整理三聚氰胺检测方法.docx
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整理三聚氰胺检测方法
MARS-HPLC测定不同基质中的三聚氰胺
摘要:
MARS(Multi-adsorptionReverseSPE)样品前处理方法是一种快速、简便、安全、成本低廉的样品前处理分析方法,将该方法用于奶制品、鸡蛋和鱼肉等不同样本中的三聚氰胺的提取,主要步骤是使用0.1M的盐酸、6%的磺基水杨酸和混合型阴离子交换树脂(CleanertPAX)在离心管中同时进行蛋白沉淀和基质分散固相萃取,取离心上清液过滤后用于HPLC测定。
本文对MARS方法用于不同样品前处理的稳定性和可靠性进行了分析和评价,结果表明MARS-HPLC方法用于不同样品中三聚氰胺的检测具有简便、快捷、准确的优点,适合大批量样品的测定。
关键词:
三聚氰胺;MARS;混合型阴离子交换树脂;强阳离子交换色谱柱
1实验部分
1.1 仪器与试剂
仪器:
L6-1系列高效液相色谱仪(北京普析通用公司),三聚氰胺检测样品前处理方法包:
(包括盐酸0.1mol/L,6%磺基水杨酸,混合型阴离子交换填料CleanertPAX,(北京艾杰尔科技有限公司);VenusilSCX-M,5μm,4.6×250mm强阳离子交换色谱柱(科技部“十一五”国家支撑计划成果,北京艾杰尔科技有限公司)及保护柱;针式过滤器(AgelaClarify,0.22/0.45µm,尼龙);三聚氰胺标准品(>99%),均质器(T25Basic,IKA)。
试剂:
所用乙腈为色谱纯;磷酸二氢钾为分析纯;水为超纯水。
1.2色谱条件
色谱柱:
VenusilSCX-M色谱柱,4.6×250mm,5μm,300Å;(科技部“十一五”国家支撑计划成果,北京艾杰尔科技有限公司);流动相:
磷酸二氢钾(0.050mol/L):
乙腈=70:
30;流速:
1.5mL/min;柱温:
室温;波长:
240nm;实验中若非特别注明,进样量均为20μL。
1.3三聚氰胺标准曲线工作液的配制
1.3.1三聚氰胺标准贮备溶液:
1.00×103mg/L。
称取100mg三聚氰胺标准物质(准确至0.1mg),用水完全溶解后,用水定容至100mL,混匀。
1.3.2标准工作溶液
1.3.2.1标准溶液A:
2.00×102mg/L。
准确移取20.0mL三聚氰胺标准贮备溶液(1.3.1),置于100mL容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀,待用。
1.3.2.2标准溶液B:
0.50mg/L。
准确移取0.25mL标准溶液A(1.3.2.1),置于100mL容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀,待用。
1.3.2.3标准工作液的配制
按表1分别移取不同体积的标准溶液A(1.3.2.1)于容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀,0.45μm滤膜过滤,待测。
按表2分别移取不同体积的标准溶液B(1.3.2.2)于容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀,0.45μm滤膜过滤,待测。
表1标准工作液配制(高浓度)
标准溶液A体积(mL)
0.1
0.25
1.00
(二)建设项目环境影响评价的工作等级1.25
5.00
(二)环境保护法律法规体系12.5
定容体积(mL)
1.依法评价原则;100
100
(3)机会成本法100
6.建设项目环境影响评价文件的其他要求50
②既包括天然的自然环境,也包括人工改造后的自然环境。
50
50
(二)安全预评价范围标准工作液浓度(mg/L)
报告内容有:
建设项目基本情况、建设项目所在地自然环境社会环境简况、环境质量状况、主要环境保护目标、评价适用标准、工程内容及规模、与本项目有关的原有污染情况及主要环境问题、建设项目工程分析、项目主要污染物产生及预计排放情况、环境影响分析、建设项目拟采取的防治措施及预期治理效果、结论与建议等。
0.20
0.50
2.00
5.00
20.0
1.建设项目环境影响评价文件的报批50.0
表2标准工作液配制(低浓度)
2.间接市场评估法标准溶液B体积(mL)
1.00
2.00
4.00
20.0
40.0
定容体积(mL)
100
100
100
100
100
标准工作液浓度(mg/L)
0.005
0.01
0.02
0.10
0.20
1.4 试样的制备
1.4.1牛奶样品
取15.0g牛奶置于25mL容量瓶中,加入0.1mol/L盐酸10mL,加入6%磺基水杨酸3.0mL,混合型阴离子交换树脂1.0g(CleanertPAX),用0.1mol/L盐酸定容至25mL,涡旋振荡2min,8000r/min离心5min,取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。
1.4.3鸡蛋样品
取10.0g混合均匀的鸡蛋置于25mL容量瓶中,加入0.1mol/L盐酸10mL,均质后全部转入25mL容量瓶,加入6%磺基水杨酸3.0mL,混合型阴离子交换树脂1.0g(CleanertPAX),用0.1mol/L盐酸定容至25mL,涡旋振荡2min,8000r/min离心5min,取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。
1.4.4鱼肉样品
取5.0g剁碎的鱼脊背肉,加入0.1mol/L盐酸10mL,均质后全部转入25mL容量瓶,加入6%磺基水杨酸3.0mL,混合型阴离子交换树脂1.0g(CleanertPAX),用0.1mol/L盐酸定容至25mL,涡旋振荡2min,8000r/min离心5min,取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。
2、结果与讨论
2.1线性范围
低浓度曲线取0.005mg/L,0.01mg/L,0.02mg/L,0.1mg/L,0.2mg/L5个浓度的标准样品测试,所得标准曲线如下图:
图1低浓度标样线性
高浓度曲线取0.2mg/L,0.5mg/L,2mg/L,5mg/L,20mg/L,50mg/L6个浓度的标准样品测试,所得标准曲线如下图:
图2高浓度标样线性
结果表明:
本方法在0.005mg/L~50.0mg/L和范围内,三聚氰胺峰面积和浓度有良好的线性关系
2.2重复性
取浓度为5mg/L的标准品溶液,分别进样20μL,进样6次,计算保留时间及峰面积的RSD(相对标准偏差)。
结果列于表3中
表3保留时间和峰面积的重现性(精密度)
1#
2#
3#
4#
5#
6#
平均值
RSD%
保留时间min
6.817
6.833
6.817
6.817
6.858
6.808
6.825
0.26
峰面积
μAu·s
571360
574492
569813
572187
574525
575593
572995
0.39
图3重复性谱图
从表3和图3看出,该方法结果重复性良好。
2.3检出限
以曲线最低点0.005mg/L的谱图(见图4)为准,以噪声对应峰高估算检出限为0.0032mg/L(S/N=3)。
图4检出限谱图
2.4实际样品测试
2.4.1牛奶样品
2.4.1.1空白牛奶样品测试谱图如图5:
图5空白牛奶样品谱图
2.4.1.2牛奶加标回收率
分别在空白牛奶样品中加入相当于1.0mg/Kg,5.0mg/Kg和10.0mg/Kg的三聚氰胺标准品,测试谱图如图6所示。
图6牛奶中添加不同浓度的三聚氰胺谱图
根据此谱图测得三聚氰胺的加标回收率如表4所示
表4 牛奶中三聚氰胺加标回收率试验结果
样品名称
加标量(mg/Kg)
测得量(mg/Kg)
回收率(%)
牛奶空白
0.00
-
-
1#
1.00
1.05
105.0%
2#
5.00
5.18
103.6%
3#
10.00
9.04
90.4%
结果表明,MARS前处理方法对牛奶中三聚氰胺提取具有良好的回收率,杂质去除效果好;HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。
2.4.2 鱼肉样品
2.4.2.1空白鱼肉样品测试谱图如图7:
图7空白鱼肉样品谱图
2.4.2.2 鱼肉样品加标回收率
分别在空白鱼肉样品中加入相当于1.0mg/kg、5.0mg/kg和10.0mg/kg的三聚氰胺标准品,测试谱图如图8和图9所示。
图8鱼肉中添加三聚氰胺1.0mg/kg谱图
图9 鱼肉中添加三聚氰胺10.0mg/kg谱图
根据此谱图测得鱼肉中三聚氰胺加标回收率如表4所示
表5 鱼肉中三聚氰胺样品加标回收率试验结果
样品名称
加标量(mg/kg)
测得量(mg/kg)
回收率(%)
鱼肉空白
0.00
-
-
1#
1
0.98
98.0%
3#
5
5.81
116.2%
5#
10
9.67
96.7%
结果表明,MARS前处理方法对鱼肉中三聚氰胺提取具有良好的回收率,杂质去除效果好;HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。
2.4.3鸡蛋
2.4.3.1空白鸡蛋样品测试谱图如图10所示:
图10空白鸡蛋样品谱图
2.4.1.2鸡蛋加标回收率
分别在样品中加入相当于1.0mg/Kg,5.0mg/Kg和10.0mg/Kg的三聚氰胺标准品,测试谱图如图11所示。
图11鸡蛋中添加三聚氰胺5.0mg/kg
鸡蛋中三聚氰胺的加标回收率如表6所示
表6 鸡蛋中三聚氰胺加标回收率试验结果
样品名称
加标量(mg/kg)
测得量(mg/kg)
回收率(%)
鸡蛋空白
0.00
-
-
1#
1
0.89
89.0%
3#
5
5.55
111.0%
5#
10
10.48
104.8%
结果表明,MARS前处理方法对鸡蛋中三聚氰胺提取具有良好的回收率,杂质去除效果好;HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。
3结论
上述实验结果表明,采用MARS样品前处理方法,以混合型阴离子交换填料CleanertPAX作为萃取介质,可以快速准确的处理牛奶、鱼肉和鸡蛋样本,同时使用阳离子交换色谱柱进行HPLC分析,整个分析方法应用于不同样品中三聚氰胺的检测,具有检测限低,精密度高,线性范围宽和回收率高等优点,完全可以满足三聚氰胺的快速检测要求。
三聚氰胺标准贮备溶液:
1.00×10mg/L。
称取100mg三聚氰胺标准物质(准确至0.1mg),用水完全溶解后,100mL容量瓶中定容至刻度,混匀,4℃条件下避光保存,有效期为1个月。
标准工作溶液:
使用时配制。
标准溶液A:
2.00×10mg/L。
准确移取20.0mL三聚氰胺标准贮备溶液(4.5),置于100mL容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀。
标准溶液B:
0.50mg/L。
准确移取0.25mL标准溶液A(4.6.1),置于100mL容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀。
按表1分别移取不同体积的标准溶液A(4.6.1)于容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀。
按表2分别移取不同体积的标准溶液B(4.6.2)于容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀。
磷酸盐缓冲液:
0.05mol/L。
称取6.8g磷酸二氢钾(4.3)(准确至0.01g),加水800mL完全溶解后,用磷酸(4.2)调节pH至3.0,用水稀释至1L,用滤膜(4.9)过滤后备用。
一次性注射器:
2mL。
滤膜:
水相,0.45μm。
针式过滤器:
有机相,0.45μm。
具塞刻度试管:
50mL。
仪器液相色谱仪:
配有紫外检测器/二极管阵列检测器。
分析天平:
感量0.0001g和0.01g。
pH计:
测量精度±0.02。
溶剂过滤器
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