
⑷30%硝酸溶液:
洗涤二氧化碳测定仪及微量滴管。
⑸5%~10%乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)溶液:
加热煮沸可洗脱玻璃仪器内壁的白色沉淀物。
⑹尿素洗涤液:
为蛋白质的良好溶剂,适用于洗涤盛过蛋白质制剂及血样的容器。
⑺有机溶剂:
如丙酮、乙醚、乙醇等可用于洗脱油脂、脂溶性染料污痕等,二甲苯可洗脱油漆的污垢。
⑻氢氧化钾的乙醇溶液和含有高锰酸钾的氢氧化钠溶液:
这是两种强碱性的洗涤液,对玻璃仪器的侵蚀性很强,可清除容器内壁污垢,洗涤时间不宜过长,使用时应小心慎重。
实验室常用溶液配制
一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺(Spermidine):
溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):
溶解3.g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammoniumacetate):
将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):
加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,
须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):
在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassiumacetate):
溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl):
溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodiumacetate):
溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/LEDTA:
配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA?
2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/LHEPES:
将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/LHCl:
加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/mlIPGT:
溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:
溶解20.3gMgCl2?
6H2O于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/LPMSF:
溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。
分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K(proteinaseK):
将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-freeRNase):
溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH5.0)。
溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。
用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。
(配制过程中要戴手套)
5mol/L氯化钠(NaCl):
溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。
10N氢氧化钠(NaOH):
溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸钠):
称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):
溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
100%三氯乙酸(TCA):
在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
(稀释液应在临用前配制)
2.5%X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):
溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。
100×Denhardt试剂(Denhardt’sregent)
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
2%聚蔗糖(Ficoll,400型)2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)2%BSA(组分V)水2g2g2g
加水至总体积为100ml,依照上表称取各组分,溶于水中定容。
过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液(standardDNAligasebuffer)(粘端、平端连接)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/LTris-HCl:
5ml1mol/L贮液,100mmol/LMgCl2:
1ml1mol/L贮液,100mmol/LDTT:
1ml1mol/L贮液,2mmol/LATP:
200ul100mmol/L贮液,5mmol/L盐酸亚精胺(可选):
50ul1mmol/L贮液,0.5mg/mlBSA(组分V)(可选):
0.5ml10mg/mL贮液,水:
2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃。
100mmol/LdNTP溶液(dNTPsolutions)
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/LdNTP混合液
成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/LdATP
10mmol/LdCTP
10mmol/LdGTP
10mmol/LdTTP
水2ul100mmol/LdATP贮液
2ul100mmol/LdCTP贮液
2ul100mmol/LdGTP贮液
2ul100mmol/LdTTP贮液
12ul
20%PEG8000/2.5MNaCl
成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量
质量浓度为20%聚乙二醇
2.5mol/L氯化钠
水20g
50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠
补足100ml
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×SSC
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
300mmol/L柠檬酸三钠(二水)
3mol/L氯化钠
水88.2g
175.3g
补足1L
溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。
DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水
加100ulDEPC于100ml水中,使DEPC的体积分数为0.1%。
在37℃温浴至少12h,然后在15psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。
DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺(deionizedformamide)
直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。
经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。
磷酸缓冲液(phosphatebuffer)
按照下表所给定的体积,混合1mol/L的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。
配制1mol/L的磷酸二氢钠(NaH2PO4?
H2O)贮液:
溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:
溶解142g于足量水中使终体积为1L。
1mol/L磷酸二氢钠(ml)1mol/L磷酸氢二钠(ml)最终pH值
877
850
815
775
735
685
625
565
510
450
390
330
280123
150
185
225
315
375
435
490
550
610
670
7206.0
6.1
6.2
6.3
6.4
6.5
6.6
6.7
6.8
6.9
7.0
7.1
7.2
TE(用于悬浮和贮存DNA)
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/LTris-HCl
1mmol/LEDTA
水1ml1mol/LTris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)
200ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
98.8ml
Tris缓冲液(Tris-HClbuffer)
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水调整终体积至1L。
浓盐酸的体积(ml)pH
8.6
14
21
28.5
38
46
56
66
71.3
769.0
8.8
8.4
8.2
8.0
7.8
7.6
7.4
7.2
二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
2mol/LTris碱
1mol/L乙酸
100mmol/LEDTA
水242g
57.1ml的冰乙酸(17.4mol/L)
200ml的0.5mol/LEDTA(pH8.0)
补足1L
5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
445mmol/LTris碱
445mmol/L硼酸盐
10mmol/LEDTA
水54g
27.5g硼酸
20ml的0.5mol/LEDTA(pH8.0)
补足1L
染料
1%溴酚蓝(pomophenolblue)
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FF(xylenecyanoleFF)
溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭(ethidiumpomide)
小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。
用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。
凝胶上样液(gelloadingsolutions)
6×碱性凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.3N氢氧化钠
6mmol/LEDTA
18%聚蔗糖(400型)
0.15%溴甲酚绿
0.25%二甲苯青FF
水300ul10N氢氧化钠
120ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
1.8g
15mg
25mg
补足到10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF
5mmol/LEDTA
15%聚蔗糖(400型)
水1.5ml1%溴酚蓝
1.5ml1%二甲苯青FF
100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
1.5g
补足到10ml
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25%溴酚蓝
0.25%二甲苯青FF
15%聚蔗糖(400型)
水2.5ml1%溴酚蓝
2.5ml1%二甲苯青FF
1.5g
补足到10ml
6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF
5mmol/LEDTA
50%甘油
水1.5ml1%溴酚蓝
1.5ml1%二甲苯青FF
100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
3ml
3.9ml
6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF
5mmol/LEDTA
40%聚蔗糖
水1.5ml1%溴酚蓝
1.5ml1%二甲苯青FF
100
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