MHC-Ⅰ类分子抗原呈递相关蛋白与乙肝相关性研究.pdf
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124新疆医科大学学报JOURNAIOFXINJIANGMEDICALUNIVERSITY2010Feb,33
(2)MHCI类分子抗原呈递相关蛋白与乙肝相关性研究海力曼衣拉洪,海来提居来提,伊力木努尔甫拉提,徐磊,海米提阿布都力木(新疆医科大学基础医学院病理学教研室,组织胚胎学教研室,新疆乌鲁木齐830011)摘要:
目的探讨正常肝组织与乙型肝炎中TAP、TAP、HSP70、HSP90、CNX、?
2一MG蛋白表达及相关关系。
方法以内源性生物素阻断S-P法来检测32例乙肝患者和l6例健康对照者石蜡包埋肝组织的TAP、TAPz、HSP70、HsPg0、CNX、p2一MG蛋白表达情况。
结果p2一MG、TAP、HSP70、HSP90、CNX蛋白在乙肝组表达高于正常组(P均O05);通过相关性分析发现,TAP蛋白与HSP70蛋白在正常组中呈相关性(Yz=16000,P0008)。
结论TAP、TAPz、HSP70、HSP90、CNX、2MG蛋白均在乙肝组表达高于正常组(PO05),提示这些蛋白均参与MHCI类分子的乙肝病毒抗原处理及提呈过程,并且可以做为诊断乙肝的临床指标。
关键词:
乙肝;MHCI类分子;TAPl;TAP2;HSP70;HSP90;CNX;B2一MG中盈分类号:
R34;R5751文献标识码:
A文章编号:
lOO95551(2010)02012404StudiesontheexpressionofproteinsassociatedwithMHCclassIantigenpresentationintheliverandtheirassociationwithhepatitisBHailimanYilahong,HailaitiJulaiti,YiliminuerPulatietal(DepartmentofPathology,CollegeofPreclinicalMedicine,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)Abstract:
ObjectiveToevaluatetheexpressionlevelsoftheMHCclassIantigenpresentation-associatedproteins:
transportassociatedantigenprocessingproteinsTAPlandTAP2,heatshockprotein(HSP)70andHSP90,calnexin(CNX),andB2microglobulin(132一MG),innormalandhepatitisBlivertissues,anditsassociationwithhepatitisBMethodsTheexpressionofproteinsTAP】,TAP2,HSPT0,HSP90,CNX,and2一MGinparaffinembeddedlivertissuesfrom32patientswithhepatitisB(ashepatitisBgroup)and16healthyindividuals(ascontrolgroup)weredetectedbystreptoavidinbiotinperoxidase(S-P)basedimmunohistochemistrymethodwithblockingendogenousbiotinResultsTheexpressionlevelofp2一MG,TAP,,HSP70,HSP90andCNXinlivertissuesfromhepatitispatientswashigherthanthatinnormalgroup(P005)ThecorrelationanalysissuggestedacorrelativerelationshipbetweenexpressionofTAPzandHSP70inthenormallivertissues(X一16000,PO008)ConclusionTheexpression0fTAP1,TAP2,HSPT0,HSP90,CNX,andp2MGproteinswashigherinthehepatitisBgroupthanthatinthenormalgroup(PO05)ThisresultssuggestthattheseproteinsareinvolvedintheprocessandpresentationofMHCclassIantigensofhepatitisBvirus,andcouldbeusedasmarkersforcliniea1diagnosisofhepatitisBKeywords:
