叶利民的微生物实验教案doc.docx
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叶利民的微生物实验教案doc
实验1培养基的配制
一、实验目的和内容
目的:
学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤。
内容:
1.牛肉膏蛋白陈培养基的配制。
2.高氏1号培养基的配制。
3.马丁氏培养基的配制。
二、实验材料和用具
牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/LNaOH、lmol/LHCl、KNO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O。
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布、漏斗、漏斗架、胶管、止水夹等。
三、操作步骤
(一)牛肉膏蛋白胨培养基的配制
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
其配方如下:
牛肉膏3g,蛋白胨10g,Nacl5g,琼脂15~20g,水1000mL,PH7.4~7.6
1.称药品 按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片。
蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。
2.加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分。
3.调pH检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/LNaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围。
若偏碱,则用lmol/LHCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
4.过滤液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察。
但是供一般使用的培养基,这步可省略。
5.分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
分装量:
固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面。
分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。
半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
6.加棉塞试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞。
棉塞的形状、大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。
要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落。
有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞。
有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。
7.包扎加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。
若培养基分装于试管中,则应以5支或7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好。
然后用记号笔注明、培养基名称、组别、日期。
8.灭菌将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min。
如因特殊情况不能及时灭菌,则应故人冰箱内暂存。
9.摆斜面灭菌后,如制斜面,则需趁热将试管口端搁在一根长木条上,并调整斜度,便斜面的长度不超过试管总长的1/2。
10.无菌检查将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24~48h,无菌生长即可使用,或贮存于冰箱或清洁的橱内,备用。
(二)高氏l号培养基的配制
高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。
其配方如下:
可溶性淀粉20g,KNO31g,NaCl0.5g,K2HPO4·3H2O0.5g,MgSO4·7H2O0.5g,FeSO4·7H2O0.01g,琼脂15~20g,水1000mL,pH7.4~7.6。
l.称量和溶解先计算后称量,按用量先称取可溶性淀粉,放入小烧杯中,并用少量冷水将其调成糊状,再加至少于所需水量的水,继续加热,边加热边搅拌,至其完全溶解。
再加入其他成分依次溶解。
对微量成分FeSO4·7H2O可先配成高浓度的贮备液后再加入,方法是先在1000mL中加入1g的FeSO4·7H2O,配成浓度为0.01g/mL的贮备液,再在1000mL培养基中加入以上贮备液1mL即可。
待所有药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。
如要配制固体培养基,其琼脂溶解过程同牛肉膏蛋白胨培养基配制。
2.pH调节、分装、包扎及无菌检查同牛肉膏蛋白胨培养基配制。
(三)马丁氏培养基的配制
马丁氏培养基是用于分离真菌的选择培养基。
其配方如下:
K2HPO41g,MgSO4·7H2O0.5g,蛋白胨5g,葡萄糖l0g,琼脂15~20g,水1000mL,自然pH。
1.称量和溶解先计算后称量,按用量称取各成分,并将其溶解在少于所需的水中。
待各成分完全溶解后,补充水分到所需体积。
再将孟加拉红配成1%的水溶液,在1000mL培养液中加入以上孟加拉红溶液3.3mL,混匀后,加入琼脂加热融化,方法同牛肉膏蛋白胨培养基配制。
2.分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白膝培养基配制。
3.链霉素的加入链霉素受热容易分解,所以临用时,将培养基融化后待温度降至45℃左右时才能加入。
可先将链霉素配成1%的溶液(配好的链霉素溶液保存于-20℃),在100mL培养基中加1%链霉素0.3mL,使每毫升培养基中合链霉素30μg。
四、注意事项
称药品用的牛角匙不要混用,称完药品应及时盖紧瓶盖。
调pH时要小心操作,避免回调。
不同培养基各有配制特点,要注意具体操作。
五、实验报告
记录本实验配制培养基的名称、数量,并图解说明其配制过程,指明要点。
六、问题和思考
l.配制培养基有哪几个步骤?
在操作过程中应注意些什么问题?
为什么?
2.培养基配制完成后,为什么必须立即灭菌?
若不能及时灭菌应如何处理?
已灭菌的培养基如何进行无菌检查?
