气相色谱分析PPT课件.ppt
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2023/6/22,第二章气相色谱分析,Gaschromatographicanalysis,GC,教学目标及要求1.掌握气相色谱仪的组成和分析流程;2.掌握色谱分离原理及分离基本方程式;3.掌握下列基本概念:
色谱峰、基线、保留值、分离度、分配系数和分配比;4.掌握气相色谱法定性和定量的依据及分析方法;5.掌握用相对极性法选择固定液;6.了解四个常见检测器的构造及特性;7.理解塔板理论和速率理论;8.了解常用的气相色谱担体、固定相、固定液的种类及选择原则;9.了解气相色谱分析操作条件的选择;10.了解气相色谱法的应用。
重点:
1、色谱流出曲线和有关术语,相关计算。
2、气相色谱法的基本原理及分离基本方程式。
3、气相色谱定性分析方法。
4、定量分析方法中校正因子、归一化法及内标法的计算。
难点:
色谱流出曲线和有关术语,气相色谱定性、定量分析方法。
2023/6/22,一、概述(由来、分类和作用)Generalization二、气相色谱仪Gaschromatographicinstruments三、气相色谱仪流程Processofgaschromatograph四、气相色谱主要部件Mainassemblyofgaschromatograph五、基本概念Basicconception,第一节气相色谱法概述,Generalizationofgaschromatographicinstruments,2023/6/22,一、色谱法的由来、分类和作用,1.由来色谱法是混合物最有效的分离、分析方法。
1906年由俄国植物学家茨维特(Tswett)创立的,他在研究植物叶子的色素成分时,将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内,然后加入石油醚使其自由流下,结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。
当时Tswett把这种色带叫做“色谱”(Chromatography)这种方法因此得名为色谱法(当时使用的色谱原型装置如下图)。
以后此法逐渐应用于无色物质的分离,“色谱”二字虽已失去原来的含义,但仍被人们沿用至今。
2023/6/22,2023/6/22,在色谱法中:
(1)将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相称为固定相。
(2)自上而下运动的一相(一般是气体或液体)称为流动相。
(3)装有固定相的管子(玻璃管或不锈钢管)称为色谱柱。
当含有混合物样品的流动相(气体、液体或超临界流体)经过固定相时,就会与固定相发生作用,由于各组分在性质和结构上的差异,与固定相相互作用的类型、强弱也有差异,因此在同一推动力的作用下,不同组分在固定相滞留时间长短不同,从而按先后不同的次序从固定相中流出。
各个单组份物质可分别进行定性、定量分析。
20世纪50年代,色谱发展最快(原因:
1.一些新型色谱技术的发展;2.复杂组分分析发展的要求。
)1937-1972年中有12个Nobel奖是有关色谱研究的!
在Tswett提出色谱概念后的20多年里没有人关注这一伟大的发明。
直到1931年德国的Kuhn和Lederer才重复了Tswett的某些实验,用氧化铝和碳酸钙分离了-,-,和-胡萝卜素,此后用这种方法分离了60多种这类色素。
Martin和Synge在1940年提出液液分配色谱法(LiquidLiquidPartitionChromatography),即固定相是吸附在硅胶上的水,流动相是某种有机溶剂。
1941年马丁Martin和辛吉Syngee提出用气体代替液体作流动相的可能性,11年之后James和Martin发表了从理论到实践比较完整的气液色谱方法(GasLiquidChromatography),因而获得了1952年的诺贝尔化学奖。