HepatitisB;MHCclassI;TAP1;TAP2;HSPT0;HSP90;CNX;p2一MG乙肝病毒(HBV)可感染人肝脏,导致肝炎、肝硬化或肝癌。
HBV感染为传染病发病率的第2位,死亡率的第3位,每年死于HBV相关疾病的人数约100万;全球HBV携带者约38亿,我国约13基金项目:
国家自然科学基金资助课题(30460046)作者简介:
海力曼(1963一),女(维吾尔族),副教授,研究方向分子病理学。
通讯作者:
海米提阿布都力木(1963一),男(乌孜别克族),教授,硕士生导师,研究方向:
分子病理学。
E-mail:
haimiti163com。
新疆医科大学学报JOURNALOFXINJIANGMEDICALUNIVERSITY2010Feb,33
(2)125亿。
目前已知内源性抗原通过是主要组织相容性复合体(MHC),MHCI类分子提呈给细胞毒性T细胞是机体细胞免疫识别的重要阶段1。
抗原处理相关转运蛋白(TAP、TAP。
)负责抗原肽从细胞浆到内质网的转运,在MHCI类分子的抗原处理及提呈过程中除了TAP、TAP外,热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白90(HSP90),钙联蛋白(CNX)、p2一微球蛋白(I32一MG)也发挥重要作用。
所以TAP1、TAP2、HSP70、HSP90、CNX、t72一MG中的任何一样或几个的结构和功能障碍将导致细胞表面MHCI类分子表达缺失,这成为接种乙肝疫苗不能对此产生免疫的一种原因。
最近发现TAP基因Codon637位点的多态性对于乙肝的发生有着显著的易患关联,其杂合、纯合形式分别增加乙肝患病风险468倍和634倍。
而具有AG单倍体的个体对于乙肝的发生具有更强的易感关联,其增加乙肝患病风险约为l985倍。
但尚未见TAP1、TAP,、HSPT0、HSP90、CNX、172一MG基因表达与乙肝关系的报道。
因此对TAP、TAP、HSP70、HSP90、CNX、J32一MG基因表达与HBV感染的关联性进行研究,将有助于认识肝细胞免疫逃逸实质。
l材料和方法11材料111标本来源收集20052007年间新疆医科大学第一附属医院病理科活检经诊断的乙肝的组织标本32例(乙肝组)和新疆医科大学病理教研室提供的正常肝组织标本16例(正常组)。
112实验试剂TAP、TAP、82一MG、HSP70、HSP90、CNX兔抗人多克隆抗体分别购自Abgent(美国)、AtlasAntibodies(瑞典)、DakoCytomation(丹麦)、CellSignaling(美国)、CellSignaling(美国)和ProteinTechGroup(美国),HistostainplusKit、DAB显色试剂盒购自深圳晶美生物。
12方法121内源性生物素阻断免疫组化SP法检测结果判定免疫组化染色以子肝细胞染成棕黄色为阳性判定标准。
TAP。
、TAP、HSP70、HSP90、CNX、j2一MG大部分在肝血窦内皮细胞、肝巨噬细胞、肝细胞胞质及细胞膜表达,染色后出现棕黄色颗粒为阳性细胞。
光学显微镜下全视野观测,按阳性细胞在组织中所占面积分为5个等级:
75为(+)。
13统计学处理采用SPSS130统计软件包对数据进行处理,等级资料采用两样本比较的秩和检验,相关性采用列联系数表示。
检验水准a一005。
2结果21两组2一MG蛋白表达比较p2一MG蛋白在乙肝组的肝细胞胞浆、胞膜、血窦内皮以及巨噬细胞中的表达均高于正常组(Z值分别为一5384、一5988、一5992、一6OO1,P均001),结果见表1。
表1i2-MG蛋白在乙肝组与正常肝组中表达+十+22两组CNX蛋白表达比较CNX蛋白在乙肝组的肝细胞胞浆、胞膜、血窦内皮以及巨噬细胞中的表达均高于正常组(Z值分别为一5666、一6113、一6055、一6067,P均GOO1),结果见表2。
表2CNX蛋白在乙肝组与正常肝组中表达23两组TAP蛋白表达比较TAP蛋白在乙肝组的肝细胞胞浆、胞膜、血窦内皮以及巨噬细胞中的表达均高于正常组(z值分别为一5939、一6036、一6024、一6090,P均G001),结果见表3。
表3TAP,蛋白在乙肝组与正常肝组中表达TAP+126新疆医科大学学报JOURNALOFXINJIANGMEDICA1UNIVERSITY2010Feb,33
(2)24两组TAP蛋白表达比较TAP。
蛋白在乙肝组的肝细胞胞浆、胞膜、血窦内皮以及巨噬细胞中的表达均高于正常组(Z值分别为一5473、一6061、-6076、-6043,P均O01),结果见表4。