3.试设计实验对饮料进行无菌检查。
实验2高压蒸汽灭菌
一目的要求
1.了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。
2.学习高压蒸汽灭菌的操作方法。
二基本原理
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气阀,继续加热,此时由于蒸汽不能溢出,而增加了灭菌锅内的压力,从而使沸点增高,得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
在同一温度下,湿热的杀菌效力比干热大。
其原因有三:
一是湿热中细菌菌体吸收水分,蛋白质较易凝固,因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低(表2—1),二是湿热的穿透力比干热大(表2—2),三是湿热的蒸汽有潜热存在。
1g水在100℃时,由气态变为液态时可放出2.26kJ(千焦)的热量。
这种潜热,能迅速提高被灭菌物体的温度,从而增加灭菌效力。
表2—1蛋白质含水量与凝固所需温度的关系
卵白蛋白含水量/%
30分钟内凝固所需温度/℃
50
56
25
74~80
18
80~90
6
145
0
160~170
在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时,灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要,因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压,所以,当水蒸汽中含有空气时,在同一压力下,含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。
灭菌锅内留有不同分量空气时,压力与温度的关系见(表2—3)
表2-2干热温热穿透力及灭菌效果比较
温度/℃
时间/h
透过布层的温度/℃
灭菌
20层
10层
100层
干热130-140
4
86
72
70.5
不完全
湿热105.3
3
101
101
101
完全
表2—3灭菌锅留有不同分量空气时,压力与温度的关系
压力数
全部空气排出时的温度/℃
2/3空气排出时的温度/℃
1/2空气排出时的温度/℃
1/3空气排出时的温度/℃
空气全不排出时的温度/℃
Mpa
Kg/cm2
Ib/in2
0.03
0.35
5
108.8
100
94
90
72
0.07
0.70
10
115.6
109
105
100
90
0.10
10.5
15
121.3
115
112
109
100
0.14
1.40
20
126.2
121
118
115
109
0.17
1.75
25
130.0
126
124
121
115
0.21
2.10
30
134.6
130
128
126
121
现在法定压力单位己不用磅和kg/cm2表示,而是用Pa或bar表示,其换算关系为:
1kg/cm2=98066.5Pa;1Ib/in2=6894.76Pa.
一般培养基用0.1Mpa(相当于15Ib/in2或1.05kg/cm2),121.5℃,15~30min可达到彻底灭菌的目的。
灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。
例如含糖培养基用0.06Mpa(8Ib/in2或0.59kg/cm2)112.6℃灭菌,然后以无菌操作手续加入灭菌的糖溶液。
又如盛于试管内的培养基以0.1Mpa,121.5℃灭菌20min即可,而盛于大瓶内的培养基最好以0.1Mpa,122℃灭菌30min。
实验中常用的非自控高压蒸汽灭菌锅有卧式(图2-2,A)和手提式(图2—2,B)二种,其结构和工作原理相同,本实验以手提式高压蒸汽灭菌锅为例,介绍其使用方法,有关自控高压蒸汽灭菌锅(autoclave)的使用可参照厂家说明书。
三器材
牛肉膏蛋白胨培养基,培养皿(6套一包),手提式高压蒸汽灭菌锅等。
四操作步骤
1.首先将内层锅取出,再向外层锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。
切勿忘记加水,同时水量不可过少,以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。
2.放回内层锅,并装入待灭菌物品。
注意不要装得太挤,以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。
三角烧瓶与试管口端均不要与锅壁接触,以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
3.加盖,并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。
再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓,使螺栓松紧一致,勿使漏气。
4.用电炉或煤气加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除锅内的冷空气。
待冷空气完全排尽后,关上排气阀,让锅内的温度随蒸汽压力增加到逐渐上升。
当锅内压力升到所需压力时,控制热源,维持压力至所需时间。
本实验用0.1Mpa,121.5℃,20min灭菌。
灭菌的主要因素是温度而不是压力。
因此锅内冷空气必须完全排尽后,才能关上排气阀,维持所需压力。
5.灭菌所需时间到后,切断电源或关闭煤气,让灭菌锅内温度自然下降,当压力表的压力降至“0”时,打开排气阀,旋松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品。
压力一定要降到“0”时,才能打开排气阀,开盖取物。
否则就会因锅内压力突然下降,使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口,造成棉塞沾染培养基而发生污染,甚至灼伤操作者。
6.将取出的灭菌培养基,需摆斜面的则摆成斜面,然后放入37℃温箱培养24h,经检查若无杂菌生长,即可待用。
五实验报告
l.结果
检查培养基灭菌是否彻底。
2.思考题
(1)高压蒸汽灭菌开始之前,为什么要将锅内冷空气排尽?
灭菌完毕后,为什么待压力降低“0”时才能打开排气阀,开盖取物?
(2)在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时,怎样杜绝一切不安全的因素?