在此基础上,1957年Golay开创了开管柱气相色谱法(OpenTubularColumnChromatography),习惯上称为毛细管柱气相色谱法(CapillaryColumnChromatography)。
1956年VanDeemter等在前人研究的基础上发展了描述色谱过程的速率理论,1965年Giddings总结和扩展了前人的色谱理论,为色谱的发展奠定了理论基础。
另一方面早在1944年Consden等就发展了纸色谱(PC),1949年Macllean等在氧化铝中加入淀粉粘合剂制作薄层板使薄层色谱法(TLC)得以实际应用,而在1956年Stahl开发出薄层色谱板涂布器之后,才使TLC得到广泛地应用。
在60年代末把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱,出现了高效液相色谱(HPLC)。
80年代初毛细管超临界流体色谱(SFC)得到发展,但在90年代后未得到较广泛的应用。
而在80年代初由Jorgenson等集前人经验而发展起来的毛细管电泳(CE),在90年代得到广泛的发展和应用。
同时集HPLC和CZE优点的毛细管电色谱在90年代后期受到重视。
到21世纪色谱科学将在生命科学等前沿科学领域发挥不可代替的重要作用。
2023/6/22,2.色谱法分类:
1.按流动相和固定相的状态分类,2.按使用领域不同对色谱仪的分类,2023/6/22,2.气相色谱法分类:
2023/6/22,3.色谱分离过程,混合组分的分离过程及检测器对各组份在不同阶段的响应,t0,t2,t1,2023/6/22,混合组分的分离过程及检测器对各组份在不同阶段的响应,2023/6/22,3.作用色谱分离过程,色谱分离过程是在色谱柱内完成的。
填充柱色谱:
气固(液固)色谱和气液(液液)色谱,两者的分离机理不同。
在色谱分离中,如果将样品注入色谱柱头,样品本身很快就会在固定相和流动相之间达到分配平衡。
当流动相流过时,样品将在流动相和新的固定相上又达到分配平衡。
同时,原来仍在固定相中的样品与新的流动相之间也会形成新的分配平衡。
随着流动相不断的流过,它们就会携带发生分配平衡后而存在于流动相的样品沿着柱子向前移动。
气固(液固)色谱的固定相:
多孔性的固体吸附剂颗粒。
固体吸附剂对试样中各组分的吸附能力的不同。
气液(液液)色谱的固定相:
由担体和固定液所组成。
固定液对试样中各组分的溶解能力的不同。
气相色谱分离原理:
P9气固色谱的分离机理:
吸附与脱附的不断重复过程气液色谱的分离机理:
气液(液液)两相间的反复多次分配过程。
2023/6/22,色谱法的特点,
(1)分离效率高复杂混合物,有机同系物、异构体。
手性异构体。
(2)灵敏度高可以检测出g.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。
(3)分析速度快一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。
(4)应用范围广气相色谱:
沸点低于400的各种有机或无机试样的分析。
液相色谱:
高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。
不足之处:
被分离组分的定性较为困难。
2023/6/22,二.气相色谱仪,现在,有近百厂家、提供数百种型号的气相色谱仪,价格在几万到几十万。
过去几十年内,色谱仪器得到了极大的发展,这主要归于:
1970s电子积分仪及计算机数据处理装置的发展;1980s计算机技术对仪器各类参数的自动控制。
如柱温、流速、自动进样等。
随着这些技术的发展,仪器性价比大幅提高。
其中,GC最重要的发展是开管柱的引入,使含有数百种混合物样品得以分离!
2023/6/22,岛津GC-14C气相色谱仪,2023/6/22,2023/6/22,上海分析仪器厂GC122型气相色譜仪,2023/6/22,色-质谱联用仪,2023/6/22,三、气相色谱结构流程,1-载气钢瓶;2-减压阀;3-净化干燥管;4-针形阀;5-流量计;6-压力表;7-进样器;8-色谱柱;9-热导检测器;10-放大器;11-温度控制器;12-记录仪;,2023/6/22,结构流程,2023/6/22,四、气相色谱仪主要部件mainassemblyofgaschromatograph,载气系统(Carriergassupply)气路系统:
获得纯净、流速稳定的载气。
包括压力计、流量计及气体净化装置。
载气:
要求化学惰性,不与有关物质反应。
载气的选择除了要求考虑对柱效的影响外,还要与分析对象和所用的检测器相配。
常用的载气有:
氢气、氮气、氦气;,2023/6/22,净化干燥管:
去除载气中的水、氧、有机物等杂质(依次通过分子筛、活性炭等);载气流速控制:
压力表、流量计、针形稳压阀,控制载气流速恒定。
压力表:
多为两级压力指示:
第一级,钢瓶压力(总是高于常压。
对填充柱:
10-50psi(Poundspersquareinch);对开口毛细柱:
1-25psi);第二级,柱头压力指示;(1psi=6894.76pa)流量计:
在柱头前使用转子流量计(Rotometer),但不太准确。
通常在柱后,以皂膜流量计(Soap-bubblemeter)测流速。
许多现代仪器装置有电子流量计,并以计算机控制其流速保持不变。
2023/6/22,2.进样装置(Sampleinjectionsystem),进样装置:
进样器+气化室;气体进样器(六通阀):
推拉式和旋转式两种。
试样首先充满定量管,切入后,载气携带定量管中的试样气体进入分离柱;,2023/6/22,常以微量注射器(穿过隔膜垫)或六通阀将液体样品注入气化室(汽化室温度比样品中最易蒸的物质的沸点高约50oC),通常六通阀进样的重现性好于注射器。
进样要求:
进样量或体积适宜;“塞子”式进样。
一般柱分离进样体积在十分之几至20L,对毛细管柱分离,体积约为10-3L,此时应采用分流进样装置来实现。
体积过大或进样过慢,将导致分离变差(拖尾)。
2023/6/22,液体进样器:
不同规格的专用注射器,填充柱色谱常用1uL;10L;毛细管色谱常用1L;新型仪器带有全自动液体进样器,清洗、润冲、取样、进样、换样等过程自动完成,一次可放置数十个试样。
气化室:
将液体试样瞬间气化的装置。
无催化作用。
2023/6/22,3.色谱柱(分离柱),色谱柱:
色谱仪的核心部件。
柱材质:
不锈钢管或玻璃管融熔石英等,内径3-6毫米。
长度可根据需要确定。
柱填料:
粒度为40-60、60-80或80-100目的色谱固定相。
气-固色谱:
固体吸附剂气-液色谱:
担体+固定液柱制备对柱效有较大影响,填料装填太紧、颗粒过细、使柱压降增大,对操作不利;反之空隙体积大,柱效低。
填充柱:
多为U形或螺旋形,内径36mm,长13m,内填固定相;,2023/6/22,开管柱:
分为涂壁、多孔层和涂载体开管柱。
内径0.10.5mm长达几十至100m。
通常弯成直径1030cm的螺旋状。
开管柱因渗透性好、传质快,因而分离效率高(n可达106)、分析速度快、样品用量小。
过去是填充柱占主要,但现在,这种情况正在迅速发生变化,除了一些特定的分析之外,填充柱将会被更高效、更快速的开管柱所取代!
柱温:
是影响分离的最重要的因素。
其变化应小0.xoC。
选择柱温主要是考虑样品待测物沸点和对分离的要求。
柱温通常要等于或略高于样品的平均沸点(分析时间20-30min);对宽沸程的样品,应使用程序升温方法。
2023/6/22,4.检测系统,色谱仪的眼睛通常由检测元件、放大器、显示记录三部分组成;被色谱柱分离后的组分依次进入检测器,按其浓度或质量随时间的变化,转化成相应电信号,经放大后记录和显示,给出色谱图;检测器:
广普型对所有物质均有响应;专属型对特定物质有高灵敏响应;浓度型:
检测的是载气中组分浓度的瞬间变化,即响应值与浓度成正比。
质量型:
检测的是载气中组分进入检测器中速度变化,即响应值与单位时间进入检测器的量成正比。
2023/6/22,1.热导检测器(Thermalconductivitydetector,TCD):
是基于各种物质有不同的导热系数而设计的检测器。
2.氢火焰离子化检测器(Flameionizeddetector,FID):