裹4TAP2叠自在乙肝组与正常肝组中表达+25两组HSP7O蛋白表达比较HSP70蛋白在乙肝组的肝细胞胞浆、胞膜、血窦内皮以及巨噬细胞中的表达均高于正常组(Z值分别为6146、一6335、一6264、一6214,P均001),结果见表5。
一26两组HSP90蛋白表达比较HSP90蛋白在乙肝组的肝细胞胞浆、胞膜、血窦内皮以及巨噬细胞中的表达均高于正常组(z值分别为一6308、一6696、一6790、一6670,P均OO1),结果见表6。
27两组MHCI类分子抗原呈递相关蛋白表达的相关性分析在正常肝组胞浆中TAP。
、HSP70表达具有相关性(X一16000,PO008),见表7。
表5HSP70蛋白在乙肝组与正常肝组中表达HSP70+表6HSPg0蛋白在乙肝组与正常肝组中表达表7MHC-I类分子抗原呈递相关蛋白表达在乙肝组与正常组中相关性乙肝组(n一32)肝细胞胞浆肝细胞胞膜血窭内皮巨噬细胞正常肝组(=16)肝细胞胞浆肝细胞胞膜血窦内皮巨噬细胞3讨论B2一MG是MHC-I类抗原分子的6轻链,研究表明,肿瘤的发生、发展与p2一MG关系密切,B2一MG对于MHGI类分子在细胞表面稳定表达和有效呈递抗原肽必不可少,并且B2一MG能促进抗原肽与细胞表面MHC_I类分子的结合。
Elefsiniotis等3认为血清中p2一MG的水平可预测乙肝病毒的活动。
Yegane等n研究显示G2一MG的浓度是于扰素治疗慢性乙型肝炎病人治疗效果判断指标。
本实验结果显示62一MG蛋白在乙肝组表达高于正常组,提示I32MG蛋白的表达可以作乙肝病人治疗效果的判断指标。
CNX是一种分子伴侣,帮助MHc-I类分子正确折叠,CNX低表达或缺失可使MHCI类分子不能形成有功能的二聚体而导致MHCI类分子表达下调一。
本实验结果显示,CNX蛋白乙肝组表达高于正常组,提示CNX蛋白在乙肝患者中高表达。
人类抗原处理相关转运蛋白(TAP)基因位于第6号染色体短臂MHCII区域内HLADQlOOOOOOO驼驼2O00OOOOOOOO311甜:
21OO0M:
22OOO1OOOu:
25001新疆医科大学学报JOURNALOFXINJIANGMEDICALUNIVERSITY2010Feb,33
(2)127B1与DPBI之问,是一种分布于内质网膜和高尔基体顺面膜上,属于ATP结合匣超家族的转运蛋白,在机体的细胞免疫中起转运内源性抗原肽的作用,其包括TAP及TAP:
两个基因座,是多态性基因。
王萃明等lI6研究发现,TAP基因多态性与HBV感染及预后密切相关,即TAP一651CC可能是防止HBV感染的保护性基因,而TAP-651Rc可能为HBV的易感基因;TAP:
一687SS基因型对肝脏功能有保护作用;携带TAP一687QQ基因型者感染HBV后不易出现无症状携带状态。
夏天等7研究显示TAP。
一0101等位基因型携带者易感慢性乙型肝炎和乙型肝炎并发肝硬化,而TAP一0201则表现出对慢性乙型肝炎的抗性。
两者均与HBV感染的预后似有一定相关。
Xu等研究发现TAP一637和TAP。
一651位点与乙型肝炎病毒感染相关。
本实验结果TAP蛋白在乙肝组表达高于正常组,TAPz蛋白在乙肝组表达亦高于正常组,提示该蛋白可以做诊断乙肝的临床指标。
HSP广泛存在于原核和真核生物中,是一类高度保守的蛋白质,HSP与具有不同功能的多种蛋白的折叠、亚基的组成、细胞内运输及降解等过程,从而调节靶蛋白的活性和功能lg。
HSP按分子量大小分为4个家族:
HSP70家族、HsPg0家族、HSP60家族和小分子HSP家族(HSP27)。
HSP具有保护细胞内环境稳定、提高细胞对应激原的耐受性和协同免疫作用。
在病原体感染宿主后,宿主体内许多细胞的HSP表达增高。
也有一些体外实验证明,细胞在受到某些病毒(包括DNA病毒和RNA病毒)感染后可以诱导HSP家族不同成员的过度表达。
蒋业贵等口。
在对慢性乙型肝炎肝组织中主要热休克蛋白的表达及意义研究中发现,慢性乙肝的HSP70和HSP90表达阳性率明显高于正常肝组织。
与本实验结果也显示,HSP70和HSP90蛋白在乙肝组表达高于正常组,说明HBV在肝细胞内感染可诱导HSP70和HSP90表达增加,可作为临床诊断指标。
本研究通过相关性分析发现,TAP。
蛋白与HAP70蛋白的表达在正常组织中具有相关性,说明TAP蛋白与HAP70蛋白在正常肝组中起协同作用。
总之,TAPl、TAP2、HSP70、HSP90、CNX、t32一MG蛋白均在乙肝组中的表达高于正常组(PO01),提示这些蛋白均参与MHCI类分子的乙肝病毒抗原处理及提呈过程,可以做诊断乙肝的临床指标。
参考文献:
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- MHC 分子 抗原 呈递 相关 蛋白 乙肝 相关性 研究