(3)灭菌在微生物实验操作中有何重要意义?
(4)黑曲霉的孢子与芽孢杆菌的孢子对热的抗性哪个最强?
为什么?
实验3土壤的稀释分离、纯化微生物及无菌操作技术
一、实验目的和内容
目的:
学习从土壤中分离微生物的方法,学习无菌操作技术。
内容:
l.用稀释法分离细菌、放线菌和霉菌。
2.用平板划线方法分离微生物。
3.学习斜面接种及穿刺接种等无菌操作技术。
二、实验材料和用具
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和普通变形菌(Proteusvulgaris)斜面菌种。
已灭菌的牛肉膏、高氏1号、土豆蔗糖固体培养基各1瓶,49.5mL无菌水(带玻璃珠)1瓶,4.5mL无菌水6管,80%乳酸,10%酚液,95%乙醇。
无菌培养皿12套,1mL无菌移液管10支,土壤样品及天平、称量纸、药勺、试管架、玻璃铅笔、橡皮头(用75%乙醇浸泡)、玻璃刮。
三、操作步骤
(一)土壤稀释分离
1.取土壤取表层以下5—10cm处的土样,放入无菌的袋中备用,或放在4℃冰箱中暂存。
2.制备稀释液(要无菌操作)
(1)制备土壤悬液:
称土样0.5g,迅速倒入带玻璃珠的49.5mL无菌水瓶中(玻璃珠用量以充满瓶底力最好),振荡5~10min,使土样充分打散,即成为10-2的土壤悬液。
(2)稀释:
用无菌移液管吸10-2的土壤悬液0.5mL,放入4.5mL无菌水中即为10-3稀释液,如此重复,可依次制成10-3~10-8的稀释液(图3-1)。
注意:
操作时管尖不能接触液面,每一个稀释度换用一支移液管,每次吸入土液后,要将移液管插入液面,吹吸3次,每次吸上的液面要高于前一次,以减少稀释中的误差。
3.混菌法测定菌落数的方法
(1)细菌:
取10-7、10-6两管稀释液各1mL,分别接人相应标号的平皿中,每个稀释度接两个平皿。
然后取冷却至50℃的牛肉膏琼脂培养基,分别倒入以上培养皿中(装量以铺满皿底高1.5~2mm为宜),迅速轻轻摇动平皿,使菌液与培养基充分混匀,但不沾湿皿的边缘,待琼脂凝固即成细菌平板。
倒平板时要注意无菌操作,
(2)放线菌:
取10-5、10-4两管稀释液,在每管中加入10%酚液5~6滴,摇匀,静置片刻,然后分别从两管中吸出1mL加入相应标号的平皿中,选用高氏1号培养基,用与细菌相同的方法倒入平皿中,便可制成放线菌平板。
(3)霉菌:
取10-2、10-3两管稀释各1mL,分别接入相应标号的平皿中,每个稀释度接两个平皿。
在融化的土豆蔗糖培养基中,每100mL加入灭菌的乳酸1mL,轻轻摇匀,然后用与细菌相同的方法倒入平皿中,便可制成霉菌的平板。
4.培养将接种好的细菌、放线菌、霉菌平板倒置,即皿盖朝下放置,于28~30℃中恒温培养,细菌培养1~2d,放线菌培养5~7d,霉菌培养3~5d。
观察生长的菌落,用于进一步纯化分离或直接转接斜面。
(二)平板制作及划线分离方法。
1.倒平板按无菌操作要求,在火焰旁操作(图3—2),做法如3
(1)。
2.划线分离使用接种环,从待纯化的菌落或待分离的斜面菌种只沾取少量菌样,在相应培养基平板中划线分离,划线的方法多样,目的是获得单个菌落,
3.培养方法同“土壤稀释分离”。
四、注意事项
1.一般土壤中,细菌最多,放线菌及霉菌次之,而酵母菌主要见于果园及菜园土壤中,故从土壤中分离细菌时,要取较高的稀释度,否则菌落连成一片不能计数。
2.在土壤稀释分离操作中,每稀释10倍,最好更换一次移液管,使计数准确。
3.放线菌的培养时间较长,故制平板的培养基用量可适当增多。
五、实验报告
1.记录土壤稀释分离结果,并计算出每克土壤中的细菌、放线菌和霉菌的数量。
计算方法:
选择长出菌落数30~300之间的培养皿进行计数,按以下公式:
总菌数/g=同一稀释度几次重复的菌落平均数×稀释倍数
2.分别记录平板划线、斜面接种的结果,并自我评价。
3.比较两种细菌穿刺接种的结果,并进行分析。
七、问题和思考
1.在测定土壤微生物含量中,除混菌法外还可用什么方法?