是气相色谱中最常用的一种检测器。
它的敏感度高,线性范围宽,易于掌握,应用范围广,特别适合于毛细管气相色谱使用。
3.电子捕获检测器(Electroncapturedetector,ECD):
是一种用Ni或氖做放射源的离子化检测器,它是气相色谱检测器中灵敏度最高的一种选择性检测器,在气相色谱仪中应用范围仅次于TCD和FID,占第三位。
4.火焰光度检测器(Flamephotometricdetector,FPD):
是基于样品在富氢火焰中燃烧,使含硫、磷化合物经燃烧后又被氢还原而得到特征光谱的检测器5.氮磷检测器(NPD)也称热离子检测器(Thermionicdetector,TID):
是基于样品在富氢火焰中燃烧,使含硫、磷化合物经燃烧后又被氢还原而得到特征光谱的检测器6.原子发射检测器(AtomicemissionDetector,AED)7.硫荧光检测器(SulfurchemiluminescenceDetector,SCD)根据检测器的响应原理,可将其分为浓度型和质量型检测器。
常用的气相色谱的检测器:
2023/6/22,5.温度控制系统,温度是色谱分离条件的重要选择参数;气化室、分离室、检测器三部分在色谱仪操作时均需控制温度;气化室:
保证液体试样瞬间气化;检测器:
保证被分离后的组分通过时不在此冷凝;,分离室:
准确控制分离需要的温度。
当试样复杂时,分离室温度需要按一定程序控制温度变化,各组分在最佳温度下分离;,2023/6/22,程序升温与恒温对分离的影响比较,2023/6/22,五、基本概念P6,1流出曲线和色谱峰2基线、噪音和漂移3保留值:
色谱定性参数4色谱峰的区域宽度:
色谱柱效参数,2023/6/22,1流出曲线和色谱峰,流出曲线(色谱图):
电信号强度随时间变化曲线色谱峰:
流出曲线上突起部分,2023/6/22,不对称因子,fs在0.951.05之间,fs小于0.95,fs大于1.05,2023/6/22,2基线、噪音和漂移,基线:
当没有待测组分进入检测器时,反映检测器噪音随时间变化的曲线(稳定平直直线)噪音:
仪器本身所固有的,以噪音带表示(仪器越好,噪音越小)漂移:
基线向某个方向稳定移动(仪器未稳定造成),2023/6/22,3保留值:
色谱定性参数,
(1)时间表示的保留值保留时间(retentiontime)tR:
从进样开始到组分出现浓度极大点时所需时间,即组分通过色谱柱所需要的时间死时间(deadtime)tm:
不被固定相溶解或吸附的组分的保留时间(即组分在流动相中的所消耗的时间),或流动相充满柱内空隙体积占据的空间所需要的时间,又称流动相保留时间。
调整保留时间(adjustedretentiontime)tR:
组分的保留时间与死时间之差值,即组分在固定相中滞留的时间,2023/6/22,保留体积(retentionvolume)VR:
从进样开始到组分出现浓度极大点时所消耗的流动相的体积,死体积(deadvolume)Vm:
不被保留的组分通过色谱柱所消耗的流动相的体积,又指色谱柱中未被固定相所占据的空隙体积,即色谱柱的流动相体积(包括色谱仪中的管路、连接头的空间、以及进样器和检测器的空间)。
3,
(2)用体积表示的保留值,F0色谱柱出口的载气体积流量,2023/6/22,调整保留体积(adjustedretentionvolume)VR:
保留体积与死体积之差,即组分停留在固定相时所消耗流动相的体积,相对保留值(relativeretention)ri,s(选择性系数):
调整保留值之比,2023/6/22,(3)相对保留值r21:
衡量色谱柱选择性的指标,组分2与组分1调整保留值之比:
r21=tR2/tR1=VR2/VR1,相对保留值只与柱温和固定相性质有关,与其他色谱操作条件无关,如柱径,柱长,填充情况及流动相的流速等无关。
它表示了固定相对这两种组分的选择性。
是色谱中广泛使用的定性数据。
选择因子21,2023/6/22,4色谱峰的区域宽度:
色谱柱效参数,峰宽(peakwidth)W:
正态分布色谱曲线两拐点切线与基线相交的截距,标准差:
对应0.607h处峰宽的一半.注:
小,峰窄,柱效高半峰宽(peakwidthathalfheight)W1/2:
峰高一半处所对应的峰宽,注:
除了用于衡量柱效,还可以计算峰面积,用来衡量色谱峰宽度的参数,有三种表示方法:
2023/6/22,5色谱流出曲线的数学描述,色谱峰为正态分布(n=103-106)时,由热力学推导,色谱流出曲线上的浓度与时间的关系为:
c:
色谱流出曲线上任意一点样品的浓度;n:
理论塔板数;m:
溶质的质量;VR:
溶质的保留体积,即从进样到色谱峰极大点出现时通入色谱柱载气的体积;V:
在色谱流出曲线上任意一点的保留体积。
2023/6/22,从色谱流出曲线,可以得出许多信息,1.根据色谱峰的个数,可以判断样品中所含组分的最少个数。
2.根据色谱峰的保留值(或位置),可进行定性分析。
3.根据色谱峰下的面积和峰高可进行定量分析。
4.色谱峰的保留值和色谱峰的区域宽度,是评价色谱柱分离效能的依据。
5.色谱峰两峰的距离,是评价固定相(和流动相)选择是否合适的依据。
2023/6/22,一、基本原理postulate二、塔板理论Platetheory三、速率理论Ratetheory四、分离度resolution,第二节色谱理论,Basictheory,色谱分析的目的是将样品中各组分彼此分离,组分要达到完全分离,两峰间的距离必须足够远,两峰间的距离是由组分在两相间的分配系数决定的,即与色谱过程的热力学性质有关。
但是两峰间虽有一定距离,如果每个峰都很宽,以致彼此重叠,还是不能分开。
这些峰的宽或窄是由组分在色谱柱中传质和扩散行为决定的,即与色谱过程的动力学性质有关。
因此,要从热力学和动力学两方面来研究色谱行为。
2023/6/22,1.分配系数(partitionfactor)K,组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附,或溶解、挥发的过程叫做分配过程。
在一定温度下,组分在两相间分配达到平衡时的浓度(单位:
g/mL)比,称为分配系数,用K表示,即:
分配系数是色谱分离的依据。
基本原理P8,2023/6/22,分配系数K的讨论,一定温度下,组分的分配系数K越大,出峰越慢;试样一定时,K主要取决于固定相性质;每个组份在各种固定相上的分配系数K不同;选择适宜的固定相可改善分离效果;试样中的各组分具有不同的K值是分离的基础;某组分的K=0时,即不被固定相保留,最先流出。
2023/6/22,2.分配比(partitionratio)k,在实际工作中,也常用分配比来表征色谱分配平衡过程。
分配比是指,在一定温度下,组分在两相间分配达到平衡时的质量比:
1.分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数,随分离柱温度、柱压的改变而变化。
2.分配系数与分配比都是衡量色谱柱对组分保留能力的参数,数值越大,该组分的保留时间越长。
3.分配比可以由实验测得。
分配比也称:
容量因子(capacityfactor);容量比(capacityratio);,2023/6/22,3.容量因子与分配系数的关系,式中为相比(phaseratio)。
填充柱相比:
635;毛细管柱的相比:
501500。
容量因子越大,保留时间越长。
VM为流动相体积,即柱内固定相颗粒间的空隙体积;VS为固定相体积,对不同类型色谱柱,VS的含义不同;气-液色谱柱:
VS为固定液体积;气-固色谱柱:
VS为吸附剂表面容量;,2023/6/22,4.分配比与保留时间的关系P10,滞留因子(retardationfactor):
us:
组分在分离柱内的线速度;u:
流动相在分离柱内的线速度;两者速度之比为滞留因子RS,可以用质量分数表示:
若组分和流动相通过长度为L的分离柱,需要的时间分别为tR和tM,则:
由以上各式,可得:
tR=tM(1+k),2023/6/22,色谱理论,色谱理论需要解决的问题:
色谱分离过程的热力学和动力学问题。
影响分离及柱效的因素与提高柱效的途径,柱效与分离度的评价指标及其关系。
组分保留时间为何不同?
色谱峰为何变宽?