2.试设计实验,从土壤中分离出酵母菌,并进行计数。
实验4显微镜油浸系物镜的使用
一、实验目的和内容
目的:
复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术,了解油浸系物镜的基本原理,掌握油浸系物镜的使用方法。
内容:
1.学习油浸系物镜的使用方法。
2.用油镜观察枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片。
二、实验材料和用具
枯草芽孢杆菌(Bacillussubitilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的染色装片。
香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸。
三、操作步骤
(一)观察前的准备
1.将显微镜置于平稳的实验台上,镜座距实验台边沿约为4cm。
坐正,练习用左眼观察。
2.调节光源:
将低倍物镜转到工作位置,把光圈完全打开,聚光器升至与载物台相距约1mm左右。
转动反光镜采集光源,光线较强的天然光源宜用平面镜,光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜,对光至视野内均匀明亮为止。
观察染色装片时,光线宜强;观察末染色装片时,光线不宜太强。
(二)低倍镜观察染色装片
首先上升镜简,将枯草芽孢杆菌染色装片置于载物台上,用标本夹夹住,将观察位置移至物镜正下方,物镜降至距装片0.5cm处,适当缩小光圈然后两眼从目镜观察,转动粗调节器使物镜逐渐上升(或使镜台下降)至发现物像时,改用细调节器调节到物像清楚为止。
移动装片,把合适的观察部位移至视野中心。
(三)高倍镜观察
眼睛离开目镜从侧面观察,旋转转换器,将高倍镜转至正下方,注意避免镜头与玻片相懂。
再由目镜观察,仔细调节光圈,使光线的明亮度适宜。
用细调节器校正焦距使物镜清晰为止。
将最适宜观察部位移至视野中心,绘图。
不要移动装片位置,准备用油镜观察。
(四)油镜观察
1.提起镜筒约2cm,将油镜转至正下方。
在玻片标本的镜检部位(镜头的正下方)滴一滴香柏油。
2.从侧面注视,小心慢慢降下镜筒,使油镜浸在油中至油圈不扩大为止,镜头几乎与装片接触,但不可压及装片,以免压碎玻片,损坏镜头。
3.将光线调亮,左眼从目镜观察,用粗调节器将镜筒徐徐上升(切忌反方向旋转),当视野中有物像出现时,再用细调节器校正焦距。
如因镜头下降未到位或镜头上升太快末找到物像,必须再从侧面观察,将油镜降下,重复操作直至物像看清为止。
仔细观察并绘图。
4.再次观察提起镜筒,换上金黄色葡萄球菌染色装片,依次用低倍镜、高倍镜和油镜观察,绘图。
重复观察时可比第一次少加香柏油。
(五)镜检完毕后的工作
1.移开物镜镜头。
2.取出装片。
3.清洁油镜,油镜使用完毕后,须用擦镜纸擦去镜头上的香柏油,再用擦镜纸沾少许二甲苯擦掉残留的香柏油,最后再用干净的擦镜纸擦干残留的二甲苯。
4.擦净显微镜,将各部分还原。
将接物镜呈“八”字形降下,不可使其正对聚光器,同时降下聚光器,转动反光镜使其镜面垂直于镜座。
最后套上镜罩,对号放入镜箱中,置阴凉干燥处存放。
四、注意事项
1.使用油镜必须按先用低倍镜和高倍镜观察,再用油镜观察
2.下降镜头时,一定要从侧面注视,切忌用眼睛对着目镜,边观察边下降镜头的错误操作,以免压碎玻片而损坏镜头。
3.使用二甲苯擦镜头时,注意二甲苯不能过多,以防溶解固定透镜的树脂。
4.注意保持显微镜的洁净,对金属部分要用软布擦拭,擦镜头必须用擦镜纸,切勿用手或用普通布、纸等,以免损坏镜头。
五、实验报告
分别绘出在高倍镜和油镜下观察到的枯草芽孢杆菌及金黄色葡萄球菌的形态,注明物镜放大倍数和总放大率。
六、问题和思考
1.用油镜便于观察细菌的依据是什么?
2.使用油镜应特别注意哪些问题?
3.当物镜从低倍镜转到高倍镜和油镜时,对照明度有何要求?
应如何调节?
油镜的基本原理
(一)油镜头的辨认
油镜头上常刻有OI(oilimmersion)或HI(homogeneneousimmersion)字样,有的还刻有一圈红线或黑线标记,在低倍物镜、高倍物镜和油镜3物镜中,油镜的放大倍数和数值孔径(numericalaperture)最大,而工作距离最短
(二)显微镜的分辨率
显微镜性能的优劣不单是看它的总放大倍数,更重要的是看它分辩率的大小。
分辨率是指显微镜能分辨出物体两点间最小距离(D)的能力。
D值愈小表明分辨率愈高。
D值与光线的波长(λ)成正比,与物镜的数值孔径(NA)成反比。
从上式可看出,缩短光波长和增大数值孔径都可提高分辨率。
数值孔径指光线投射到物镜上的最大角度(称镜口角,α)的一半正弦与介质折射率(n)的乘积;
影响数值孔径大小的因数,一是镜口角,二是介质的折射率。
当镜与装片之间的介质为空气时,由于空气(n=1.52)的折射率不同,光线会发生折射,不仅使进入物镜的光线减少,降低了视野的照明度,而且会减少镜口角(图5—2A)。
当以香柏油(n=1.515)为介质时,由于它的折射率与玻璃相近,光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射(图5—2B),不仅增加了视野的照明度,更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。
可见光的波长平均为0.55μm。
当使用数值孔径为0.65的高倍镜时,它能辨别两点之间的距离为0.42μm;而使用数值孔径为1.25的油镜时,能辨别两点之间的距离则为0.22μm。
实验5细菌的革兰氏染色
目的:
初步掌握细菌涂片方法及革兰氏染色法步骤。
内容:
1.制作细菌染色装片。
2.进行革兰氏染色法操作。
二、实验材料和用具
苏云金杆菌或金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(E.coli)菌液,待测菌菌液1~2种。
革兰氏染色液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石炭酸复红液等)、香柏油、二甲苯;显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯。
三、操作步骤
(一)制片
1.涂菌用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环,用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而均匀、直径约lcm的菌膜。
涂菌后将接种环火焰灭菌。
2.干燥于空气中自然干燥。
亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥(温度不宜过高)。
3.固定目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上,便于染料着色,常用加热法,即将细菌涂片膜向上,通过火焰3次,以热而不烫为宜,防止菌体烧焦、变形。
此制片可用于染色。
(二)染色
l.初染于制片上滴加结晶紫染液,染lmin后,用水洗去剩余染料。
2.媒染滴加卢戈氏碘液,lmin后水洗。
3.脱色滴加95%乙醇脱色,摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止(根据涂片之厚薄需时30s至lmin),水洗。
4.复染滴加石炭酸复红液复染lmin,水洗。
5.滤纸吸干,油镜镜检。
(三)结果
革兰氏阳性菌染成蓝紫色,革兰氏阴性菌染成淡红色。
(四)检测未知菌
用以上方法对未知菌进行革兰氏染色,并绘图、记录染色结果。
四、注意事项
1.涂片务求均匀,切忌过厚。
2.在染色过程中,不可使染液干涸。
3.脱色时间十分重要,过长,则脱色过度,会使阳性菌被染成阴性菌;脱色不够,则会使阴性菌被染成阳性菌。
4.老龄菌因体内核酸减少,会便阳性菌被染成阴性菌,故不能选用。
五、实验报吉
(一)绘图
1.大肠杆菌革兰氏染色视野图。
2.金黄色葡萄球菌或苏云金杆菌革兰氏染色视野图。
(二)记录革兰氏染色法法步骤,并进行结果分析。
(三)未知菌的检测结果。
六、问题和思考
1.涂片后为什么要进行固定?
固定时应注意什么?
2.什么是革兰氏染色法?
染色过程应注意什么?
3.试分析革兰氏染色法在细菌分类中的意义。
实验6放线菌的形态观察
一、实验目的和内容
目的:
辨认放线菌的营养菌丝、气生菌丝、孢子丝、孢子的形态;学习放线菌的观察方法。
内容:
用水封计法、玻璃纸法、印片法观察放线菌的形态特征。
二、实验材料和用具
细黄链霉菌(streptomycsmicuoflavus)又称5406的培养平皿,棘孢小单孢菌(Micromonosporaechinospora)的玻璃纸培养平皿。
0.1%美蓝染色液、石炭酸复红染色液;
盖玻片、载玻片、镊子、接种环、显微镜、涂布器、玻璃纸、打孔器。
三、操作步骤
(一)观察自然生长状态的放线菌
用镊
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