组分保留时间:
色谱过程的热力学因素控制;(组分和固定液的结构和性质)色谱峰变宽:
色谱过程的动力学因素控制;(两相中的运动阻力,扩散)两种色谱理论:
塔板理论和速率理论;,热力学理论:
塔板理论平衡理论动力学理论:
速率理论VanDeemter方程,2023/6/22,塔板理论的四个假设:
(1)在每一个平衡过程间隔内,平衡可以迅速达到;
(2)将载气看作成脉动(间歇)过程;每次进气一个塔板体积。
(3)样品和载气均加在第0号塔板上,且忽略样品沿柱方向的纵向扩散。
(4)分配系数在各塔板上是常数。
一、塔板理论-柱分离效能指标(1941,Martin、Synge提出),1.塔板理论(platetheory)半经验理论;将色谱分离过程比拟作蒸馏过程,将连续的色谱分离过程分割成多次的平衡过程的重复(类似于蒸馏塔塔板上的平衡过程);,假设单位质量m=1、k=1,塔板号0123,流出曲线成正态分布,2023/6/22,色谱柱长:
L理论塔板高度H为使组分在柱内两相间达到一次分配平衡所需要的柱长。
理论塔板数n组分流过色谱柱时,在两相间进行平衡分配的总次数。
则三者的关系为:
n=L/H理论塔板数与色谱参数之间的关系为:
保留时间包含死时间,在死时间内不参与分配!
2023/6/22,n理无量纲,上下单位必须一致。
2023/6/22,2.有效塔板数和有效塔板高度,单位柱长的塔板数越多,表明柱效越高。
用不同物质计算可得到不同的理论塔板数。
由于组分在tM时间内不参与柱内分配。
理论塔板数和理论塔板高度不能真实地反映柱效,需引入有效塔板数和有效塔板高度:
注:
n有效和L有效扣除了死时间更能真实地反映柱效。
2023/6/22,例:
在柱长为2m的5%的阿皮松柱、柱温为1000C,记录纸速度为2.0cm/min的色谱条件下,测定苯的保留时间为1.5min,半峰宽为0.20cm,求理论塔板数。
解:
注意:
计算n时上下单位一致,2023/6/22,3.塔板理论的特点和不足,成功处:
从热力学角度解释了色谱流出曲线的形状和浓度极大值对应的tR,阐明了保留值与K的关系,提出了评价柱效高低的n和H的计算式。
指出:
当色谱柱长度一定时,塔板数n越大(塔板高度H越小),被测组分在柱内被分配的次数越多,柱效能则越高,所得色谱峰越窄。
注意:
不同物质在同一色谱柱上的分配系数不同,用有效塔板数和有效塔板高度作为衡量柱效能的指标时,须在给定条件,指定组分测定时才有意义(应指明测定物质)。
2023/6/22,存在问题:
(1)做出了四个与实际不相符的假设,忽略了组分在两相中传质和扩散的动力学过程。
(2)柱效不能表示被分离组分的实际分离效果,当两组分的分配系数K相同时,无论该色谱柱的塔板数多大,都无法分离。
(3)塔板理论排除了一个重要参数流动相的线速度u,它只定性给出塔板高度的概念,却无法解释板高的影响因素。
即无法解释同一色谱柱在不同的载气流速下柱效不同的实验结果,也无法指出影响柱效的因素及提高柱效的途径。
2023/6/22,二、速率理论-影响柱效的因素,减小A、B、C三项可提高柱效;存在着最佳流速;A、B、C三项各与哪些因素有关?
吸收了塔板理论的有效成果H,并从动力学角度较好地解释了影响柱效的因素,1.速率方程(也称VanDeemter范.弟姆特方程式)H=A+B/u+Cu,H:
理论塔板高度,u:
载气的线速度(cm/s),2023/6/22,A涡流扩散项,A=2dpdp:
固定相的平均颗粒直径:
固定相的填充不均匀因子,产生原因:
载气携样品进柱,遇到来自固定相颗粒的阻力路径不同涡流扩散,流动方向不断地改变,因而形成紊乱的类似涡流的流动。
2023/6/22,也就是说:
固定相颗粒越小dp,填充的越均匀,A,H,柱效n。
表现在涡流扩散所引起的色谱峰变宽现象减轻,色谱峰较窄。
注意:
颗粒太小,柱压过高且不易填充均匀填充柱60100目空心毛细管柱(0.10.5mm),A=0,n理较高,
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